摘要：苏云金芽胞杆菌中华亚种CT-43菌株（Bacillus thuringiensis subsp.chinensis）是高产苏云金素(简称Thu)的野生菌株。但在产生Thu时总伴随有其他代谢物（简称ZZ）的合成，而且ZZ很难与Thu分离开。本实验通过比较不同的培养基，得到G培养基能抑制菌株CT-43合成ZZ。然后利用分批补料发酵的方法，通过正交试验设计，进一步抑制ZZ的合成，并提高Thu在有机萃取物中的含量。得到优化后的发酵工艺：菌株CT-43在G培养基中培养至第20 h，同时补柠檬酸钠和葡萄糖至终浓度分别为2.0g/L和16g/L，再继续发酵至第52h。通过此发酵工艺制备的Thu峰面积占初提物总峰面积74.84，比用LB培养基发酵所得提取物的29.85%提高了一倍多。为得到高纯度的Thu和更深入的研究创造了条件。最后通过液质联用技术证实，发酵工艺优化后，菌株CT-43发酵上清液提取物中主要物质是Thu，几乎检测不到ZZ。

本实验提出一种采用碱裂/醇沉法制备植物组织基因组的新方法。这种方法对传统碱裂解制备基因组的方法进行优化，并且引入异丙醇沉淀步骤对基因组进行纯化，从而扩大了碱裂解法制备基因组的适用范围。这种方法广泛适用于多种植物基因组提取，并且可直接从植物种子中快速提取出用于PCR模板的基因组。此方法对于600bp以下的目的基因的检测效果显著，对内源基因和外源基因均有良好的扩增效果，可以发现待测组分含量大于1%的样品。整个基因组提取时间控制在21min，大大缩短了基因组提取时间，并且避免了酚/仿等对人体有害药品的使用。

摘要 [目的]研制禽流感病毒H5亚型（AIV-H5）金标快速诊断试剂盒，建立AIV-H5快速诊断技术。[方法]应用纯化抗原免疫Balb/c小鼠,得到2株配对良好的单抗；采用金标免疫层析法制备禽流感病毒H5亚型金标快速诊断试剂盒，并对试剂盒性能进行评价。[结果]试剂盒特异性强，灵敏度高，稳定性良好；试剂盒检测人工感染的鸡脏器组织，结果与鸡胚病毒分离培养法符合性良好；田间试验结果与荧光RT-PCR试剂盒符合率达100%。[结论] 禽流感病毒H5亚型金标快速诊断试剂盒是一种特异性强、灵敏度高的快速诊断技术产品。

单核苷酸多态性（Single nucleotide polymorphisms，SNPs）是许多生物体基因组中最普遍存在的遗传变异形式，作为新一代的分子标记具有密度高、双等位基因、易实现自动化检测等特点，已广泛应用于家禽遗传育种学的研究中。本文综述了近年来有关家禽SNP发掘、基因分型技术、多态性特征以及在遗传育种中应用的新进展，并展望了其在家禽研究中应用的前景。

摘要：为研究苎麻纤维发育的基因表达并分离克隆与纤维形成相关的基因，以封行期的苎麻茎皮为材料构建cDNA文库，滴度、插入片段长度等质量分析表明文库符合要求。从文库中随机挑选384个克隆测序获得274条有效序列。生物信息学分析表明：拼接出217个TUTs，冗余度为20.8%；BLAST比对获得91条已知功能基因或具推测功能基因的ESTs，其余126个ESTs为未知基因。91条具已知或推测功能的ESTs大致分为9类，其中与细胞壁有关的ESTs占5.5%。对与细胞壁有关基因中的ADF和β-微管蛋白基因进行半定量RT-PCR 分析，结果显示这两个基因在所测时期和组织中均有表达，在封行期的茎皮高度表达。ADF和β-微管蛋白基因的表达具有时空特异性。

摘 要：为克隆鹅产蛋性能相关基因，从而深入研究鹅产蛋的分子机理，以籽鹅卵巢组织为实验材料，以λTriplEx2为载体，用SMART方法构建了籽鹅卵巢组织的全长cDNA文库。结果表明，该文库初始滴度为3.1×106 pfu/mL，重组率为94 %，插入片段长度集中在0.5～2 kb。随机挑取120个克隆测序，测定的部分cDNA序列与BLASTn进行比较，发现大部分与原鸡具有较高的同源性。由此可见，本研究成功建立籽鹅卵巢cDNA文库，该文库的构建为进一步筛选、克隆鹅产蛋性能相关基因的研究奠定基础。

GLABRA2（GL2）基因在拟南芥毛状体发育中具有重要作用。本文利用基因组步移克隆得到一个油菜GL2启动子序列，序列分析发现它与拟南芥GL2启动子同源性较差。将其中具有启动子的基本特征的序列GP1与GUS报告基因融合构建重组载体pBI121-GP，转化拟南芥。用卡那霉素筛选得到10株阳性苗。在T2 代转基因株系中有6个株系的绿苗与黄花苗的比例都接近3：1，推定T-DNA是以单拷贝的形式插入拟南芥基因组DNA。GUS组织化学染色表明，重组载体具有特定的时空表达模式，主要在子叶、真叶的表皮毛以及根部的幼嫩组织中表达，与拟南芥GL2基因启动子表达模式基本一致，但也有明显不同：油菜GL2启动子GP1只在表皮毛发育早期强烈表达，而拟南芥GL2启动子调控表皮毛发育的整个过程。

为确定嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila，Ah）AS1.927株外膜蛋白OMP的表达产物是否具有抗原性及测定对小鼠的免疫保护力，根据GenBank上嗜水气单胞菌外膜蛋白ompA基因序列（登录号：AF146597）设计1对引物，克隆出ompA全长基因（1020 bp），经Sal I和Xhol I双酶切后连接pET-30a(+)，转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL21，IPTG诱导表达，经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定。结果显示重组基因工程菌E.coli [pET-30a-ompA] 表达的融合蛋白可以被鼠抗嗜水气单胞菌外膜蛋白抗血清识别，说明重组蛋白OMP具有良好的免疫原性。将重组基因工程菌E.coli [pET-30a-ompA]口服免疫BALB/c小鼠；末次免疫1周后对小鼠肠粘膜SIgA水平（放射免疫分析）的检测结果揭示：该重组基因工程菌能提高SIgA的分泌（P<0.05）；同时小鼠血清中测出特异性抗体（P<0.05）。末次免疫2周后用3.3 × 105 cfu的Ah AS1.927（100 LD50）腹腔注射攻击小鼠，重组蛋白对小鼠的相对免疫保护力（relative percent survival，RPS）为75%，表明重组基因工程菌可诱导小鼠产生一定的免疫保护作用。

玉米赤霉烯酮（Zearalenone，ZEN）是世界上污染范围最广泛的一种镰刀霉毒素，能导致人或动物不孕、流产等症状，损害内脏器官并促进癌细胞的生长。近十年，玉米赤霉烯酮降解性研究取得一些进展，如日本报道了降解玉米赤霉烯酮的乳糖水解酶编码基因zhd101。本研究从粉红螺旋聚孢霉（Gliocladium roseum）中克隆获得ZEN降解酶编码基因（ZEN-jjm），序列分析结果表明与zhd101存在9个碱基的差异；通过原核表达系统，获得了与乳糖水解酶结构不同但活性相似的蛋白酶，证实其具有降解ZEN的功能。

从矮牵牛(Petunia hybrida)花瓣中分离得到编码蓝色基因F3’5’H(类黄酮3’,5’羟基化酶)的Hf2基因(1527bp)，从牵牛(Ipomoea nil)花瓣中分离得到dfr基因(二氢黄酮醇4－还原酶，1212bp)，将正向Hf2片段和反向dfr片段连接到pBRLys双元载体质粒上，得到具有Ubi(Ubiquitin)组成型启动子的植物表达载体pUbi-Hf2-dfr。利用冻融法将双价重组质粒pUbi-Hf2-dfr导入农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EHA105中，菌落PCR鉴定农杆菌转化子。以中国水仙(Narcissus tazetta var. chinensis)愈伤组织为材料，进行遗传转化。CTAB法提取130株中国水仙遗传转化再生苗的基因组DNA，进行PCR和PCR-Southern blot检测，获得3株阳性转基因植株。

抗病基因在植物抗性遗传机制中起着重要的作用。在本实验室前期已克隆得到的“早酥”梨抗病基因同源类似物Pb-Zs3的基础上，利用基于同源序列的候选基因法获得了该基因的cDNA全长序列，命名为Vnp1(GenBank登录号：FJ763188 )。生物信息学分析表明Vnp1属于新基因，其cDNA全长为1200bp，包含一个完整的921bp的开放读码框架(ORF)，编码306个氨基酸残基，预测其分子质量为34.6kD。同时，该基因含有与抗病相关的保守结构域disease resistance protein和NB-ARC，同源性比对显示其与苹果黑星病菌诱导后的苹果EST序列同源性达71%。按照对其半定量RT-PCR研究的结果表明，Vnp1在梨黑星病菌诱导后的叶片中的表达量呈明显上升趋势，进一步说明Vnp1基因与梨黑星病的抗病性存在一定的相关性。

通过40%及80%硫酸铵分级盐析，CM Sephorose F.F.离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析；从银杏(Ginkgo biloba)种仁中分离纯化到一种表观分子量约为12kD的抗菌蛋白。经过MALDI-TOF-MS PMF鉴定表明，该蛋白与一种新型抗菌蛋白Gnk2（ginkbilobin-2）具较高匹配率(P<0.05)；根据ESI-MS/MS内肽氨基酸测序结果设计简并引物，扩增该蛋白基因一段，经比对发现与Gnk2基因序列相似性也达99%。按照Gnk2基因序列设计同源引物，利用RT-PCR克隆该抗菌蛋白全长基因，提交GeneBank(Accession No.FJ865399)，并以此构建原核表达载体pGEX-GK2-1转化大肠杆菌BL21（DE3），SDS-PAGE 和 Western blot分析表明融合蛋白在大肠杆菌中能够高效表达。这为抗菌蛋白抗菌机理的深入研究以及转基因抗病种质的获得等方面奠定基础。

LJAMP2是一种分离自益母草种子的非专一性脂转移蛋白类抗菌蛋白。为了获得足量的蛋白样品以满足其抗菌机理研究之需，我们将编码成熟的LJAMP2蛋白的基因（GenBank Accession No. AY971513）插入到巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达载体pPIC9K中；重组质粒pPIC9K-LJAMP2 经线性化后，用电转化法导入毕赤酵母(P. pastoris)菌株GS115（his-/mut+）中。转化子用含1.75 mg/mL G418的YPD 平板筛选获得多拷贝Mut+转化子。最后，将1%甲醇诱导LJAMP2表达后的发酵液，经进一步浓缩、凝胶过滤脱盐、CM FF阳离子交换色谱和反相HPLC进行纯化，获得纯度达到90%以上的LJAMP2；菌株诱导24h即有LJAMP2的表达，诱导168h表达量达到最高；表达的LJAMP2蛋白对黑曲霉等真菌表现出抑制活性。

摘要：目的 构建含有GnRH六聚体基因的pMAL-c4x-GnRH6的重组质粒，转化到 大肠杆菌TB1中进行表达，并对表达的目的蛋白的免疫原性进行检测。方法 将人工合成的GnRH六聚体基因片段连接至pMAL-c4x载体，获得的阳性克隆转化到大肠杆菌TB1中进行表达。采用SDS-PAGE, Western blot进行鉴定，并通过动物实验对表达产物的免疫原性进行检测。结果 获得了分子量大小约为50kD的MBP-GnRH6融合蛋白，融合蛋白与GnRH抗体的反应性较好，并且能使睾丸萎缩、变性。结论 成功构建了pMAL-c4x-GnRH6重组质粒和工程菌，重组MBP-GnRH6融合蛋白具有较好的反应原性和免疫原性，可用于小鼠的免疫去势。

蔷薇科苹果是一个典型的配子体型自交不亲和性果树树种，确定苹果品种的S基因型对于合理配置授粉树和杂交育种亲和性亲本选择具有重要意义。本研究对46个苹果品种基因组DNA进行S等位基因特异性PCR扩增，鉴定了它们的S基因型。另外，从苹果品种‘达尔文’和‘金沙依拉姆’中克隆得到了两个新S-RNase基因，分别命名为S53-RNase和S54-RNase，它们在GenBank上的登录号分别为FJ602074和FJ602075。

摘要：油茶良种鉴别是解决目前生产上种苗混乱的重要途径。本研究采用SRAP分子标记方法，对油茶长林系列12个优良无性系进行分析。筛选出15对多态性高的引物，共扩增得到423个位点，多态性位点达到93.14%，品种特异性条带达50条，其中有13对引物能够独立鉴别所有供试材料。为了提高鉴别效率，选择多态性高的24个位点建立了所有材料的DNA指纹图谱，实现了供试材料的有效鉴别。遗传距离分析和聚类分析表明，长林系列无性系间存在很大的遗传差异，遗传背景复杂，这为油茶良种选育提供了理论基础和依据。

以黄瓜高感CMV和高抗CMV亲本组合（HZL04-1×F-3）的F2分离群体为试材，采用极端个体分组法和AFLP技术筛选与黄瓜抗CMV基因连锁的分子标记。AFLP引物组合E22M88在抗病组和感病组间约200bp处表现多态性。经F2单株分析，在感病亲本和感病单株中扩增出了约为200bp的特异片段，而抗病亲本和抗病个体无此条带。该特异标记与CMV抗性基因相连锁，遗传距离为9.74cM。测序结果显示，目标片段的大小为202bp，并将该标记转换为了SCAR标记。提供了黄瓜材料CMV抗性鉴定的分子方法和手段，可用于分子标记辅助育种。

摘要：本研究利用先前基于基因芯片技术构建的母猪妊娠阶段相关基因的调控网络，并结合生物信息学分析，筛选出一些与母猪妊娠相关的有价值的新候选基因。选取其中一个位于网络顶端的EST序列（CK455976）进行研究。根据此EST序列设计引物，以母猪卵巢为材料提取总RNA，运用RT-PCR技术和RACE-PCT技术对其进行cDNA全序列克隆，得到此基因cDNA全长596bp，并提交GenBank数据库，得到GenBank收录号FJ436413。经分析发现其中5`UTR长67bp，3`UTR长175bp，编码区长354bp，编码117个氨基酸。通过同源性比较预测了基因DNA序列全长约1123bp。利用同源性比对分析还发现，该基因核苷酸序列与人、小鼠和猕猴的同源性分别为83%、70%、83%；编码的氨基酸序列同源性分别为74%、55%和74%。经生物信息学分析，预测出DPPA5的相对分子量约为13.60KD，等电点为5.24，在大约10~19、24~42、47~77、84~90、101~118位之间氨基酸存在疏水性区域，分析结果还表明DPPA5为膜外蛋白。

摘要：本研究以分离新生牛腹股沟白色脂肪组织的前体脂肪细胞进行原代培养为基础，采用MTT比色法和油红O提取比色法研究10 ng/ml、50 ng/ml、100 ng/ml、200 ng/ml 表皮生长因子（EGF）对牛前脂肪细胞增殖及分化的影响，同时通过半定量RT-PCR检测不同浓度EGF处理细胞第8天时对分化标志基因脂蛋白酯酶（Lipoprotein lipase, LPL）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（Peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ）、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白（adipocyte fatty-acid-binding protein,A-FABP）mRNA 表达的影响。结果表明，10ng/ml EGF能极显著促进前脂肪细胞的增殖（P<0.01），在分化诱导后添加不同浓度的EGF在第8天均可促进脂肪细胞的分化，并能促进脂肪细胞分化标志基因LPL、PPARγ和A-FABP的表达。因此，EGF可以促进牛前脂肪细胞的增殖和分化。

摘要: 用PCR-SSCP和测序技术研究了荷斯坦奶牛和鲁西黄牛两个群体共673个个体HSP70基因的3′-侧翼区的遗传变异，并与产奶性状和耐热性状进行了关联分析。设计引物扩增片段大小500bp，扩增产物具有多态性。供试的72头鲁西黄牛和601头荷斯坦奶牛均发现三种基因型，分别为AA型、AB型、BB型。通过测序发现HSP70基因的3′-侧翼区存在1个新的突变，T→C 。关联分析结果表明，BB基因型的荷斯坦奶牛个体，乳脂率、乳蛋白率、305d产奶量、相对于AA基因型的个体都要高；红细胞钾含量和产奶量下降率比AA类型的个体要低，且达显著水平(p＜0.05)。这说明BB型奶牛的耐热性能高于AA型的奶牛。鲁西黄牛B基因的基因频率很高，而荷斯坦奶牛却比较低。鲁西黄牛的耐热性显著强于荷斯坦奶牛，推测这两个品种的耐热性的差异可能与基因型差异有关。这从另一个方面说明B基因应该是抗热基因，A基因为非抗热基因。耐热性最高的BB型奶牛产奶量下降率显著低于耐热性差的AA型奶牛，说明耐热性能与生产性能有很大相关性。因此hsp70基因可作为抗热应激的奶牛选育分子遗传标记。

为探讨热应激对奶牛瘤胃纤维分解菌的影响。选择48头产奶母牛，按照因子试验设计分为中期和后期、高产和中产、初产和经产牛。奶牛经历一周热应激后，采集瘤胃液，利用RT- PCR定量6种纤维分解菌的含量，结果显示泌乳后期牛瘤胃液中黄色瘤胃球菌（Ruminococcus flavefaciens）比中期牛高13.9%、栖瘤胃普雷沃氏菌（Prevotella ruminicola）高5.3%、总瘤胃球菌（Genus-level ruminicola）高3.7%。高产牛栖瘤胃普雷沃氏菌（Prevotella ruminicola）高于中产牛14.4%、黄色瘤胃球菌（Ruminococcus flavefaciens）高12.6%。经产牛黄色瘤胃球菌（Ruminococcus flavefaciens）高于初产牛12.6%、栖瘤胃普雷沃氏菌（Prevotella ruminicola）高3.2%、琥珀酸丝状杆菌（Fibrobacter succinogene）高2.4%、白色瘤胃球菌（Genus prevotella）高2.1%。综上所述，在热应激状下，奶牛瘤胃中黄色瘤胃球菌（Ruminococcus flavefaciens）和栖瘤胃普雷沃氏菌（Prevotella ruminicola）变化较大。

摘要：在McCoy’s 5a无血清培养系统研究了牛卵泡液（BFF）、促性腺激素（FSH、LH）联合对牛腔前卵泡的体外生长、发育、存活及雌二醇（E2）分泌的影响。结果显示，在无促性腺激素下，添加不同比例BFF对牛腔前卵泡体外发育无明显促进作用（P>0.05），但可刺激体外培养腔前卵泡的E2分泌。当有10ng/ml LH和50ng/ml FSH存在下，培养不同时间腔前卵泡的发育率、存活率，各卵泡液组均高于对照组，其中10 %卵泡液组培养6 d时腔前卵泡发育率（78.52%）与对照组（49.28%）差异显著（p<0.05），培养12 d的直径增长值为33.7±4.8μm，显著高于对照组及其它处理组（P<0.01），同时在培养9d时，有一枚卵泡成腔；各添加卵泡液组的E2分泌量更高，其中添加10%BFF组中Φ>100μm腔前卵泡在培养6d时E2分泌量达最高，为48.96±11.54 pg/ml。表明促性腺激素存在下，培养液中加入10%牛卵泡液可显著提高腔前卵泡在体外的生长、发育、存活和E2分泌及诱导卵泡腔的形成。

根据Genbank发表的鸡的IGF-1基因序列针对外显子2和外显子3设计2对引物，采用PCR-SSCP技术检测边鸡，以及两个对照群体（京海黄鸡和尤溪麻鸡）中的单核苷酸多态性。结果表明：P1扩增片段在3个鸡品种中未检测到多态，说明检测的IGF-1外显子2比较保守；P2扩增片段具有多态性，在3个品种中都检测到3种基因型（AA、AB和BB）。在边鸡和京海黄鸡中A等位基因为优势等位基因，而在尤溪麻鸡中B等位基因为优势等位基因。克隆测序表明，AA型与BB型相比有两处突变(93A→G和148G→A)，其中148bp处的突变导致氨基酸由谷氨酸变为赖氨酸，通过与Genbank中的鸡IGF-1基因序列比对，发现两处突变分别位于IGF-1基因外显子3的62bp和117bp。

以四川白鹅（Anser cygnoides）原代培养肝细胞为模型，测定了油酸对鹅肝细胞活性、三酰甘油（TG）含量、脂滴形成的影响，同时研究了油酸对肿瘤坏死因子α（TNFα）和过氧化酶体增殖物激活受体α（PPARα）基因表达的作用。结果表明：0.5 mmol/L的油酸能够增强肝细胞活性，而1.5 mmol/L油酸对肝细胞活性有抑制作用。添加不同浓度的油酸都能诱导鹅肝细胞TG含量和脂滴增多，但1.0 mmol/L的油酸作用最明显。0.5 mmol/L、1.0 mmol/L和1.5 mmol/L的油酸都能提高PPARα的mRNA水平；而0.5 mmol/L和1.0 mmol/L油酸均能提高TNFα的基因表达，但1.5mmol/L油酸对TNFα的mRNA水平没有明显影响，表明PPARα和TNFα基因表达水平变化对于维持鹅肝细胞内脂质代谢的平衡具有重要作用。

摘要：对大黄鱼(Pseudosciaena crocea)进行8.5 ℃急性低温胁迫处理，利用肝脏进行蛋白质组双向电泳分析。凝胶图谱经PDQuest软件分析，低温胁迫组大黄鱼蛋白点共1593± 41个，对照组1620± 37个。共有16个蛋白点在低温胁迫后，表达量发生显著变化。从中挑选4个差异蛋白点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)或液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析，数据库搜寻。结果显示：低温胁迫后，大黄鱼肝脏N-乙基马来酰亚胺敏感的融合蛋白(NSF)、角蛋白18 (CK-18)和2-cys peroxiredoxins (2-Cys Prxs)表达显著下调，而肌球蛋白重链(MHC)表达显著上调。结果提示，在急性低温胁迫下，大黄鱼体内环境的动态平衡被打破，当这种变化超过了大黄鱼的机体调节能力，就会引起大黄鱼的各种生理反应，甚至死亡。

目的 研究不同来源肠球菌的耐药表型以及I类整合子携带率。 方法 根据NCCLS（2007）规定的体外药敏实验方法，采用浓度稀释法、药敏纸片法（P-A法）和VITEK-AMS全自动药敏实验法相结合的手段，检测不同动物源性140株肠球菌分离株的耐药表型；同时采用I类整合子整合酶基因PCR方法，检测I类整合子的携带率，并对代表株的整合酶基因进行克隆测序。 结果 I类整合酶基因总阳性率为52.14%，猪、鸡、牛和羊源性肠球菌的携带率分别为59.52%、52.63%、46.67%和46.67%，其中粪肠球菌和屎肠球菌耐药率的比例无显著差异（P＜0.05）；临床分离株对阿莫西林、氨苄西林、头孢唑啉、环丙沙星、克林霉素、红霉素、庆大霉素、呋喃坦啶、青霉素、利福平、四环素、万古霉素的耐药率分别为62.14%，60.00%，50.71%，77.86%，17.14%，69.29%，76.43%，20.00%，68.57%，80.71%，51.43%，0.00%；其中整合子阳性菌株对阿莫西林、氨苄西林、庆大霉素的耐药性相比于整合子阴性菌株表现为极显著（p＜0.01），对红霉素和青霉素的耐药性介于极显著和显著之间（0.05＞p＞0.01），对头孢唑啉、环丙沙星、克林霉素、呋喃坦啶、利福平、四环素的耐药性不显著（＞0.05）。结论 动物源性多重耐药肠球菌大量存在，肠球菌分离株中I类整合子广泛分布，提示畜牧业生产中应加强肠球菌耐药性的监测，以阻断耐药菌株在不同动物和人之间的散播，且I类整合子在传播动物源性肠球菌多重耐药性中的作用不可忽视。

采用质粒pCM20进行青枯病生防菌蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus，ANTI-8098A）的电击转化，对电击转化条件的优化结果表明，当电击条件为2.5 kv，200 Ω，25 μF时，转化的最佳条件为质粒DNA含量为118 ng，感受态细胞浓度为1.14×108 CFU/mL。转化子ANTI-8098A:pCM20在无红霉素选择压力的M9培养基中，绿色荧光菌体细胞含量比在含有红霉素选择压力的M9培养基中含量低。对其生长曲线的测定结果表明，青枯病生防菌ANTI-8098A的生长速度和ANTI-8098A:pCM20基本一致。不同培养温度和培养转速对ANTI-8098A:pCM20生长的影响较大，当培养温度为35 ℃时，ANTI-8098A:pCM20的含量为60.0×108 CFU/mL，当培养转速为250 r/min时，ANTI-8098A:pCM20的含菌量为50.33×108 CFU/mL。青枯病生防菌ANTI8098A: pCM20和ANTI8098A对不同作物分离的青枯雷尔氏菌具有明显的抑制作用，抑菌效果无显著差异。

本文利用变性梯度凝胶电泳（DGGE）分析不同ICR小鼠在口服急性毒性试验中摄入Cry1C蛋白前后其肠道菌群的变化，进而对该抗虫蛋白的食用安全性进行较为深入的研究。DGGE图谱经UPGAMA聚类分析显示：小鼠间菌群结构存在较明显的个体差异；本实验期间，对照组小鼠灌胃前后其菌群基本保持稳定；试验组小鼠试验前后肠道菌群变化差异较对照组明显。然而，随着灌胃的停止其变化差异在经历过高峰后会随着停喂时间的延长而减小，且菌相有逐渐恢复灌胃前结构的趋势。因此，从肠道菌相的角度分析可知：该抗虫蛋白Cry1C对小鼠是基本安全的。

摘要：从GenBank中获取新型甲型H1N1流感病毒（2009年流行株）HA和NA基因序列，通过多重序列比对之后，设计合成H1和N1基因特异性的引物和探针，用来建立新的甲型H1N1亚型流感病毒的多重实时RT-PCR检测方法。合成的两条荧光探针分别标记FAM和CY5荧光报告基团，荧光淬灭均使用BHQ基团。多重实时RT-PCR实验在ABI7500实时PCR仪上进行，经过40个循环的扩增之后，阳性对照出现标准的S型曲线，并且具有良好的特异性，可以很好地将新的甲型H1N1与传统的甲型H1N1以及H3N2、H5N1、H6N2和H9N2等流感病毒区分。多重实时RT-PCR可以检测到10个拷贝的模板，灵敏度接近检测方法的极限。检测时间短，从加样到反应结束只需要90min。在对243例发热病人临床样品检测过程中发现7例阳性，1351份猪临床样品检测中未发现阳性，该检测结果和采用中国检验检疫科学研究院研制的试剂盒获得的检测结果一致。本研究所建立的快速、准确和高敏感性的多重实时RT-PCR方法非常适用于新型甲型H1N1流感病毒的实验室筛查与鉴别诊断。

生物信息学分析发现，热硫化氢高温厌氧杆菌（Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus）的?-淀粉酶/普鲁兰糖酶(?-amylase/pullulanase)基因中的一段未知功能序列Ttx31可能编码碳水化合物结合结构域（Carbohydrate binding module, CBM），但其结合特性未知。本实验以T. thermohydrosulfuricus为材料，通过菌落PCR扩增其Ttx31序列，将获得的Ttx31克隆到表达载体pET22b(+)中得到重组质粒pEX31，序列分析表明，所得重组表达载体pEX31中的Ttx31序列正确。将重组载体pEX31转入大肠杆菌宿主表达菌Tuner中，IPTG诱导表达后纯化，采用SDS-PAGE电泳和非变性亲和凝胶电泳法，研究重组表达的目的蛋白TtX31与糖的相互作用。结果发现，TtX31能结合糊精，但不能结合可溶性淀粉、普鲁兰糖、支链淀粉等。实验结果可以认为TtX31是一种功能性的新碳水化合物结合结构域，可以结合糊精。

以疏绵状嗜热丝孢菌（Thermomyces lanuginosus）cDNA为模板，克隆了糖化酶（GLA）基因，序列分析表明gla的开放阅读框由1854个核苷酸组成，编码617个氨基酸。根据氨基酸序列推算该酶的分子量为64 kDa，属于糖苷水解酶第十五家族，具有该家族催化保守区的典型特征。PCR扩增gla的成熟蛋白编码基因，构建表达载体，经线性化后电击转化导入巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris GS115），并成功进行了表达。重组酶经摇瓶发酵后酶活可达11.6 U/mL，经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换等步骤纯化了该重组蛋白，SDS-PAGE显示该重组蛋白大小约为67 kDa，比推测的蛋白分子量稍大，可能与该蛋白的糖基化有关。该重组酶的最适反应温度和最适pH值分别为60 ℃和5.0，该酶具有较高的热稳定性，70℃保温20min后剩余酶活为54%。

摘要：通过RT-PCR方法，以黑曲霉（Aspergillus niger）GIM3.452总RNA为模板，克隆出木聚糖酶B（xylanase B，xynB）基因的成熟肽编码序列（567bp），编码188个氨基酸。将其与猪腮腺分泌蛋白（parotid secretory protein, PSP）基因的信号肽序列通过重叠延伸PCR（SOE-PCR）得到拼接片段PSxynB，并将其克隆到真核表达载体pcDNA6/His A中，得到重组质粒pcDNA-PSxynB，重组质粒经过酶切、测序鉴定，证实含有目的片段，且构建正确。在脂质体介导下将重组质粒pcDNA-PSxynB转染猪肾细胞（PK15），通过RT-PCR证实其在PK15细胞中表达，并在细胞培养液中测到了木聚糖酶活最高达36.4IU/mL。