有机磷农药（OPs）的大量施用导致水环境的污染，影响到非靶生物特别是鱼类的生存。因此，需要对OPs进行快速、灵敏、准确监测，以便及时采取必要的措施。近二十年来，国内外学者在利用生物标志物监测水体OPs方面进行了大量研究。本文对这些生物标志物的分布、结构、特点及其对OPs的响应特征进行了综述，并提出了生物标志物监测水体OPs存在的问题及进一步研究的方向。

为研究crp（cAMP受体蛋白）基因缺失及插入绿荧光蛋白基因gfp后对猪霍乱沙门氏菌弱毒疫苗株C500株的毒力及免疫原性的影响，同时为下一步构建以crp基因缺失C500为载体的外源基因-猪霍乱沙门氏菌双价口服疫苗奠定理论基础与技术基础，本文构建了C500株的crp缺失并插入gfp基因的crp-/gfp+缺失株。首先构建含缺失320bp的crp基因并插入gfp基因的重组自杀性质粒，与C500接合转移，两步法筛选无抗性的crp-/gfp+缺失株，经PCR和荧光显微镜观察证实在C500的基因组上缺失crp基因并正确插入gfp基因。

本试验采用PCR方法直接从牛早期胚胎细胞液中扩增牛干扰素-tau （bIFN-τ）基因（含信号肽基因序列），并克隆到pGEM-T载体中，筛选阳性克隆，将含信号肽和不含信号肽的bIFN-τ 片断分别克隆到原核表达载体pET-30a(+)，构建重组质粒，进行IPTG诱导表达，表达产物进行变性、复性和纯化，最后通过抗病毒活性检测和对体外培养的牛子宫内膜上皮细胞形态变化的影响，鉴定其生物学功能。结果表明，不提取胚胎基因组DNA，以胚胎的裂解液为模板，可以从少量（5枚）牛囊胚中直接扩增得到bIFN-τ基因，与Genbank报道的序列相比，核苷酸和氨基酸的同源性分别达99％和97％；SDS-PAGE电泳检测，不含信号肽的bIFN-τ基因与表达载体形成的重组质粒，在约20kD处出现特异性条带，与目标蛋白分子量一致；病毒抑制法测定rbIFN-τ的抗病毒活性单位为1×104IU/mg，在牛子宫内膜上皮细胞培养液中添加rbIFN-τ作用24 h后，细胞体积增大，细胞内出现明显的囊泡状结构，表明本研究获得的rbIFN-τ具有一定的生物活性。

本文用PCR-SSCP分析了来自我国9个省和自治区的9个品种和一个国外品种安哥拉山羊，共计465个个体的线粒体DNA编码区变异情况，然后根据PCR-SSCP的结果挑选出118个个体进行D–Loop第一高变区测序,然后截取测定序列的481bp进行分析，通过这些序列分析来揭示10个山羊品种的系统发育关系。系统建树显示10个山羊品种很明显的分成了4个支系A、B、C 和 D，我们又对所有样本进行分子差异等级分析（AMOVA），品种内的方差组分占77.77%，表明10个山羊品种间没有出现显著的遗传分化，品种间表现弱的遗传结构。通过对118条序列进行歧点分布分析，得出整个山羊群体曾经历过2次群体扩张事件。

本文通过PCR技术获得3D基因，使用拼接重叠延伸聚合酶链反应对3D基因内部的EcoRⅠ位点进行定点突变，将突变后的3D基因克隆至原核表达质粒pSOC和T4噬菌体的穿梭质粒pR中，通过PCR及质粒酶切鉴定，分别获得阳性重组子pSOC-3D和pR-3D。将含有3D基因的重组质粒pSOC-3D质粒转化大肠杆菌BL21进行表达,SDS-PAGE检测表达产物。将含有3D基因的重组质粒pR-3D转化T4噬菌体的宿主菌E2，通过同源重组获得重组噬菌体T4-3D，经SDS-PAGE及Western- blot检测，证明展示在T4噬菌体表面的3D融合蛋白能与FMDV感染血清发生特异性反应。

IGF2基因对骨骼肌的生长发育起着非常重要的调控作用。为了研究IGF2对猪胚胎骨骼肌生长发育的调控，本文建立猪IGF2基因的SYBR-Green荧光定量PCR方法，并利用此方法分析该基因在通城猪（脂肪型）和长白猪（瘦肉型）妊娠33天、65天和90天胚胎骨骼肌中的表达规律。结果表明，建立的SYBR-Green荧光定量方法可以有效地用于IGF2的表达分析。IGF2基因在两品种中都以妊娠65天时表达水平最高，呈波浪式表达模式。有趣的是，在所研究的三个胚胎时期，IGF2的表达在通城猪中均高于长白猪，其原因值得深入研究。

根据GenBank上猪TNNC2（Fast skeletal muscle troponin C2）基因序列（GenBank accession No. DQ629177）设计一对引物，采用RT-PCR方法克隆得到617 bp TNNC2 cDNA片段（GenBank accession No. EF673726），包括完整的开放阅读框（ORF），与GenBank上公布的猪TNNC2基因（GenBank accession No. AY575058）的ORF核苷酸序列同源性达99 %，并发现开放阅读框内的5个点突变，319位点T→C，320 位点G→A，321位点C→T，导致氨基酸107位Ala（丙氨酸）→Met（蛋氨酸），322位点A→G为同义突变，433位点A→T，导致氨基酸144位Glu（谷氨酸）→Asp（天冬氨酸）。根据已获得的TNNC2基因开放阅读框序列，重新设计引物扩增得到包含BamH I和EcoR I酶切位点的完整阅读框，将其首先克隆到pMD18-T载体中，经菌液PCR筛选和酶切鉴定后，用BamH I和EcoR I将目的片段切下，再克隆到原核表达载体pRSET A中构建重组表达质粒pRSET A-TNNC2。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3），IPTG不同诱导条件诱导表达，经SDS-PAGE电泳和Western blot分析证实重组表达质粒pRSET A-TNNC2表达出24 kD左右的融合蛋白，最佳诱导时间为4 h，最佳的IPTG诱导浓度为0.6 mmol/L，表达产物以可溶性蛋白的形式存在。

采用高保真PCR技术从尼罗罗非鱼（Oreochromis niloticus）基因组中分离了β-肌动蛋白（β-actin）基因片段。序列分析显示该片段包括长为1643bp的β-肌动蛋白（β-actin）基因5，端侧翼区的启动调控区和90bp的部分转录区序列。启动调控区包括一段长为108bp的β-actin基因上游调控序列、β-actin基因不翻译的第一个外显子和第一个内含子。上游调控序列中含有与转录活性密切相关的作用元件：CAAT Box，TATA Box和CArG Box，分别位于转录起始位点上游的-92，-29，-62处。将尼罗罗非鱼β-actin基因的启动调控区定向克隆到不含启动子的红色荧光表达载体pDsRed2-1中，构建了重组荧光表达载体。重组载体经EcoRⅠ线性化后，采用显微注射技术将其注射到唐鱼的受精卵中，利用荧光显微镜观察外源基因增强型红色荧光蛋白基因（DsRed2）在唐鱼中的表达。结果表明在荧光显微镜下以及普通解剖镜下均可观察到红色荧光，说明本实验分离到的罗非鱼β-actin基因启动子序列具有有效的驱动功能。该实验为下一步进行转自源基因尼罗罗非鱼的研究奠定了基础。

本研究对IFN-γ进行了不同猪品种间的基因组测序，以揭示核苷酸水平的突变，结果在IFN-γ基因中发现了3个SNP。其中2个SNP为中国地方猪种二花脸所特有，另一SNP在不同品种中具有广泛的多态分布。对于具有多态分布的SNP位点，建立了对应的PCR-SSCP检测标记。功能关联分析，尚没有发现IFN-γ基因与猪健康状况的现场记录直接相关，不过却可能关系到猪的繁殖性能表现。

本实验采用9头“军牧1号”，随机分成三组，分别饲喂高、中、低三个能量组饲料，预饲7日后，进入试验期，试验期维持14日，取下每头母猪卵巢和子宫并用液氮保存。实验结果：在卵巢上，高能组猪IGF-1R、EGFR mRNA的表达量水平显著高于低能组和中能组的表达量（P＜0.05），低能组猪卵巢上这两种生长因子受体表达量要显著低于中能组的( P＜0.05)。在子宫上，高能组猪IGF-1R、EGFR mRNA的表达量要显著高于中、低能组的表达量( P＜0.05)，低能组上这两种生长因子受体表达量要低于中能组的，但差异不显著( P＞0.05)。结果表明：日粮能量水平显著影响初情期前母猪卵巢上两种生长因子受体的表达，高能量对表达有促进作用，有利于两种生长因子作用的发挥，从而利于生殖系统的生长发育；因此，IGF-1R和EGFR可能参与介导能量摄入对初情期前母猪生殖系统发育的影响。

设计8对引物，应用聚合酶链式反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术检测促性腺激素释放激素受体（gonadotropin releasing hormone receptor, GnRHR）基因外显子1、外显子2和外显子3在高繁殖力品种（小尾寒羊和湖羊）和低繁殖力品种（南非肉用美利奴、考力代和中国美利奴绵羊）中的单核苷酸多态性，同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果发现引物P4和P7扩增片段具有多态性，其余6对引物的扩增片段都不存在多态性。对于P4扩增片段，在湖羊中检测到AA和BB基因型，在其余4个绵羊品种中只检测到AA基因型，BB型与AA型相比在外显子1有5个突变（+692G→A、+706T→A、+747T→C、+748A→T和+802T→A），并引起氨基酸改变（Gly→Ser、Asp→Glu和Leu→Pro）。对于P7扩增片段，在小尾寒羊和湖羊中都检测到CC和DD基因型，在低繁殖力的3个绵羊品种中均只检测到CC基因型，DD型与CC型相比在外显子2有+50A→G和+101A→C两个突变，并引起氨基酸改变（Glu→Gly和Gln→Pro）；小尾寒羊CC和DD基因型频率分别为0.87和0.13，突变纯合型（DD）小尾寒羊平均产羔数比野生型（CC）多0.81只（P<0.01）。

采用PCR-SSCP技术检测骨形态发生蛋白4（bone morphogenetic protein 4，BMP4）基因外显子2、3和4在高繁殖力绵羊品种（小尾寒羊）和低繁殖力绵羊品种（中国美利奴绵羊、考力代绵羊、南非肉用美利奴绵羊）中的单核苷酸多态性，同时研究该基因对小尾寒羊高繁殖力的影响。结果表明：外显子2和4在4个绵羊品种中都不存在多态性，外显子3则都存在多态性。对于外显子3的引物，在4个绵羊品种中都检测到3种基因型(AA、AB、BB)；统计结果表明：小尾寒羊、中国美利奴绵羊、考力代绵羊、南非肉用美利奴绵羊AA基因型频率分别为0.017、0.216、0.115、0.429，AB基因型频率分别为0.102、0.317、0.269、0.500，BB基因型频率分别为0.881、0.467、0.616、0.071；测序结果表明：BB型和AA型相比在BMP4基因外显子3第305位碱基处发生C→A的突变，该突变导致氨基酸由丙氨酸改变为天冬氨酸；BB型小尾寒羊平均产羔数分别比AB型和AA型多0.61只（P<0.05）和1.01只（P<0.05）。

本实验通过微卫星标记技术对我国华东地区9个家鸭资源群体（微山麻鸭、巢湖麻鸭、绍兴鸭、高邮鸭、大余鸭、金定鸭、连城白鸭、莆田黑鸭、山麻鸭）的遗传结构进行了评估。结果表明：9个品种的平均杂合度都较高，最低的为金定鸭，最高的为山麻鸭，杂合度范围为0.5137～0.6055，群体平均杂合度为0.5523，反映了各鸭种的杂合度都较高，遗传多样性丰富；华东区各鸭种间存在较大的遗传分化，25.65%的遗传变异来源于品种间的差异，更进一步反映了各品种具有本品种特征特性的多样性；通过计算DA遗传距离发现各群体的遗传距离较远，分化时间较长；NJ聚类结果将华东区家鸭资源聚为4类，NJ的聚类结果分析与几个鸭品种的地域分布和经济用途有一定关系。研究结果充分反映了华东区家鸭资源的遗传结构，对促进资源优势向经济优势的转化具有重要科学意义。

本文报道通过水稻（品种通育211）与柳叶菜科植物—-月见草进行远缘杂交，其后代出现了大量、明显的性状变异。 通过系谱选育，获得了一批在形态、生育期和多个农艺性状上有育种价值的水稻新种质。对代表性变异材料及其水稻受体亲本和供体月见草进行了AFLP分子标记分析。结果表明，月见草的花粉介入确使受体水稻材料中在DNA分子水平产生了大量的变异。文中对远缘杂交行之有效的新方法---复态导入法的特点及效应等问题进行了讨论。

应用PCR技术将发生突变的tac启动子-10区（TATGTT）回复突变为TATATT和TATGAT，构建了两个重组质粒pPM1、pPM2，酶切结果发现pPM1质粒转化大肠杆菌后部分细菌对tac启动子进行切除。将重组质粒分别与pAX1共转化大肠杆菌，提取细菌总蛋白，酶联免疫吸附法测定细菌总蛋白中activator及3α-HSD的表达量，结果表明tac启动子-10保守区为TATATT的质粒比-10保守区为TATGAT的质粒具有更高的转录活性，activator及3α-HSD的表达量高低依次均为pPM1＞pPM2＞pb。根据同源重组原理构建突变菌，并利用HPLC测定了各突变菌对睾凡酮的降解能力，结果表明不同突变菌对睾凡酮的降解能力高低依次为Cp7（C.T.+ pPM1）> Cp4（C.T.+pPM2）> Cb7（C.T.+pb）>C.T.。

WB9是我国分离自武夷山的对多种重要农业害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)菌株，经PCR-RFLP鉴定含有cry2Ac基因。根据cry2基因序列设计引物，以WB9质粒为模板扩增cry2Ac全长基因，与大肠杆菌(Escherichia coli)克隆载体pMD18-T连接获得含有cry2Ac全长基因的重组质粒pMD2Ac并测序。该基因在GenBank上登录号为DQ361267，被Bt国际命名委员会正式命名为cry2Ac4。通过亚克隆方法将cry2Ac4基因插入穿梭表达载体pHT315获得重组表达质粒pHT2Ac，将其转化大肠杆菌SCS110和Bt无晶体突变株HD73 Cry-，得到的工程菌能正常表达70 kD蛋白，形成方形晶体。生物测定结果表明，cry2Ac4基因表达产物对桔小实蝇(Bactrocera dorsalis Hendel)幼虫具有显著的毒杀作用，但对小菜蛾(Plutella xylostella)和致倦库蚊(Culex fatlgans)幼虫基本没有效果。

利用RT- PCR结合RACE技术克隆了甘薯茎线虫（Ditylenchus destructor）乙酰胆碱酯酶基因cDNA，Dd-ace-3，提交GenBank登录号EF583057。该cDNA序列5’端存在反式剪接引导序列SL1,全长2517bp ,包含一个1836bp的开放阅读框；在推导出的611个氨基酸残基的前体蛋白中, N 端的前21个氨基酸残基为信号肽, C-28的位置存在糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚定位点，除此之外的562个氨基酸残基是成熟的乙酰胆碱酯酶序列,其预测的分子量为64396.81D。在一级结构中,形成催化活性中心的3个氨基酸残基 (Ser232 ,Glu360 和His479) ,以及在亚基内形成二硫键的6个半胱氨酸完全保守；在电鳐乙酰胆碱酯酶分子的催化功能域中存在14个保守的芳香族氨基酸残基,其中11个在甘薯茎线虫乙酰胆碱酯酶中完全保守。该酶的氨基酸序列与秀丽小杆线虫（Caenorhabditis elegans）ACE-3和ACE-4的同源性达56.1%和50.0%。与其它线虫和物种乙酰胆碱酯酶的聚类分析显示，甘薯茎线虫的乙酰胆碱酯酶与Ш型乙酰胆碱酯酶ACE-3同属一个支系。

EMSA全称为电泳迁移率改变分析法，是目前研究核转录因子体外结合特性最常用的方法，但同时同位素对人体会有潜在的放射性损伤，使实验操作变得复杂。为了提高EMSA实验的稳定性和成功率，以降低实验人员接触同位素的频率，本研究对放射性EMSA实验体系进行了优化。结果表明：探针的纯化有效地降低了自显影的背景；蛋白的离心有利于获得整齐清晰的条带；采用350V的电压并且在4°C进行电泳，保证了电泳过程中DNA-蛋白复合物的稳定结合；拭去凝胶表面带有放射性的液体，并将凝胶附着于有一定硬度的纸片有利于得到清晰的显影图片。试验表明优化后的体系有效地提高了EMSA实验的稳定性和成功率。

摘要：以一株实验室保藏的酸性β-甘露聚糖酶产生菌黑曲霉（Aspergillus niger）LW-1作为原始出发菌株，首先经自然分离筛选出一株产酶较稳定的N-9作为诱变出发菌株，再经真空微波和甲基磺酸乙酯（EMS）逐级诱变处理，采用基础发酵培养基固态发酵筛选以及斜面传代培养，获得了一株高产、稳产酸性β-甘露聚糖酶的E-30菌株。其产β-甘露聚糖酶活性达36 675 U/g，是原始出发菌株（17 048 U/g）的2.15倍。E-30菌株三角瓶麸曲种子保藏两个月，产酶活性稳定。

摘要：比较四种原代角膜内皮细胞分离培养方法，并对分离培养的山羊角膜内皮细胞生长特性进行初步研究。取屠宰1～2月龄关中奶山羊角膜，无菌分离角膜内皮层和Descemet’s membrane，分别用组织块法、胰蛋白酶法、dispase法和dispase加胰蛋白酶法分离培养原代角膜内皮细胞，比较这四种方法处理后细胞离散和贴壁情况。结果显示，dispase加胰蛋白酶法为最佳分离纯化角膜内皮细胞的方法。分离的细胞经形态学观察、免疫组化染色、Giemsa染色、扫描电镜和透射电镜等方法鉴定为角膜内皮细胞。说明dispase加胰蛋白酶法为角膜内皮细胞分离培养的理想方法，该方法可为哺乳动物角膜内皮细胞的理论研究和构建组织工程化人工角膜内皮提供种子细胞。

本研究旨在建立优化的猪精液冷冻保存方法。实验表明，采用ZO液对猪精液进行预稀释，室温平衡1h，加入冷冻I液后于5℃水浴平衡1.5 h，再加入冷冻II液平衡2 h后装入0.25 mL细管，液氮面上3 cm处平衡10 min投入液氮，解冻时采用37℃水浴30s，可获得最佳冷冻效果。采用该优化方案，猪冷冻精液解冻后的精子活力可达0.58。

摘要：为了探索一种高效的无透明带胚胎培养方法，为手工核移植提供技术支持，本研究以小鼠胚胎为材料，对比了现有的3 种无透明带胚胎培养方法，对其中效果较好的WOW法进行改进，以海藻酸钙凝胶包埋小凹并且尝试与共培养技术相结合。结果显示，海藻酸钙凝胶包埋小凹法（AEW法）的囊胚发育率（54.7 %）和囊胚细胞平均数（54.3）显著高于微滴单卵培养法（MDS法）和琼脂柱包埋培养法（AE法）（p＜0.05），与WOW法相当（p>0.05）；使用AEW法进行培养时，最佳的海藻酸钠及钙离子浓度分别为0.7 %和 1.5 %；该法与颗粒细胞共培养相结合后，胚胎卵裂率（89.7 %）与囊胚发育率(67.9 %)显著高于对照组（p＜0.05）。实验结果表明，AEW法培养无透明带胚胎的效果优于其他几种方法；AEW法与颗粒细胞共培养相结合可以大大提高无透明带胚胎的胚胎卵裂率及囊胚发育率，便于无透明带重构胚的大批量培养。

选择1日龄黄羽肉鸡60只，随机分成2组。在实验组中添加3%共轭亚油酸(conjugated linoleic acid，CLA)，对照组日粮中添加3%的食用菜籽油。49日龄屠宰，采集腹部脂肪组织。用RT-PCR方法，以β-actin为内标，相对定量测定腹脂中鸡生长激素受体（cGHR）、胰岛素样生长因子-1（cIGF-1）、胰岛素样生长因子Ⅰ型受体（cIGF-ⅠR）、过氧化物增殖剂活化受体γ（cPPARγ）、脂联素（cAdiponectin）及其Ⅰ型受体（cAdipoⅠR）的mRNA丰度。结果显示：CLA处理使肉鸡的腹脂沉积下降了20.93%（P<0.05），分别使腹脂中鸡cGHR mRNA和cPPARγ mRNA降低了24.74%（P<0.05）和66.52%（P<0.01）；而对cIGF-1、cIGF-ⅠR、cAdiponectin、cAdipoⅠR 基因表达无显著影响（P>0.05）；数据提示：CLA降低肉鸡脂肪沉积的作用可能通过GH途径和PPARγ通路介导，而与IGF-1和（或）GH-IGF-1途径、Adiponectin 的作用无关。

选取产蛋性能具有明显差异的4个鸡品种（莱航鸡、阳山鸡、丝羽乌骨鸡和隐性白洛克鸡）构建品种DNA池，通过测序研究鸡催乳素基因5′-侧翼调控区部分序列（1028 bp）的单倍型，快速筛查到由4个多态位点（C-2402T、C-2161G、C-2062G和G-2040A）组成的2种最常见单倍型CCCG和TGGA，其中CCCG在莱航鸡品种中的频率接近1，可能利于产蛋。再利用RFLP和SSCP将这4个位点在品种及家系中进行基因分型，基因分型之后的统计结果与测序的结果基本相符。利用农大褐×泰和丝羽乌骨鸡家系检测CCCG单倍型的效应，发现含有此单倍型的单倍型组合具有更高的产蛋量。由6个位点组成的单倍型H3（CCTCTG，由CCCG再加上T-2101和T-2054组成）在莱航鸡的频率为1，在参考家系中检测H3的效应，发现含有H3的单倍型组合具有很高的产蛋量，并且与其它类型达到显著性差异。从本研究可见，利用这种方法能有效筛查到可能的效应单倍型。

新一代Semliki森林病毒RNA复制子源自甲病毒属Semliki森林病毒的基因组，它克服了一些现有的DNA和RNA载体表达效率低的缺点。复制子保留了编码病毒复制酶的基因，结构基因被外源基因所取代。复制酶能够使RNA在胞质中高水平的复制以及外源基因高水平的表达。为了评价SFV复制子载体提高外源基因表达的效力，本研究首先对pIRES-neo表达载体用BamHⅠ酶切和去磷酸化，连接LacZ基因，构建了普通真核表达载体pIRES-neo-LacZ。然后采用脂质体介导分别将含报道基因LacZ复制子载体pCMV-rep-LacZ和两个普通表达载体pLNCX-LacZ、pIRES-neo-LacZ转染293细胞；将表达GHRH的复制子载体pCMV-Rep-GHRH和普通载体pIRES-GHRH、pCDNA3-GHRH转染293细胞。分别对不同载体转染细胞表达的β-半乳糖苷酶以及利用RIA 、RT-PCR对表达的GHRH进行了定量分析，结果表明：复制子载体表达外源基因的效率比非复制子载体高2～3倍。本研究为提高外源基因在真核细胞的表达提供了有益的探索。

激活标签技术（activation tagging）在植物功能基因组学的研究中具有重要的作用。本文以拟南芥bzr1-D为试材，用农杆菌介导的转化方法，构建了一个含有30000个独立抗Basta株系的激活标签突变体库。其中有47个株系有明显的表型改变，包括花期的改变、株型矮小、叶片形状改变、叶柄变长、叶表皮毛消失、育性降低以及恢复了bzr1-D茎叶处的打折等。并通过TAIL-PCR和Nested PCR的方法得到了若干T-DNA侧翼序列，为克隆引起突变表型的基因以及进行后代遗传分析打下基础。

植物基因组中数目众多的类受体激酶在植物的正常生长发育和对外界环境的反应中都具有重要意义。在类受体激酶的跨膜区和激酶结构域之间有一段序列上并不保守的区域，一般为20几个氨基酸，称为近膜区。在动物受体激酶研究中证实，该区域对激酶活性具有调控作用。在前期工作中，本实验室对水稻激酶进行了克隆、表达和自我磷酸化活性分析。为了研究近膜区对植物类受体激酶活性的影响，本实验进一步克隆和表达了缺失近膜区序列的水稻类受体激酶，并进行了自我磷酸化活性分析。结果表明，缺失近膜区对激酶蛋白质的表达没有明显影响，但是对其活性检测发现，17个缺失近膜区的激酶中有14个激酶的活性丧失。这一结果表明在植物类受体激酶中，近膜区对激酶的活性也具有重要影响。

在成功构建乙烯利刺激条件下巴西橡胶树胶乳差异表达cDNA消减文库的基础上，我们克隆了巴西橡胶树胶乳UEP（ubiquitin extension protein）基因的cDNA全长序列。结构分析表明，该基因cDNA全长771bp，拥有一个468bp的开放阅读框架，77个核苷酸的5`UTR和226个核苷酸的3`UTR，编码156个氨基酸；Southern blot检测结果显示，UEP基因在巴西橡胶树基因组中属低拷贝基因。胶乳UEP基因的表达受到乙稀利的调节。在乙烯利处理后的24小时内，12小时收集的胶乳中UEP基因表达最强，对照和处理6小时的胶乳中表达最弱。乙烯利刺激可以促进巴西橡胶树胶乳增产和加速乳管衰老。这一结果暗示，UEP基因可能参与了乙烯利刺激巴西橡胶树胶乳增产或加速乳管衰老程的分子调控。

摘 要:直链淀粉和蛋白质含量是影响稻米品质的重要性状，对其进行有效预测具有重要意义。本研究用18个亲本及其所配制的81个水稻杂交组合（按NCⅡ设计）为材料，利用有多态性的SSR标记筛选与 F1直链淀粉和蛋白质性状相关的阳性位点和增效位点，分别用二组法和三组法对F1性状值进行预测，并建立相应的预测模型。结果表明：1)对稻米直链淀粉和蛋白质含量预测可以取得较好的效果，增效位点明显优于阳性位点；2）因性状和材料不同存在一定差异，固定恢复系预测优于固定不育系预测，对直链淀粉的预测优于蛋白质的预测；3)二组法对固定恢复系的预测效果明显优于三组法，直链淀粉和蛋白质的预测值在二组法中分别为0.8076和0.6722，三组法分别为0.6823和0.4174；在固定不育系的预测中两种方法差异不明显。

长江大学农学院， 荆州 430025) 摘要：对籼粳杂交组合"中花11（粳）/中组14（籼）"F1进行花药培养，获得112个二倍体再生植株。利用亲本间多态性SSR分子标记对该群体二倍体再生植株进行纯合性鉴定，并分析该群体基因型偏离情况。选用22个多态性标记分析结果表明，所得再生植株都为来自花粉母细胞的纯合植株，不存在来自于体细胞的杂合株，确保了DH群体的准确性。多态性SSR带型分析结果表明，该群体未发生异常的基因型偏态分离。因此，在组织培养体系中引进SSR标记，快速准确稳定了DH群体，基因型偏态分离分析保证了群体的质量，为后续的图谱构建及基因定位工作奠定了基础。

采用正交试验设计的方法，建立了枣SRAP分析的优化反应体系，即20µL反应体系中含有1×buffer，dNTP 200µmol/L、引物各30ng、MgCl2 2.5mmol/L、Taq酶1.0U和模板DNA 20ng。适宜的扩增条件为94℃预变性5min；94℃变性1min，33℃复性1min，72℃延伸1min，5个循环；94℃变性1min，53℃复性1min，72℃延伸1min，30个循环；最后72 ℃延伸5min。本研究建立的枣SRAP 体系重复性好，稳定性强。

由格兰氏阴性菌 Erwinia amylovora引起的梨火疫病对梨树、苹果树以及一些观赏性植物具有极大的破坏性。研究表明自然界中存在不含有pEA29质粒的E. amylovora菌株，基于质粒pEA29序列设计的分子检测方法则不能检测出该菌株。本研究采用两对引物，分别来自染色体和pEA29质粒，同时在一个反应体系中进行PCR反应，扩增片段长度分别为1.6 kb和1.0 kb，可特异性检测不含有pEA29质粒的菌株。该方法可以简单、快速、准确地检测梨火疫病原细菌。

分别于出生当天、3、14、23、28 日龄随机屠宰杜长大公猪4头，采集骨股骨髓组织。用RT-PCR方法，以18S rRNA作内标，定量分析不同日龄仔猪骨髓组织抗菌肽PR-39 mRNA表达的差异及断奶对其表达的影响。结果表明：不同日龄仔猪骨髓组织PR-39 mRNA 相对丰度有明显的差异(P < 0.05)。出生时较低，吮吸初乳2天后显著增加(P < 0.05)，14日龄时较3日龄显著下降(P < 0.05)，随后随日龄的增加，其表达量呈上升趋势；断奶导致其显著下降(P < 0.05)。

对猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome viurs, PRRSV）分离株NB/04的全基因组序列测定与分析。该毒株基因组全长15408bp，包含9个开放式阅读框，5’Untranslating Region(UTR)含有189nt，3’UTR含有150nt，其中包含28个Poly（A）。基因组序列分析结果表明，该毒株的Nsp2存在3个核苷酸缺失，3’UTR缺失一碱基。通过与国内外美洲型PRRSV分离株比对分析可知，非结构蛋白区的Nsp2和结构蛋白区的ORF5变异率最大。特别是Nsp2与国内主要分离株的氨基酸相似性在79.3%-96.4之间，ORF5与国内主要分离株的相似性介于86.1%-95.5%。依据Nsp2的推导氨基酸序列进行的系统进化分析可知，NB/04属于北美洲基因型，与BJ-4属于同一分支，而与中国标准株Ch-1a分属于不同的分支，表明浙江PRRSV已发生较大的变异。本研究结果丰富了我国PRRSV毒株的基因组信息数据，为深入研究该毒株的遗传变异与生物学特性之间的关系奠定了基础。

蛋白的S-亚硝酰化修饰作用是典型的基于氧化还原势的信号机制，是一种非常重要的翻译后修饰方式。对该作用的研究最早出现在动物研究领域，近年来，对植物蛋白S-亚硝酰化修饰作用的研究越来越深入，研究表明S-亚硝酰化作用在植物生物学尤其是在植物抗病性等方面发挥着重要作用。