为研究体外定向诱导鸡胚精原干细胞（Spermatogonial stem cells, SSCs）向脂肪细胞分化的能力，取孵化16d的鸡胚睾丸，无菌获取SSCs，体外培养传代。采用不同诱导程序、不同组合的诱导剂（地塞米松、胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤（IBMX））诱导SSCs向脂肪细胞分化。结果显示SSCs被诱导7～21d后，分化成脂肪细胞，其中诱导程序⑥的诱导分化效果较好，分化率为85%。诱导剂联合协同作用的诱导效果极显著地(P<0.01)高于单独作用的诱导效果。诱导的脂肪细胞经特异性的油红O染色为阳性，并高表达脂肪细胞标志基因PPARγ。表明鸡胚胎精原干细胞（SSCs）体外培养传代后仍具有多向分化潜能，在特异性化学物质的诱导下，可被定向诱导分化为脂肪细胞。

本文研究了羔羊年龄、运输应激和重复超排对幼羔所获卵母细胞数量的影响，胚胎发育液中添加EDTA对幼羔体外胚胎发育能力的影响。结果表明：6～8周龄组幼羔超排的只均获卵数和可用卵数（60.8枚和58.2枚）显著高于12～14周龄组（27.3枚和26.0枚）（P<0.05）；运输应激不影响幼羔超排所获卵母细胞数量（P>0.05），但重复幼羔超排会显著降低所获卵母细胞数量（P<0.05）。在胚胎发育液中加入10μmol EDTA可显著提高幼羔体外早期胚胎的发育能力（P<0.05），并且将部分体外胚胎移植后成功产下健康后代。

摘要：戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（hepatitis E virus ，HEV）引起的一种人兽互传病毒性肝炎，主要经消化道传播，猪等多种与人类密切接触的动物均可感染。为了解屠宰商品猪肝脏中HEV的感染情况，从北京、河北和河南的屠宰场共采集了581头屠宰猪的肝脏，猪源分别来自黑龙江、吉林、辽宁、河北、北京等地的集约化猪场，河南的个体散养户和集约化猪场饲养的商品猪。每头猪取样两份，一份固定，做石蜡切片，用抗-人HEV抗体做肝脏中HEV免疫组织化学染色，另一份冷冻保存，提取病毒核酸，进行RT-PCR。结果发现，六个地区的屠宰猪肝脏HEV免疫组织化学阳性率除了河南散户为33.3%外，其它都在90%以上，最高达到100%。应用针对HEV ORF2区设计的通用引物，从部分样品中检测到了HEV核酸的存在。表明戊型肝炎在以上地区的商品屠宰猪中普遍存在，对猪肉品安全构成了威胁，应予以关注。

根据Gen bank中公布的牛抗菌肽bac7、bac5和防御素（LAP）成熟肽基因序列，人工合成了抗菌肽融合基因Bac7-Bac5-β，克隆到BAC-TO-BACTM重组杆状病毒表达系统的pFAST HTb载体中，构建了重组转座载体pFASTBac-B7-B5-β，转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞，PCR方法筛选阳性菌落，抽提大分子质粒DNA，获得重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-B7-B5-B，转染昆虫草地夜蛾Sf9细胞出现病变后，收集含有重组病毒颗粒的培养上清，重新感染草地夜蛾Sf9单层细胞，收集Sf9细胞超声破碎，12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳可见表达的融合蛋白带，分子量大小为20kD，与预测大小相符，表达量约占细胞总蛋白的10.6％。体外抑菌实验表明重组的rB7-B5-B蛋白对大肠杆菌具有抑菌活性，本研究为新型抗菌制剂的研制和开发奠定了基础。

摘要：本文以两个甜瓜杂交一代品种“东方蜜1号”、“东方蜜2号”及其亲本和若干同母异父的杂交组合为实验材料，利用SSR标记对甜瓜杂交种纯度快速鉴定的方法进行了研究。结果表明：SSR标记在甜瓜杂交种及亲本间具有较高的多态性，利用筛选出的SSR引物能够快速准确的区分出杂交种中混杂的母本自交系种子，对3批杂交种纯度的快速鉴定结果与大田鉴定结果一致。但是，利用筛选出的单一SSR引物不能完全区分开杂交种和与其同母异父的供试杂交组合，而用不同的引物组合能够将杂交种与大多数供试杂交组合区分开，但对于个别与杂交种遗传背景十分接近的杂交组合仍不能区分开。

P32基因是山羊痘病毒的主要免疫原性基因，含有跨膜区，用一般的诱导方法进行诱导表达，表达量较低。本文尝试用重组PCR消除跨膜区，连接入pGEX-6P-1载体，构建pGEX-6p-s重组表达载体，再用IPTG进行诱导表达，SDS-PAGE结果发现，在58KDa处检测到蛋白，与预期目的蛋白位置相符，用山羊痘标准阳性对表达产物进行Western检测，表达产物可被山羊痘标准阳性血清识别。表达产物以融合蛋白的形式存在，融合蛋白出现在沉淀中，以包涵体的形式存在，用Bandscan软件对所表达的蛋白进行分析发现，表达产物约占菌体蛋白的29.4%。

目的 探讨胰岛素抵抗素基因是否存在单核苷酸多态性，及其与肥胖、脂肪沉积的相关性。方法 本试验选择纯种蓝塘猪、陆川猪、临高猪、长白猪、大白猪、杜洛克，采用PCR-SSCP方法，结合相关测定指标做进一步基因分析。结果 在供试的6种纯种猪中抵抗素基因启动子检测到CC、TT、CT 3种基因型，内含子-1有EE、FF、GG、EF、EG、FG 6种基因型，内含子-2有LL、MM、NN、LM、LN、MN 6种基因型，外显子-2有CC、GG 2种基因型，基因频率与脂肪沉积量分析表明两者存在相关。结论 抵抗素基因存在单核苷酸多态性，且与脂肪沉积调控有关。

本文采用荧光定量PCR技术检测了填饲、未填饲朗德鹅肝脏、腹脂、皮下脂肪组织和肌肉LXRα基因mRNA的表达水平，并与谷丙转氨酶等6种血清生化指标进行了相关性分析，结果发现：填饲组肝脏、腹脂组织LXRα基因mRNA表达水平显著高于对照组（P<0.05），高肝组皮下脂肪组织LXRα基因mRNA表达水平显著高于对照组、低肝组（P<0.05）；肝脏组织LXRα基因mRNA表达水平与肝重/体重比呈显著正相关（P<0.05），相关系数为0.58，皮下脂肪组织LXRα基因mRNA表达水平与肝重/体重比呈极显著正相关（P<0.01），相关系数为0.77；肝脏LXRα基因mRNA表达水平与血清中甘油三酯、胆碱脂酶含量呈极显著正相关（P<0.01），相关系数分别是0.66和0.70。

表皮生长因子受体由于在许多种肿瘤细胞表面过度表达而成为特异杀伤肿瘤细胞的理想靶位。正电性抗菌肽有其独特的膜毒性细胞毒机制。本研究以小鼠表皮生长因子为导向部分，以蜂毒溶血肽为毒性部分，构建特异杀伤肿瘤细胞的膜毒性免疫毒素---“MEGFMEL”嵌合蛋白。该嵌合蛋白以大肠杆菌BL21为表达宿主，以pET30a为表达载体，采用低温诱导表达和无破胞程序的冻融法进行纯化，最终浓度为63.45μg/mL、纯度为68%。体外活性检测表明MEGFMEL”嵌合蛋白对表面过度表达EGFR的鳞状上皮癌A431细胞表现出显著杀伤力，其LD50值为52.6μg/mL。本研究结果显示以正电性抗菌肽为毒性部分构建针对表皮生长因子受体的新型膜毒性IT是可行的。

本实验选择具有优良肉质的本地金华猪与肉质较差的引进品种皮特兰猪杂交所产的金皮F2代为研究对象，检测金皮F2代猪CAST（calpastatin, CAST）基因、MyoG(Myogenin, MyoG)基因的PCR-MspI多态性，并结合肌球蛋白重链（MHC）免疫组织化学方法，研究猪背腰最长肌的肌肉组织学特性，并对其进行图像分析。结果发现，金皮F2代杂交猪背腰最长肌MHCs阳性（慢肌）纤维的比例为7.62%, 快肌纤维为92.38%。CAST基因的PCR扩增产物为1404bp的片段，酶切后分为A(628bp+499bp+277bp),B（499bp+371bp+277bp+257bp）两种等位基因；MyoG基因的PCR扩增产物长度为1050bp，酶切后分为A（462 bp +408 bp +180 bp）和B（408bp+290bp+180bp+162bp）两种等位基因。.AA、AB和BB基因型频率分别为 0.1795、0.5897和0.2308，A和B的基因型频率分别为 0.4743和0.5256。CC、CD和DD的基因型频率为0.3671,0.5696和0.0633， C和D的基因型频率分别为0.6519和0.3481。统计结果表明，AA、AB、AB、CC、CD、DD基因对眼肌面积，系水率、pH值、导电率等屠宰性状均无显著的影响。CAST基因的不同基因型对肌纤维的轴比有显著影响（P<0.05）,AA单型有产生较多轴比大（近似椭圆形）肌纤维的倾向，而BB则控制形成更多的轴比小（近似于圆形）的肌纤维。具有AA单型的个体具有更多的肌间结缔组织，而具有BB单型的个体的肌间结缔组织较少（P<0.05）,AB单型的个介于两者之间。MyoG基因MspI酶切后的各种基因型对肌肉的肌纤维大小和密度具有显著影响，具有DD基因型的个体的肌纤维面积较大，而具有CC基因型者肌纤维密度最大。

黑素皮质素受体4 ( melanocortin 4 receptor, MC4R) 是G 蛋白耦联受体( G protein coupled receptors, GPCRs) 超家族的一个成员, 在人和小鼠的体重、能量稳态和采食量的调控中发挥重要作用。本研究采用PCR-RFLP技术对MC4R的298位点错义突变（Asp298Asn）在莱芜猪、大莱二元杂交猪和商品猪中的多态性进行了检测，对该突变与商品猪背膘厚的关系进行了关联分析。结果表明，在33头莱芜猪中只检测到11基因型，而在大莱二元杂交猪和商品猪中11、12和22基因型均有分布，且等位基因1的频率均高于等位基因2；在该突变位点三个群体均处于Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）。商品猪不同基因型个体背膘厚差异显著，22基因型个体的背膘厚显著高于12基因型（P <0.01）和11基因型（P <0.05）个体。因此，MC4R基因298位点的Asp298Asn错义突变与商品猪的背膘厚有关，可以作为以西方猪种为杂交亲本的商品猪背膘厚的分子标记。

摘要：OPN（osteopontin）基因是近年来在猪的繁殖性状上发现的一个候选基因，本试验以长白猪，大白猪和北京黑猪为研究对象，研究OPN基因多态性与猪的繁殖性状之间的关联。经特异性产物的扩增，结合测序发现，OPN基因的第6内含子存在305bp的缺失突变，从而产生多态。在长白猪和大白猪中发现了AA、AB和BB 共3种基因型，在2个群体中处于中度多态，且已达到Hardy-Weinberg平衡状态。而在北京黑猪群体中没有多态，只有BB基因型。利用SAS 8.0 软件采用最小二乘法拟合线性模型，将不同基因型与总产仔数(TNB)、产活仔数(NBA)和初生重(WB)进行了关联分析，结果表明：长白猪初产母猪AA型个体的TNB、NBA显著的高于AB和BB型个体(P＜0.05)，经产母猪AB型个体的TNB和NBA显著的高于AA型与BB型个体(P＜0.05)，A等位基因对TNB、NBA和WB均表现为正效应。在大白猪中，不论是初产母猪还是经产母猪，其BB和AB型个体的TNB、NBA高于AA型个体，但其差异不显著(P＞0.05)，B等位基因对TNB、NBA都表现为正效应。

利用PCR-Southern的方法对菊科26个种和2个菊花（Dendranthema × grandiflora ）栽培品种的甜菜碱醛脱氢酶（betaine aldehyde dehydrogenase，BADH）基因进行了检测，其中18个种和2个栽培品种呈现明显的阳性信号。对其中7个种和1个栽培品种的PCR产物进行了测序（GenBank登录号：EF683587- 683595），其中旋覆花中获得两个长度差异较大的序列。序列分析表明：在被克隆的基因片段中，外显子的长度在各种间是一致的，且同源性在83%以上，推测的氨基酸序列的同源性在90%以上，其中旋覆花长片段中保守十肽的第二个氨基酸由苏氨酸变异为丙氨酸。各序列内含子的长度差异较大，泽兰（Eupatorium lindleyanum）、祁州漏芦（Stemmacantha uniflora）、旋覆花（Inula japonica）长片段的内含子之间，及与其它序列的内含子之间均无明显的同源性，而其它序列的内含子间则表现出较高的同源性，且由内含子所反映的基因间的系统关系与外显子反映的系统关系基本一致。

性别鉴定对鸟类特别是珍稀濒危鸟类的饲养管理、人工繁育、遗传疾病的防治和进化研究等方面都有非常重要的意义。丹顶鹤是我国一级保护动物，为单态性鸟，很难通过外观和形态来进行性别鉴别，给配对和人工繁殖造成了很大困难。本试验利用非伤害性取样方法，成功从丹顶鹤羽毛中提取了基因组DNA，并筛选出3对引物组合对丹顶鹤EE0.6序列的相关片段进行了特异性扩增。结果显示，这3对引物组合从雄鹤中扩增出一条片段，从雌鹤中扩增出两条片段，均可以对丹顶鹤的性别作出准确鉴定，解决了丹顶鹤人工繁育中的关键问题，并为其他濒危鸟类的准确性别鉴定提供了参考和借鉴。

为了研究家蚕耐氟中毒分子机理，本文采用荧光差异显示技术分析了家蚕对氟化物耐性品系441和感性品系440添氟后的基因表达的差异，获得差异表达cDNA片段A14-6,数据库分析为编码抗凋亡基因bcl-2 (AB008449)。BmBCL-2编码965个氨基酸，分子量为108.800 kD，等电点为6.370。结构分析无C末端疏水跨膜结构，含有19个外显子和18个内含子，剪切信号符合GT/AG规则。蛋白质同源性分析表明BmBCL-2与BCL-2家族蛋白一样均有BH1、BH2、BH3和BH4功能域，用ClustalX1.83、MEGA3.1等软件分析氨基酸序列和得到系统进化树，结果表明BmBCL-2与其它物种BCL-2蛋白保守性较低。RT-PCR结果表明，bcl-2在家蚕耐氟品系441和感性品系440五龄第48h五个组织均有表达，在441DZ（耐氟品系）中表达丰度明显高于440DZ（敏感品系），并且在脂肪体表达量相对较高。200mg•L-1氟化钠和清水对照处理家蚕后48h，bcl-2在41DZ和440DZ中肠的转录水平没有显著变化，但在添氟后，耐氟品系441F表达水平相对高于440F品系。以上结果暗示该基因可能与家蚕的耐氟性有关。

采用RT-PCR和RACE的方法从中间锦鸡儿中克隆了四个fad2基因，对其编码的四个蛋白质进行生物信息学分析表明，这四个fad2蛋白跨膜区域、信号肽分析、蛋白质二级结构、磷酸化位点数量、棕榈酰化位点数量等都有所不同。这为进一步研究基因分工、调控方式打下了基础，为实现对锦鸡儿属植物脂肪酸成分直接、精确调控提供了保证。

通过转基因动物乳腺表达系统生产重组药用蛋白比微生物发酵系统和动物细胞培养系统具有很多优势；同时，体细胞核移植技术为制备动物乳腺生物反应器开辟了一条新的途径。本实验旨在建立稳定整合人乳铁蛋白cDNA的山羊胎儿成纤维细胞系，为体细胞核移植法制备转基因动物提供可靠的供体细胞。本研究采用RT-PCR获得人乳铁蛋白cDNA，通过Long and Acute PCR扩增山羊β-酪蛋白5’ 端6.5 kb的调控序列，以pEGFP-C1为骨架构建乳腺特异性表达载体 p6.5hLF-EGFP。脂质体介导法转染山羊胎儿成纤维细胞，G418抗性筛选3-4周后，经PCR扩增和报告基因EGFP表达检测，得到稳定整合外源基因的转基因供体细胞系，为制备高效表达人乳铁蛋白的转基因山羊乳腺生物反应器提高可靠的核移植供体细胞。

摘要 目的 人胎儿骨髓间充质干细胞（BMMSCs）的群体倍增次数（70～80次）是成体BMMSCs (30～40次）的两倍，分化能力优于成体干细胞，尤其是前3月龄胎儿BMMSCs，最接近胚胎干细胞，端粒酶活性高，生长速度快，分化能力强，可能是组织工程和再生医学研究理想的种子细胞。本研究的目的是建立２～３月龄流产人胎儿BMMSCs体外分离方法, 筛选其体外培养体系，鉴定其生物学特性及安全性，为体外诱导分化和组织工程研究提供种子细胞。方法 实验于2005-04/12在国家干细胞工程技术研究中心陕西分中心完成。采取纵向剪开骨髓腔涮洗细胞和全骨髓培养法分离２～３月龄流产胎儿BMMSCs， MTT法筛选基础培养液和血清浓度并制作生长曲线，流式细胞仪和免疫组织化学法鉴定细胞抗原标志，并通过核型分析和成瘤实验评估细胞的安全性。结果 沿长轴剪开骨髓腔涮洗细胞法是获得２～３月龄人流产胎儿四肢长骨骨髓的实用方法。在本实验范围内α-MEM+20%FBS是体外培养2～3月龄流产胎儿BMMSCs的最佳体系。分离的第３代BMMSCs除表达成体BMMSCs表面抗原标志外还表达Oct4、SSEA3和SSEA4，第6、12和24代细胞在对数增长期的群体倍增时间分别为34h、36h和40h，且均为二倍体核型、不成瘤。结论 2～3月龄人流产胎儿BMMSCs在体外容易分离和培养，表达部分胚胎干细胞抗原标志，生长速度快，传代次数多，安全性良好，可以成为人类组织工程和再生医学研究理想的种子细胞。

利用以籼稻(Oryza sativa ssp. indica) 品种特青为遗传背景的云南元江普通野生稻（O. rufipogon Griff.）(简称“元江普野”)渗入系为材料，调查温室高温胁迫条件下野生稻渗入系和受体亲本特青的结实率，采用单标记回归分析法，共检测到4个抽穗开花期耐热性相关的QTL，分别位于第1、3、8和10染色体。其中位于第1和3染色体上的2个QTL（qHT1和qHT3），贡献率分别为12%和6%，来自元江普野的等位基因能提高群体的耐热性，分别可增加9.13%和6.71%的结实率。而位于第8、10染色体上的2个QTL（qHT8和qHT10），贡献率均为6%，来自元江普野的等位基因降低群体的耐热性，加性效应分别为-6.44%和-4.44%。研究结果不仅为耐热水稻品种的分子标记辅助育种提供参考，而且充分显示了利用野生稻的优异基因改良栽培稻抗逆性状的巨大潜力。

为建立长穗偃麦草Ee染色体组特异的分子标记，以普通小麦中国春、中国春-长穗偃麦草二体代换系、附加系为材料，用5对AFLP引物进行分析，共筛选出28个分布于1Ee-7Ee 7个染色体特异的AFLP标记，经PAGE凝胶电泳后回收、克隆和测序，并根据测序结果设计PCR特异引物，成功地将AFLP标记E-ATC/M-CGTA341bp, E-ATT/M-CTAG265bp, E-AAT/M-CCAG139bp和E-ATT/M-CTAG205bp转化为实验结果稳定、操作更简单的STS标记。利用获得的STS标记对5个长穗偃麦草居群和8个小麦品种进行了鉴定。结果表明其可以在长穗偃麦草居群中被检测到，但在其它小麦背景中检测不到。表明这些标记可以用于小麦-长穗偃麦草异源附加系和代换系中长穗偃麦草遗传物种的检测。

对获得的中国野生葡萄抗白粉病基因RAPD标记OPW02-1756、OPO11-964、OPY13- 661、OPB11- 520、OPW05-766、OPV03-1365和OPJ16-759进行了回收、克隆、测序及序列分析。结果表明，7个RAPD标记的实际长度分别是1756bp、964bp、661bp、520bp、766bp、1365bp和759bp。OPW02-1756序列与3条欧洲葡萄cDNA克隆获得的EST序列有94 ~ 98%的同源性。OPO11- 964序列与欧洲葡萄“赤霞珠”的1条EST序列有93%同源性，与“霞多丽”的2条果实不同发育时期获得的EST序列有90%和87%的同源性，与甜橙在多种病原菌侵染后通过cDNA文库获得的1条EST序列有83%的同源性。OPO11-964最大的一个阅读框架包含444个碱基，编码147个氨基酸，该氨基酸序列和21个其它生物的未知功能蛋白序列有部分相似性。OPY13-661序列与欧洲葡萄16条EST序列有同源性，其中与“赤霞珠”cDNA克隆的EST有较高的同源性, 与“霞多丽”的2条叶片非生物胁迫有关的EST序列同源性均为89%。OPB11-520序列与拟南芥基因组4条未知功能DNA序列有94%同源性。OPW05-766序列与来自于酿酒葡萄的GAG-POL 前提有50%的同源性。OPV03-1365序列与水稻基因组6条序列有81 ~ 88%的同源性，与拟南芥基因组3条序列有84 ~ 91%的同源性。OPJ16-759与欧洲葡萄“霞多丽”叶片14条非生物胁迫EST序列有83 ~ 100%的同源性，与欧洲葡萄“Cabsau”浆果3条水分胁迫的EST序列有94 ~ 100%的同源性。

外施SA可以显著减轻玉米大斑病的病害症状。表现为玉米叶片的病斑数目和病斑大小明显降低，诱抗效果超过56%。SA诱导玉米抗病机制研究表明：SA预处理，减缓了玉米大斑病菌侵染速度，表现为由侵入钉长出新菌丝，菌丝充满侵染细胞以及向邻近细胞扩展的时间推迟。SA预处理加速了病菌侵染过程中侵染点及周围玉米细胞的死亡。SA处理或SA预处理后接菌，明显增强了玉米叶片中PAL、几丁质酶、β-1,3-葡聚糖酶活性；增加了玉米叶片内木质素、丁布的含量；而单独接菌，这些酶活性及物质含量均无明显改变。SA处理后接菌，增加了玉米叶片内H2O2含量。

摘要：用16S rDNA-PCR-DGGE技术、电子显微镜和平板培养的方法系统地揭示小叶满江红（Azolla microphylla）中内生细菌的遗传多样性和表型多样性，根据16S rDNA-PCR-DGGE的指纹图谱，作者认为在小叶满江红－蓝藻共生体内存在一个以蜡质芽孢杆菌及其变种为优势种群的复杂、多样的微生物区系，内生细菌在体内呈现的各异的超微结构特征和体外培养生成的不同大小、形态和色素的菌落便是证明。文中也讨论了应用DGGE研究遗传多样性的优点、不足以及内生细菌在满江红－蓝藻共生体的系统发育和协同进化中的可能作用。

苏云金芽孢杆菌WZ-9是本室从河北省土壤中分离的对马铃薯瓢虫的幼虫有特异杀虫活性的新菌株，本文对该菌株的形态特征、生长特性、生物活性、基因型和蛋白型等方面进行了研究。结果表明该菌株可产生菱形伴孢晶体，SDS-PAGE检测表达的主要蛋白条带分子量约为130kDa，生长周期是24h，随菌株的生长培养基pH值发生变化；生物活性测定表明该菌对马铃薯瓢虫2龄幼虫72h校正死亡率达100%，LC50为2.95×107细胞/mL；基因型鉴定表明含有cry7基因，获得了一条总长为3781bp基因序列，其中包含了一个3414 bp的开放读码框，其编码的蛋白由1138个氨基酸残基组成，与Cry7Ab2具有99.65%的序列同源性，存在4个氨基酸差异，亲缘关系最近，该蛋白被Bt 杀虫晶体蛋白命名委员会命名为Cry7Ab3( 登录号为BI 1015188) 。

蜡样芽孢杆菌905（Bacillus cereus 905）是从小麦体内分离获得的一株植物有益内生细菌。为从氧自由基毒性角度分析该细菌在植物体内的定殖机制，本研究利用PCR方法得到了B. cereus 905的CuZn-SOD基因全长（sodC）。该基因由537 bp组成，编码179个氨基酸残基。构建表达载体pET-22b-sodC，转化Escherichia coli BL21(DE3)，IPTG诱导表达结果表明：该基因表达出的蛋白表现出SOD功能，化学抑制法验证其为CuZn-SOD。

本试验设计了含有attB侧翼序列的引物用于番木瓜环斑病毒的外壳蛋白基因（CP）和运动蛋白基因（CI）扩增。在BP重组酶的作用下，将CP基因和CI基因分别与受体载体pDONRTM221发生重组反应，产生入门克隆。接着，在LR重组酶作用下，将入门克隆与目的载体pHellsgate12发生重组反应，通过平板培养筛选及PCR扩增和酶切反应，获得了含CP基因和CI基因反向重复序列的表达载体。

PCR扩增获得水稻叶绿体Rubisco SSU引导肽基因和水稻条纹病毒（Rice stripe virus，RSV）外壳蛋白（coat protein，CP）基因。分别借助于pGEX-4T-1和pET-29a表达载体，构建获得了融合基因PR-CP和PR-S-CP。测序鉴定融合基因构建正确后，将重组子pGEX-PR-CP和pET-PR-S-CP转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达后，利用SDS-PAGE电泳和Western blot对表达产物进行了鉴定。结果发现，融合基因表达产物大小与预期结果一致，且能与RSV CP抗体特异结合。说明融合基因中的RSV CP获得了正确表达，在融合蛋白中保持了自身独立的抗原活性，推断融合基因在生物体内的表达可能都能保持每个蛋白各自独立的结构和功能。

酵母双杂交系统是在生物体外研究蛋白质与蛋白质互作的方法，本文综述了酵母双杂交系统在植物与病原物识别及抗病信号传导研究中的应用，包括：（1）酵母双杂交技术的基本原理；（2）植物与病原物的专一性识别；（3）植物抗病信号传导元件的鉴定。

为了研究拟南芥扩张蛋白AtEXPA1基因启动子上与转录调控有关的元件，我们通过PCR技术克隆了AtEXPA1基因上游897bp具有启动子活性的序列，再将启动子作不同程度截短，所有片段与GUS基因融合，构建植物表达载体，采用基因枪轰击拟南芥叶片和PEG介导转化烟草原生质体，通过定性和定量检测GUS的活性，发现在靠近翻译起始密码子的上游144bp之间存在增强转录活性的元件。将PEG介导转化的烟草原生质体，分别进行光诱导，冷诱导， 脱落酸（ABA），盐处理，根据GUS定量检测的结果，推测（1）在AtEXPA1基因启动子上广泛存在与光调控有关的元件，（2） -897～-626 bp之间存在冷负调控元件， （3）-626～-444 bp之间存在与ABA负调控有关的元件，（4）-626～-282 bp之间存在与盐负调控有关的元件。