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2025年8月5日 星期二
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热硫化氢高温厌氧杆菌的TtX31基因克隆、表达与功能分析
杜照奎
台州学院
Cloning, Expression and Function Analysis of Novel Carbohydrate Binding Module TtX31 from T. thermohydrosulfuricus
全文: PDF (732 KB)   HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 生物信息学分析发现,热硫化氢高温厌氧杆菌(Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus)的?-淀粉酶/普鲁兰糖酶(?-amylase/pullulanase)基因中的一段未知功能序列Ttx31可能编码碳水化合物结合结构域(Carbohydrate binding module, CBM),但其结合特性未知。本实验以T. thermohydrosulfuricus为材料,通过菌落PCR扩增其Ttx31序列,将获得的Ttx31克隆到表达载体pET22b(+)中得到重组质粒pEX31,序列分析表明,所得重组表达载体pEX31中的Ttx31序列正确。将重组载体pEX31转入大肠杆菌宿主表达菌Tuner中,IPTG诱导表达后纯化,采用SDS-PAGE电泳和非变性亲和凝胶电泳法,研究重组表达的目的蛋白TtX31与糖的相互作用。结果发现,TtX31能结合糊精,但不能结合可溶性淀粉、普鲁兰糖、支链淀粉等。实验结果可以认为TtX31是一种功能性的新碳水化合物结合结构域,可以结合糊精。
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杜照奎
关键词 热硫化氢高温厌氧杆菌碳水化合物结合结构域菌落PCR糊精结合结构域    
Abstract:Bioinformatics analysis revealed that a functionally unknown sequence, named as Ttx31, from the ?-amylase/pullulanase of Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricusits could encode a novel carbohydrate binding module (CBM), but its’ binding specificity remains unknown. The sequence of Ttx31 was obtained by colony PCR from Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus and was cloned into the expression vector pET22b (+) to construct a recombinant plasmid named as pEX31. Sequence analysis revealed that pEX31 contained the correct Ttx31. After transforming pEX31 into Escheriachia coli Tuner, the recombinant protein, TtX31, was induced by IPTG and purified. The interaction between TtX31 and sugars was investigated by SDS-PAGE and non-denaturing affinity gel electrophoresis. Data obtained here showed that TtX31 displayed binding specificity for dextrin other than soluble starch, pullulan, and amylopectin. This finding indicates that TtX31 could be a functional novel CBM with dextrin binding activity.
Key wordsThermoanaerobacter thermohydrosulfuricusits    Carbohydrate Binding Module    colony PCR    dextrin binding module
收稿日期: 2009-05-26     
通讯作者: 杜照奎   
引用本文:   
杜照奎. 热硫化氢高温厌氧杆菌的TtX31基因克隆、表达与功能分析[J]. , 2010, 18(2): 356-361.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/     或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2010/V18/I2/356
 
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