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农业生物技术学报  2008年 16卷 4期  刊出日期:2008-07-24
 
研究论文
NP-1在小球藻硝酸还原酶缺失突变体中的表达与活性检测
Expression and Bioactivity Characterization of NP-1 in Transgenic Nitrate Reductased Deficient Mutant of Chlorella ellipsoidea
安洋 赵世民 孙勇如 白丽莉 尹维波 陈宇红 李元广 胡赞民
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 201 )
摘要
摘 要:小球藻繁殖快,培养简单,用转基因小球藻表达目的基因产物具有重要的应用前景。本研究构建了兔防御素NP-1的植物表达载体,NP-1由Ubiquitin启动子控制,含NPTII基因和硝酸还原酶基因两个筛选标记。以椭圆小球藻(Chlorella ellipsoidea)硝酸还原酶缺失突变体nrm-4为受体,采用原生质体转化的方法将目的基因转入该突变体中。用含G418的硝酸盐培养基筛选出阳性藻落,经PCR和RT-PCR检测,证明获得了转基因藻株。转基因藻株在无抗生素筛选压力的硝酸盐培养基上继代培养后进行抑菌活性检测。研究表明,转基因椭圆小球藻表达的NP-1具有正常的生物活性,并在无抗生素的培养基中稳定遗传。本研究的结果为小球藻表达外源基因提供了新的技术途径,也为NP-1的规模化生产奠定了基础。
潮霉素磷酸转移酶的原核表达纯化及其抗体制备
Expression and Purification of HPT gene in Escherichia coli and Preparation of Its Polyclonal Antibodies
许文涛
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 201 )
摘要
本研究从转基因玉米基因组上成功克隆出潮霉素磷酸转移酶基因(hpt),通过BamHⅠ和Hind III 双酶切作用,将hpt基因与pET30a进行粘性末端连接成功构建pET30a-hpt质粒,并转化到大肠杆菌BL21中进行蛋白表达。在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导下,pET30a-hpt融合表达载体在大肠杆菌BL21(DE3) 菌株中以可溶性蛋白的形式高效表达了潮霉素磷酸转移酶(HPT),并通过金属鏊和层析纯化了目的蛋白。用肠激酶切除了融合蛋白的融合部分之后再一次通过金属鏊和层析,经过透析后获得了HPT纯品,并且使用纯化的HPT蛋白免疫兔子制备了特异性强的多克隆抗体。
瓜类细菌性果斑病菌群体感应信号分子的检测及其对致病性的影响
Detection and pathogenic effect of quorum sensing signal molecule of Acidovorax avenae subsp. citrulli
陈涛 钱国良 杨小丽 马俊义 胡白石 刘凤权
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 251 )
摘要
瓜类细菌性果斑病是国内外西瓜和甜瓜上危害最为严重的病害之一,目前除了严格的检疫措施之外,尚无十分有效的控制措施。随着细菌群体感应(Quorum sensing,QS)系统的发现和研究进展,利用“信号干扰技术”控制植物细菌病害已经成为研究热点并取得了成功应用。本文利用生物测定技术首次从瓜类细菌性果斑病菌(Acidovorax avenae subsp. citrulli)检测到群体感应信号分子(AHL),并将能够降解细菌信号分子的aiiA基因转化到瓜类细菌性果斑病菌NJF10菌株中,室内接种试验表明该转化菌株的致病性明显的减弱,证明其对果斑病菌的致病性具有调控作用。研究结果为利用信号干扰技术控制瓜类细菌性果斑病奠定了基础。
利用RNAi技术提高玉米直链淀粉含量
Increasement of Maize Amylose Content through RNA Interference
郭新梅
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 202 )
摘要
为了提高玉米直链淀粉含量,用基因枪将前期工作中构建的sbeⅡb RNAi表达载体pBAC413导入玉米自交系幼胚愈伤组织,经过筛选获得了12 株转化再生植株,其中6 个植株获得了结实种子。DNA点杂交、PCR扩增和PCR-Southern均证明目的基因已整合到T0代再生植株玉米基因组中。对T1代转基因玉米籽粒淀粉含量进行测定,结果表明总淀粉含量比对照没有显著变化,其中1个转基因玉米株系的直链淀粉含量比对照提高了15.6%。
烟草EST数据库构建及盐胁迫下烟叶基因表达谱分析*
李文正 宋利民 李德葆
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 170 )
摘要
摘要:本文报道一组容量为5927条烟草EST的数据集,其中包含521个重叠群和3079个独立EST。EST数据分析显示:高丰度表达基因主要涉及光合代谢、蛋白合成等植物基本的生理功能;而低丰度表达基因则占TUT总数的85.5%。在此基础上,制备完成cDNA阵列并应用于盐胁迫下烟叶的基因表达谱分析,结果表明:盐胁迫即可使烟草叶片的基因表达谱发生显著改变,并涉及多个重要的植物生理过程。包括水通道蛋白PIP2a、乙烯应答蛋白酶和mRNA剪接因子prp31等基因的检出,可以为阐明植物胁迫反应的调控机制提供新的线索。
建立PCR-ELISA方法检测单核细胞增多性李斯特菌
Development of PCR-ELISA for identification of Listeria monocytogenes
谭炳乾 何启盖 陈焕春
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 201 )
摘要
针对hlyA基因设计特异性引物和探针,在上游引物5?#31471;标记生物素,核酸探针的3?#31471;标记地高辛,将PCR扩增、核酸液相杂交以及酶联显色技术结合,并对检测条件进行了优化,建立了PCR和PCR-ELISA检测食品样品中单核细胞增多性李斯特菌的方法。经对试验菌株检测表明,PCR 、PCR-ELISA方法检测单核细胞增多性李斯特菌能扩增出特异片段,其它李斯特菌、大肠杆菌和沙门氏菌等扩增检测结果是阴性。对60个样品进行检测表明,与SN/T0148.1-2005方法相比, PCR-ELISA方法具有更高的敏感性。与PCR产物电泳法检测比较,PCR-ELISA方法进一步提高检测方法的敏感性和特异性,敏感性高于前者150倍以上,并适合批量样品的检测分析。
两株蜡样芽孢杆菌α-淀粉酶差异性分析及基因的克隆表达
The difference analysis of two α-amylase from Bacillus cereus and gene clone expression
张琳琳 王琦 李荣禧 王勇军 梅汝鸿
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 251 )
摘要
蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)是产生具有重要工业生产价值的耐高温α-淀粉酶(α-amylase)的优良菌株。通过对两株蜡样芽孢杆菌(B905和B904)分泌的α-淀粉酶酶学性质研究,淀粉酶的活性稳定温度都在90℃-100℃,耐热性和酶活都不依赖Ca2+,其它理化性质较为一致,但淀粉酶的分子量大小有明显的不同。PCR方法克隆得到了这两种耐高温淀粉酶的基因全长(amy905和amy904),并在大肠杆菌诱导表达,结果显示:amy904基因长度为1362bp,其蛋白分子量约为55 KD;amy905基因长度为1761bp,其蛋白分子量约为68 KD。
睾丸酮丛毛单胞菌teiR基因载体构建及在大肠杆菌中的表达
Construction of the plasmid vector of teiR gene from Comamonas testosteroni and overexpression in E. coli
陈建秋 潘大仁 卢文标 周以飞 王占成 陈雅燕
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 240 )
摘要
提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)基因组DNA,利用PCR扩增teiR基因,将扩增产物克隆到pKtac2(含强启动子tac)和pK18中,构建重组质粒pKtac2-teiR和pKteiR100。将重组质粒分别转化大肠杆菌(Escherichia coli)HB101, 提取细菌总蛋白,ELISA测定细菌总蛋白中teiR基因的表达量,结果表明: 含tac强启动子的pKtac2-teiR重组质粒具有更高的转录活性;将p6(含3a-HSD/CR基因)分别和重组质粒(pKtac2-teiR和pKteiR100)共转化大肠杆菌(Escherichia coli)HB101, 测定细菌总蛋白中3a-HSD/CR 和teiR基因的表达量,结果表明: 在大肠杆菌中teiR可以明显促进3a-HSD/CR 的表达, pKtac2-teiR与p6共转化后teiR基因的表达量比pKteiR100与p6共转化后teiR基因的表达量高,但是pKtac2-teiR与p6共转化后的3a-HSD/CR的表达量低于pKteiR100与p6共转化后的3a-HSD/CR的表达量。
产肠毒素大肠杆菌987P菌毛fasG亚单位的优化表达
Optimizing the expression of the subunit fasG of 987P fimbriae of Enterotoxigenic Escherichia coli(ETEC)
罗何峰 王 劼 苟钟勇 彭 健
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 223 )
摘要
本试验选用两种翻译起始区不同的表达载体pET28a(+)、pGEX-KG和两种对稀有密码子效应不同的表达宿主菌BL21(DE3)、Rossetta(DE3),构建出四种重组表达菌(pET-fasG BL21(DE3), pET-fasG Rossetta(DE3), pKG-fasG BL21(DE3)和pKG-fasG Rossetta(DE3))来考查翻译起始区的二级结构和稀有密码子对fasG基因表达的影响。对重组表达菌进行诱导表达的结果表明,翻译起始区的二级结构和稀有密码子的存在都能影响到目的基因的表达,通过优化翻译起始区的二级结构或优化稀有密码子都能提高目的蛋白的表达量。由于pKG-fasG优化了mRNA翻译起始区的二级结构,同时Rossetta(DE3)缓解了稀有密码子对目的蛋白表达的影响,pKG-fasG Rossetta(DE3)目的蛋白的表达量达到16%,较pET-fasG BL21(DE3)的表达量(8%)提高了100%。试验结果表明,对外源基因的表达,选择合适的表达载体和宿主菌,对获得较高的表达量是非常重要的。
基于ITS序列和RAMS标记分析青枯雷尔氏菌的遗传多样性*
Genetic Diversity Analysis of Ralstonia Solanacearum Based on RAMS Marker and ITS Sequence
郑雪芳
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 176 )
摘要
应用ITS序列和RAMS技术对福建省不同地域,不同寄主作物的青枯雷尔氏菌进行遗传多样性研究。结果表明,供试的21株青枯雷尔氏菌的ITS区序列有3种类型,这3种类型菌株的ITS序列只有1-2个碱基的差异,与参比菌株GMI1000的ITS区序列或者相同或者有1-2个碱基的差异。在此基础上,利用RAMS技术进一步分析表明,供试的青枯雷尔氏菌及参比菌株GMI1000的基因组DNA间存在丰富的多态性。聚类结果显示,供试菌株可聚为3个类群,同一寄主作物的菌株聚在同一类群中,同一地理来源的菌株聚在同一亚类群中,说明青枯雷尔氏菌的遗传分化与寄主作物和地理来源都存在相关性,与寄主作物的关系更密切。
利用ISSR分析栗疫病菌群体遗传多样性
Genetic diversity of Cryphonectria parasitica populations revealed by ISSR analysis
王克荣 许利强
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 204 )
摘要
本研究利用ISSR分子标记技术,对中国、日本、意大利及美国等四个栗疫病菌群体的遗传多样性和遗传分化进行了分析。自53个ISSR引物中筛选出11个引物,对以上四个群体的栗疫病菌11个子群体的220个菌株进行扩增,共检测到177个位点,其中多态位点为174个,多态位点百分率(P)为98.31%。11个栗疫病菌子群体的P平均值为20.43%;群体水平的Shannon信息指数(I)和Nei指数(h)分别为0.1769和0.7386;各个子群体I的平均值为0.0943,h的平均值为0.0614。比较表明,中、日、意、美栗疫病菌群体间具有较高的遗传多样性。栗疫病菌群体间的基因分化系数(Gst)为0.7386,其基因流(Nm)为0.1769,11个子群体间的遗传距离平均为0.2289。利用算术平均数的非加权成组配对法(UPGMA)对栗疫病菌11个子群体进行聚类,结果可分为3大类群。
香菇多糖对鲤鱼(cyprinus carpio)离体培养免疫细胞的活性调节作用*
Study on the effect of the activation of immunological cells in the commom carp after stimulation by Lentinan
曹丽萍 丁炜东 张柳 谢俊
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 209 )
摘要
采用Percoll密度离心等技术,对鲤鱼的头肾巨噬细胞和外周血白细胞进行分离纯化,并离体培养。体外暴露不同浓度的黄芪多糖(APS)和香菇多糖(LNT)后,分别采用 MTT(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)法测定它们对鲤鱼外周血白细胞增殖的影响;NBT(nitroblue tetrazolium)还原法和Griess试剂显色法测定对头肾巨噬细胞的呼吸爆发的影响;实时定量PCR法测定头肾巨噬细胞细胞因子IL-1β诱导表达的影响。结果显示,香菇多糖能显著诱导巨噬细胞的氧爆发活性;其低浓度时对细胞的氮呼吸爆发活性无显著影响,随着作用浓度的增加表现为高浓度抑制作用;香菇多糖可以显著促进鲤鱼外周血白细胞的增殖,且能显著增强IL-1β的体外诱导表达。结果表明香菇多糖对离体培养鲤鱼免疫细胞有明显活性作用,对鲤鱼非特异性免疫和特异性免疫具有促进作用,是一种有潜力的鱼用免疫增强剂。
甘蓝型油菜及近缘种中异质型ACCase亚基accd编码基因的克隆及序列分析
Cloning and sequence analysis of heteromeric ACCase subunit encoding gene accd from four close-related species of Brassica
王伏林 吴关庭 郎春秀 刘仁虎 陈锦清
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 240 )
摘要
采用RT-PCR方法,以甘蓝型油菜、甘蓝、芥菜型油菜和白菜型油菜的幼嫩叶片cDNA为模板对异质型乙酰辅酶A羧化酶(ACCase)的β-CT亚基(羧基转移酶)的accd编码基因进行扩增,得到长度分别为1470bp、1470bp、1464bp和1464bp的编码序列,分别可编码490、490、488和488个氨基酸的蛋白质。序列分析表明,来自4个油菜近缘种的accd基因高度同源,编码的蛋白质都具有相似的锌指结构和C-末端5个相同的基元,其中基元I(GSMGSVVG)和基元II(PLIIVCASGGARMQE)在所有植物及大肠杆菌的β-CT亚基中普遍存在。Southern杂交显示该基因在甘蓝型油菜及其近缘种的基因组中呈单拷贝。
检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体的单抗竞争ELISA方法的建立
Establishment of a McAb-based Competitive ELISA for the detection of antibodies against Pasteurella multocida toxin
向敏 卢顺
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 225 )
摘要
本研究以纯化的多杀性巴氏杆菌毒素基因片段的原核表达产物作为抗原免疫小鼠制备单抗,并利用表达蛋白和多杀性巴氏杆菌毒素单抗酶结合物建立了竞争ELISA方法检测多杀性巴氏杆菌毒素抗体。经过研究确定抗原包被浓度为223ng/mL,待检血清最佳稀释度为1:2,酶标单抗工作浓度为1:3200,血清抑制率大于50%为阳性。应用单抗竞争ELISA和细胞毒性中和试验同时对82份血清进行猪多杀性巴氏杆菌毒素抗体检测,竞争ELISA的检出率为40.2%,细胞毒性中和试验检出率为36.6%,两者符合率达91.5%。试验结果表明,该ELISA方法特异性强,敏感性高,稳定性和重复性好,操作简便。本方法的建立在实验室诊断的标准化、猪群萎缩性鼻炎疫苗免疫效果的评价及流行病学调查方面具有应用价值。
赤羽病病毒囊膜糖蛋白G1基因的截短表达、纯化及间接ELISA诊断方法的建立
An Indirect ELISA for Detection of Antibody against Akabane Virus Using Recombinant Truncated Glycoprotein G1 Expressed in Escherichia coli
吴东来 徐树兰 童铁钢
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 282 )
摘要
为获得赤羽病病毒(Akabane Virus, AKAV)囊膜糖蛋白重组抗原作诊断应用研究,通过软件分析AKAV OBE-1株的囊膜糖蛋白G1的氨基酸序列,筛选出抗原性较好的基因片段G1-2作为目的片段,经RT-PCR扩增后,插入pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段定向亚克隆于pET-28a (+)表达载体中,转化至BL21 (DE3)感受态细胞中进行诱导表达。经SDS-PAGE和Western-blot分析,诱导表达产物以包涵体的形式存在,大小约为40ku,且具有免疫学活性。亲和纯化后的融合蛋白浓度为2mg/ml,纯度为92.6%。以该融合蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为20g/ml,血清最佳稀释度为1:200。交叉试验表明该方法对牛常见的6种疾病阳性血清无交叉反应。应用该方法对病毒微量中和试验检测过的云南(77份)和内蒙(70份)牛血清样品进行了检测。以中和试验为参照,通过统计学处理,得出两地临界值分别为0.493和0.488,本方法的特异性为73%和86.9%,二者的符和率分别为80%和85.9%。
Overlap-PCR克隆秦川牛HCRTR1基因及其在大肠杆菌中的表达分析
The CDS Cloning of HCRTR1 Gene with Over-lap PCR from Qinchuan Cattle and its Expression in E.coli
张丽 张良志 陈宏 张爱玲 张琴
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 231 )
摘要
通过Overlap-PCR方法克隆了秦川牛的HCRTR1基因编码区全长,获得1278 bp编码区全长序列,将其克隆至pMD-18T载体上,经测序表明获得的cDNA序列与GenBank公布的序列同源性均为98%。提取阳性克隆的质粒经BamHI和HindⅢ双酶切后,回收到1278 bp的目的片段,定向克隆到pET32a(+)表达载体上,连接产物转化Bl21(DE3)感受态大肠杆菌,对长出的菌落进行菌落PCR和质粒酶切鉴定正确后,用IPTG诱导目的蛋白的表达。SDS-PAGE表明秦川牛HCRTR1基因在大肠杆菌中不表达,生物信息学分析表明,HCRTR1基因的表达产物为具有7个跨膜螺旋的G蛋白偶联受体,可能是此类蛋白在原核系统的表达将会影响细菌本身存活,因此原核表达系统也成为研究此类蛋白的瓶颈。
绵羊C3d基因克隆及分子特征
Molecular cloning and characteristics of cDNA encoding sheep C3d
岳耀敬 焦硕
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 263 )
摘要
本实验首次从绵羊肝脏组织克隆到了补体C3d的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。绵羊补体C3d基因的编码区含有909个核苷酸,编码303个氨基酸残基,绵羊与人、牛、山羊、野猪、金仓鼠、小鼠、褐鼠、大袋鼠、兔和原鸡推导出的氨基酸序列的一致性分别为80.4% ,94.7% ,96.9% ,82.8% ,81.1% ,80.6% ,80.2%,71.0% ,75.2%和60.3%。高等动物中,绵羊与原鸡的一致性最低为60.3%,而与其他动物之间的一致性则较高为71.0%-96.9%。通过生物学软件分析发现绵羊C3d蛋白有2个蛋白激酶C磷酸化位点,1个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点,1个酪氨酸激酶磷酸化位点,1个十四(烷)酰化位点。绵羊C3d二级结构中螺旋和转角交替出现,其中α-螺旋占55.12%、β-折叠为2.31%,转角区域为42.57%,这样的结构有利于其桶状结构的形成。通过ESyPred3D同源建模预测可知绵羊C3d三级结构与人C3d一样也形成由核心和外层构成的桶状分子结构。本实验不仅为C3d在家畜上的免疫学基础研究提供实验依据,而且为构建高免疫原性的基因疫苗新技术奠定基础。
猪MYL4基因的克隆及其在猪胚胎骨骼肌中的差异表达分析
Cloning and differently expression analysis of porcine MYL4 gene in embryo skeletal muscle
伍晓雄 唐中林 邓宏 李勇 储明星 马月辉 李奎
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 234 )
摘要
克隆了猪MYL4基因的cDNA序列,并利用生物信息学方法进行验证。所得cDNA序列全长1105bp,包含一个完整的开放阅读框,编码197个氨基酸。序列分析表明,该基因与已报道的狗、人、黑猩猩和恒河猴等物种的MYL4基因高度同源,氨基酸序列同源性分别为98.4%、95.9%、95.4%和95.4%。该基因编码的蛋白具有EFH和FRQ1保守功能域。荧光定量分析该基因在猪胚胎骨骼肌(妊娠33 、65 和90 天)中的表达规律,发现MYL4基因在通城猪和长白猪中呈波浪式表达模式,在妊娠第33 天时中外猪品种间无显著差异,但在65 和90 天时长白猪中显著高于通城猪。
牦牛MT-I/Ⅲ基因cDNA 3′末端全长的克隆与序列分析
Cloning of 3′-end full length of cDNA encoding for MT-I/Ⅲ and analyzing of the sequence in Yak
刘斌 吴建平 马彬云 高凤芹
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 266 )
摘要
摘 要:分别利用基因特异引物YMT-ⅠSP、YMT-ⅢSP和M13 引物,通过RT-PCR和3′-RACE 方法从牦牛肝脏和大脑组织RNA中分别扩增并克隆出了牦牛MT-I / Ⅲ cDNA 3′ 端全长序列(分别为331bp和378bp),其中分别包含MT-I基因编码区全长(183bp)、MT-Ⅲ基因编码区全长(207bp),同时在MT-I / Ⅲ基因cDNA的3′ 末端具有加尾信号AATAAA和多聚腺苷酸尾巴Poly(A)。将牦牛MT-I / Ⅲ cDNA序列在CBI上进行同源性搜索发现,牦牛MT-I/Ⅲ核酸序列特别是其编码区序列在不同哺乳动物中相当保守。牦牛MT-I基因编码的MT-I蛋白由61个氨基酸组成,其中20个半胱氨酸(Cys),具有保守的三肽结构如:C-X-C,C-C-X-C-C,C-X-X-C等,在分子进化上十分保守;MT-Ⅲ编码的蛋白质由68个氨基酸组成,其中19个Cys,除了具有与MT-Ⅰ相同的以上保守的短肽结构外,牦牛MT-Ⅲ蛋白质的氨基酸序列还具有T、CPCP、GEGAEA等MT-Ⅲ蛋白质特异的保守短肽结构结构,在分子进化上亦很保守。
脱羰秋水仙碱诱导牛卵母细胞显核的研究
The extrusion on bovine oocytes induced with demecolcine
万敏 马夜肥 王勇胜 彭新容 张东 杨鹭
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 276 )
摘要
用脱羰秋水仙碱(Deme)诱导牛卵母细胞显核。比较不同显核时间、Deme浓度以及极体形成等因素对牛卵母细胞显核的影响。通过比较发现:(1) 0.5 μg/mL Deme处理卵母细胞,诱导1 h时获得最高显核率(76.00%),高于0.5 h(61.18%)、1.5 h(64.10%)和2 h(63.46%)组;(2)不同浓度Deme 处理成熟卵母细胞1 h, 0.4 μg/mL和0.5 μg/mL Deme组显核率(分别为75.24% 和 77.31%)较高,显著高于0.3 μg/mL组(46.54%)与0.6 μg/mL(60.66%)组;(3)0.4 μg/mL Deme处理卵母细胞1 h,有极体组显核率(83.24%)与无极体组(77.54%)无显著性差异。 研究表明, 0.4 μg/mL Deme处理卵母细胞1h 能更好地诱导卵母细胞显核。Deme 辅助去核法是一种简便、高效的实用技术。
胡须鸡β-防御素Gal-1~Gal-13基因克隆、序列分析与组织分布
The cDNA Cloning ,Sequencing and Tissue Distribution of Chicken β-Defensin Gallinacin Gal-1~Gal-13 Genes in Hu-xu Chicken
谢青梅 xieqingmei
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 234 )
摘要
用设计的特异性引物,采用RT-PCR技术特异性地扩增到胡须鸡β-防御素基因Gallinacin-1(简称Gal-1)~Gallinacin-13(简称Gal-13)共13个基因编码区全长片段。通过克隆、测序获得13个基因的cDNA核苷酸序列,并提交到GenBank中获得胡须鸡β-防御素Gal-1、1(a)~Gal-13基因的注册号为:DQ858311~ DQ858323。比较分析胡须鸡13种β-防御素Gal-1、1(a)~Gal-13基因分别与GenBank中注册的防御素基因氨基酸序列的同源性,其氨基酸的同源性均在96.5~100%之间。利用Clustalx软件对所获得的13种胡须鸡β-防御素基因进行系统发育树分析,结果Gal-1与Gal-1(a)、3在同一分支上,Gal-4、5、8在同一分支上,Gal-2、12、13在同一分支上,Gal-6、7在同一分支,Gal-9、10在同一分支,Gal-11独在一分支上。同样用RT-PCR方法分析了胡须鸡β-防御素Gal-1~Gal-13基因在不同组织中的分布,结果发现:Gal-1/2/4/5/6/7/10的表达分布非常广泛,Gal-3/8/9/11/12/13的分布少。
黄颡鱼微卫星标记筛选及特征分析
Isolation and characterization of microsatellites
刘臻
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 220 )
摘要
通过磁珠富集法首次筛选黄颡鱼微卫星标记并对其特征进行分析。用生物素标记的寡核苷酸探针(AC)8、(CT)8、(AT)7、(GATA)8、(GATT)7进行微卫星片断的富集,挑选部分阳性克隆测序获得38个含有微卫星的DNA序列,总计设计并合成了22对微卫星引物。以普通黄颡鱼基因组DNA为模板,进行PCR扩增,结果筛选出18个多态性微卫星标记,每对引物等位基因数2-8个(平均3.78),遗传杂合度0.2225-0.8101(平均0.5755),多态信息含量0.3425-0.7900(平均0.5336)。此外18对多态性微卫星引物中有16对在黄颡鱼属其它4种鱼类具有通用性,13对在鲇形目中的3种鱼类具有通用性。因此,可以推断筛选的多态性微卫星标记可用于黄颡鱼属和鲇形目鱼类的遗传分析。
磁珠富集法制备翘嘴红鲌微卫星分子标记
Microsatellite Enrichment by Magnetic Beads in Erythroculter ilishaeformis
张义凤 孙效文
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 209 )
摘要
根据生物素与链霉亲和素的强亲和性原理,采用生物素-磁珠吸附微卫星富集法与传统的放射性同位素杂交法相结合的方式开发翘嘴红鲌基因组微卫星资源。结果表明,从1400个菌落中筛选出613个阳性克隆,占38.31%。将288个进行测序,得到262个(94.44%)含有微卫星序列的克隆, 其中含有微卫星座位280个。完美型204个,占72.86%;非完美型49个,占17.5%;复合型27个,占9.64%。设计获得243对微卫星引物,合成50对经PCR筛选,结果30对引物可扩增出特异性条带。12对具有多态性。
水稻条纹病毒与水稻互作中的生长素调控
Auxin regulation in the interaction between Rice stripe virus and rice
杨金广 王文婷 丁新伦 方振兴 谢荔岩 林奇英 吴祖建 谢联辉
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 207 )
摘要
利用real-time RT-PCR和高效液相色谱技术对水稻条纹病毒(Rice stripe virus, RSV)病株和RSV侵染的水稻悬浮细胞中生长素合成酶基因YUCAA1和内源生长素的相对表达量和含量进行分析结果表明,在细胞水平,RSV侵染能显著引起YUCAA1基因表达上调2.98倍和内源生长素含量升高2.66倍。而在植株水平,RSV侵染后却导致YUCAA1基因表达下调70%和内源生长素含量降低75%。这暗示RSV与寄主互作的不同阶段能够调控寄主植物生长素的信号传导。同时,利用KPSC缓冲液处理来消除病株内源生长素,能够引起RSV CP基因表达上调近3倍,30 μM IAA溶液处理可使病株内RSV CP基因表达下调45%。由此可见水稻体内生长素含量的变化能够影响RSV在寄主体内的复制。
甘蓝型油菜中黑芥子酶基因在大肠杆菌中重组质粒的构建和表达
Construction and Expression of a Brassica napus Myrosinase in Escherichia coli
肖海燕 王向阳
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 212 )
摘要
实验通过RT-PCR程序从提取的油菜总RNA中扩增出硫代葡萄糖苷水解酶(又称黑芥子酶,EC3.2.1.147)基因,酶解后插入大肠杆菌表达载体(Escherichia coli)pGEX-4T-1,获得克隆菌株。基因测序在 GenBank中的登陆号为EF583560,翻译的氨基酸序列与已报道的黑芥子酶(GenBank中的登陆号为Q00326)中的一段有一个氨基酸不同,同源性达到99%。经过IPTG诱导表达,在91KDa左右处有表达量很高的一条带。
研究简报
催乳素受体基因多态性及其与济宁青山羊高繁殖力关系的研究
Polymorphism of Prolactin Receptor Gene and Its Relationship with Prolificacy of Jining Grey Goats
储明星
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 284 )
摘要
设计8对引物,采用PCR-SSCP技术检测催乳素受体(prolactin receptor,PRLR)基因外显子3至外显子9和内含子9在高繁殖力山羊品种(济宁青山羊)和低繁殖力山羊品种(辽宁绒山羊、安哥拉山羊)中的单核苷酸多态性,同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果表明:8对引物中,只有扩增内含子9的P8引物的扩增区域具有多态性,其余7对引物的扩增片段都不存在多态性。对于P8扩增片段,在济宁青山羊、辽宁绒山羊和安哥拉山羊中都只检测到AA型和AB型。 测序表明AB型与AA型相比有1处突变(209A→G),该突变位于PRLR的第9内含子。济宁青山羊2 种基因型之间产羔数的最小二乘均值差异不显著(P>0.05)。这些结果初步表明检测的PRLR基因位点对济宁青山羊高繁殖力没有显著影响。
壳聚糖酶基因的克隆与序列分析
Cloning and Sequencing of Chitosanase gene
马镝 吴元华
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 198 )
摘要
本研究采用一对引物从巨大芽孢杆菌BS-0409中成功地克隆了壳聚糖酶基因(Csn) 全基因序列,大小为516bp,将其在NCBI网站上用BLAST程序进行在线检索分析,结果与多种芽孢杆菌同源性均为96%。同时,利用DNAMAN软件比较巨大芽孢杆菌BS-0409与其它13种不同细菌Csn编码基因的氨基酸序列,结果显示不同细菌Csn氨基酸序列之间有比较高的同源性,且与多种芽孢杆菌具有较高的同源性。
专家论坛
我国转基因水稻的环境生物安全评价及其关键问题分析
Potential Commercialization of Genetically Modified Rice in China: Key Questions for Environmental Biosafety Assessments
卢宝荣
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 230 )
摘要
转基因水稻的商品化种植可能带来潜在的环境生物安全问题,例如:转基因对非靶标生物的影响,外源转基因逃逸及其可能带来的生态后果,转基因植物对生物多样性的影响,以及转基因对土壤微生物群落的影响等。对于转基因水稻的大规模种植进行科学的环境安全评价,有利于其可持续生产和安全利用。从我国的水稻生态系统和水稻种植方式的实际情况出发,结合我国可能进行商品化种植的转基因水稻种类,作者对转基因水稻品种的环境释放和商品化种植可能导致的潜在环境生物安全问题进行了科学和理性的分析。根据风险评价的原则(风险% = 危害性 × 发生概率),本文特别对抗病、虫和抗除草剂转基因水稻的商品化种植可能带来的直接和间接影响进行了分析和讨论,希望能为转基因水稻商品化种植的决策提供参考,并为转基因水稻的环境安全性评价提供科学依据。
生物技术性动态
转基因产品检测技术研究进展
Progress in DetectionTechnique for Genetically Modified Organisms
许文涛
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摘要
对转基因产品的定性PCR、定量PCR、酶联免疫吸附及其它检测技术进行了系统阐述,综述了转基因产品品系特异性检测技术、内标基因、标准物质及影响检测的抑制因子等已2v取得研究进展,指出了当前转基因产品检测技术存在的问题及未来的发展前景。
DREB转录因子研究进展
Research Progress on Transcription Factor DREB
徐莎 胡军 陈宇红 向其柏 胡赞民
2008, 16(4): 0-  | doi:  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 238 )
摘要
摘要:生物和非生物胁迫,严重影响植物的生长发育,是阻碍农、林业进一步发展的主要因素。逆境胁迫信号通过多个转录因子调控与逆境相关的基因的表达,其中DREB转录因子是最为重要的转录因子之一。本文综述了近年DREB转录因子研究进展。DREB转录因子的研究进展为理解植物抗逆的分子机制及利用DREB转录因子提高植物的抗逆性提供了理论基础和技术途径。
 
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