农业生物技术学报

猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白5'端基因重组腺病毒的构建及其免疫特性

Construction of Recombinant Adenovirus Expressing the B,C Antigenic Sites of
Spike Gene from Transmissible gastroenteritis virus(TGEV) and Its Immunization

唐芳;何孔旺;侯继波;姜平

2009, 17(1): 1-6 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

RT-PCR扩增出猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus, TGEV）S蛋白基因5'端包含 B、C抗原位点的1.0 kb DNA片段，并与穿梭载体pShuttle-CMV连接；然后与腺病毒（Adenovirus）骨架载体pAdEasy-1共转化大肠杆菌（Escherichia coli）BJ5183，通过同源重组获得重组腺病毒质粒。该重组腺病毒质粒转染HEK293细胞并进行噬斑纯化，获得了1株含有TGEV S蛋白5'端基因的重组人复制缺陷型血清5型腺病毒rAd-TGEV-S。随后用RT-PCR和间接免疫荧光（indirect immunofluorescent assay, IFA）检测目的基因的转录与表达。重组腺病毒rAd-TGEV-S在HEK293细胞连续传代9次后，病毒效价稳定，滴度平均为107. 7TCID50/mL。动物免疫试验显示， rAd-TGEV-S可以诱导小鼠产生TGEV特异性IgG和IgA。

含禽源启动子的禽流感病毒核蛋白表达载体的构建及其免疫原性的检测

Construction of a Recombinant Vector Expressing Avian influenza virus
Nucleoprotein with an Avian-derived Promoter and Detection of Its Immunogenicity

王群;刘光亮;肖一红;童铁钢;白宇;张维军;徐树兰;吴东来

2009, 17(1): 7-11 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

为了研究禽流感病毒核蛋白（nucleoprotein，NP）在鸡体内所引起的免疫反应，将其NP基因从重组质粒pVAX-NP上酶切后亚克隆至含禽源启动子的真核表达载体pCAGGS中，经筛选鉴定后获得重组子pCAGGS-NP，将鉴定正确的阳性重组子体外转染真核细胞，利用间接免疫荧光法检测目的基因的瞬时表达；采用腿部肌肉注射途径将重组子免疫SPF鸡，利用ELISA检测免疫后血清抗NP蛋白抗体效价。结果表明，该重组子无论在体外还是体内均能正确表达禽流感NP蛋白，且所表达的蛋白均具有良好的免疫原性。

磺胺甲噁唑单克隆抗体的研制及免疫金标试纸检测方法的建立

Development of the Monoclonal Antibodies and Immune Colloidal Gold-labeled
　　　　　Strip for Rapid Detection of Sulfamethoxazole

刘宣兵;张改平;刘庆堂;彩鸿翔;杨继飞;滕蔓;邓瑞广;侯玉泽;王自良

2009, 17(1): 18-23 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

用磺胺甲噁唑人工免疫原（BSA-SMZ）免疫BALB/C小鼠（Mus muscalus），细胞融合技术筛选抗磺胺甲噁唑单克隆抗体（SMZmAb）杂交瘤细胞，体内诱生腹水法制备SMZ mAb，并鉴定其免疫学特性；应用SMZmAb研制SMZ残留快速检测金标试纸（SMZ-strip），并测定其性能。结果表明，筛选出3株杂交瘤细胞，其中最好的3G6株间接ELISA效价细胞培养上清为1∶8.1×102，腹水为1∶6.4×105，亲和常数（Ka）为3.07×109 L/mol，对SMZ的半数抑制浓度（IC50）为12.4 μg/L，与磺胺嘧啶的交叉反应率（CR%）为2.84%，与其它磺胺类药物无交叉反应；SMZ-strip目测检测限为6 μg/L；其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当，符合率为100%；SMZ-strip具有快速、敏感、特异、简便等特点，适合于SMZ残留快速检测的推广应用。

应用自动诱导表达体系提高原核表达效率

2009, 17(1): 138-143 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

自动诱导表达体系是依据T7表达菌株对于培养基中的碳源和能源的利用机制建立起来的，用于生产各种异源蛋白更加高效、便捷和经济。为提高重组蛋白在原核细胞中的表达效率，构建了以S基因抗原位点区作为目的基因的原核表达重组质粒pET-S1，并将其转化入大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（DE3）菌株。用IPTG诱导表达系统和自动诱导表达系统分别对目的蛋白进行表达。结果表明，目的蛋白最高表达量分别占菌体总蛋白的25.9 %和45.1 %，表明自动诱导表达系统可明显提高表达效率。

小金海棠Fe3+-螯合还原酶MxFRO2基因启动子的克隆与表达分析

文静;孔瑾;王忆;任玲;许雪峰;韩振海

2009, 17(1): 114-120 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

通过染色体步移法从小金海棠（Malus xiaojinensis）基因组中克隆了三价铁螯合还原酶（ferric chelate reductase, MxFRO2）基因翻译起始位点上游1 738 bp的启动子序列。生物信息学分析表明，该启动子片段中存在光响应元件G-box、生长素应答元件、铜元素响应元件、TATA-box、CAAT-box等顺式作用元件。从TAIR网站获得了拟南芥（Arabidopsis thaliana）中8个FRO基因上游的启动子序列，通过PlantCARE分析了其与MxFRO2启动子的异同。根据在线预测结果，克隆了翻译起始位点上游1 644 bp（MxFul）和259 bp（MxD1）两段序列，构建了其与GFP融合的瞬时表达载体，并将重组质粒通过PEG介导法分别转化拟南芥叶片原生质体，结果表明，小金海棠MxFul和MxD1两段启动子序列都能驱动GFP蛋白在拟南芥原生质体中的瞬时表达。

BF2/肽四聚体的构建及其在特异性T细胞检测上的应用

Construction of a BF2/Peptide Tetramer and Its Application on the Detection of Specific T Cell

刘光亮;王群;肖一红;童铁钢; 白宇;孟庆文; 吴东来

2009, 17(1): 12-17 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

为构建可溶性鸡组织相容性复合体(MHC)Ⅰ 类分子（BF2）/肽复合物，大量表达并纯化了可生物素化的MHC Ⅰ类分子重链（BF2-BSP）和轻链（Chβ2m），并合成了鸡传染性支气管炎病毒（IBV）核蛋白N71~78 T细胞表位肽，将其与纯化后的重组蛋白BF2-BSP和Chβ2m在重折叠缓冲液中复性。复性后在快速蛋白液相色谱仪（FPLC）上分离出复性组装成功的BF2/肽单体复合物。将该单体复合物在体外进行生物素化，其产物再次采用FPLC通过分子筛分离出生物素化后的BF2/肽单体复合物；然后将生物素化后的BF2/肽单体复合物与藻红蛋白（PE）标记的链霉亲和素按一定比例反应生成BF2/肽四聚体。为了检测所制备BF2/肽四聚体是否能应用于检测特异性T细胞，从感染IBV H52株10 d后的SPF鸡分离外周血单核细胞（PBMC），染色后采用流式细胞术检测，结果表明，所制备的BF2/肽四聚体可用于检测IBV N蛋白特异性T淋巴细胞，检测1周龄SPF鸡接种H52后10 d时针对N蛋白的特异性T细胞比率为3.65%。

重组鸡β-防御素5 - β-防御素10双分子蛋白的
构建及其理化特性分析

Construction of Recombinant Chicken AvBD5 - AvBD10 Double Molecule
Protein and Analysis of Its Physical and Chemistry Characterization

马得莹; 刘胜旺; 韩宗玺; 单安山

2009, 17(1): 41-46 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

鸡抗菌肽属禽β-防御素（AvBD）类，是鸡先天性免疫的重要组成部分。研究将AvBD10基因定向插入到AvBD5-pGEX SalⅠ和NotⅠ双酶切位点上，构建了AvBD5-pGEX- AvBD10双基因共表达重组载体。将重组质粒转化大肠杆菌 (Escherichia coli ) BL21，于37 ℃不同时间进行诱导表达，SDS-PAGE检测外源基因的表达。结果表明，重组AvBD5-AvBD10双分子融合蛋白的分子量约为36 kD，重组双分子蛋白占菌体总蛋白的35%，重组菌表达产物以包涵体形式存在。重组双分子蛋白经纯化后，分别以对数生长中期的大肠杆菌[BL21(DE3-) 株]与致病性链球菌［Streptococcus（CAB株）］为检测菌，利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组双分子蛋白的抗菌活性，结果表明，重组双分子蛋白对这两种细菌都具有抗菌活性。并且对温度和pH有很高的稳定性，在-70～100 ℃或pH 3～12处理30 min仍具有抗菌活性。

鱼源嗜水气单胞菌aopB-/aopD-/aroA-缺失株的构建及鉴定

罗晓松;尚书;罗;侯化鹏; 汪登强;邹世平;曾令兵; 龙良启

2009, 17(1): 29-35 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)能引起多种鱼类暴发性出血性败血症，为研制更加安全的嗜水气单胞菌口服活疫苗，构建了鱼源嗜水气单胞菌aopB-/aopD-/aroA-缺失株。首先构建含缺失369 bp的aopB/aopD基因(编码嗜水气单胞菌外膜蛋白B、D)与蔗糖敏感基因(sacB)的重组自杀性质粒pREaopB/aopD，与嗜水气单胞菌Ah2056接合转移，应用二步法筛选aopB-/aopD-缺失株，PCR证实aopB/aopD基因的缺失突变。在此基础上，构建另一个含缺失1 290 bp的aroA基因(编码5-酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶)与庆大霉素抗性片段（aacC1片段）的重组自杀性质粒pSUParoA，与aopB-/aopD-缺失株接合转移，利用庆大霉素抗性筛选aopB-/aopD-/aroA-缺失株，用PCR证实aroA基因的缺失突变。进一步对aopB-/aopD--/aroA-缺失株进行生长特性、对鱼的毒力等生物学特性鉴定。结果表明，aopB-/aopD-/aroA-缺失株构建成功，且该缺失株为毒力丧失、营养缺陷株。

11株鸡新城疫病毒强毒株的分子特性

Genetic Characterization of the 11 Isolates of Virulent Newcastle disease virus from Chicken Flocks

李春华; 蒋凤英; 魏晓锋; 王英; 胡建华; 邹勇; 孙凤萍; 高骏; 金佩芳

2009, 17(1): 36-40 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

选取2002～2007年从上海市分离鉴定的11株鸡新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）强毒株，克隆其融合蛋白（Fusion，F）基因片段，测序后登录GenBank，序列号分别为NDV 022433（EU258661）、022435（EU258662）、0210149（EU258653）、0210154（EU258654）、0210227（EU258656）、0210252（EU258658）、03024（EU258637）、04011（EU258639）、05013（EU258640）、07011（EU258642）和07023（EU258643）。序列分析结果显示：上述分离株的F基因扩增片段为1 654 bp，编码551个氨基酸，其核苷酸序列同源性为94.6%～100%，推导的F蛋白氨基酸序列同源性为93.0%～100%；各分离株F蛋白裂解位点序列均为112R-R-Q-K-R-F117，为基因Ⅶ型NDV强毒株。系统发育分析表明：这11株NDV分离株之间的遗传距离较近，而与传统疫苗株B1、La Sota、V4和F48E9的遗传距离较远。此外，这11株NDV强毒株均具有大多数鹅源NDV毒株特有的973和1 249 nt RsaⅠ位点。

鸡C/EBPα抗血清制备及组织表达的特性

Preparation of Antiserum against Chicken C/EBPα and Its Expression Characteristics in Different Tissues of Chicken

刘冰;王宇祥; 石慧;王启贵;李辉

2009, 17(1): 47-51 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

制备鸡（Gallus gallus）CAAT增强子结合蛋白α（CAAT/enhancer-binding protein α，C/EBPα）的多克隆抗血清，并分析其组织表达特性。通过限制性酶切，从T-C/EBPα质粒中获得C/EBPα基因的编码区序列（coding sequence，CDS），构建原核表达载体，以大肠杆菌（Escherichia coli）为宿主，用IPTG诱导重组pGEX6p/C/EBPα的表达，经Glutathione Sepharose 4B柱层析纯化后，以其为免疫原制备兔抗鸡C/EBPα多抗。ELISA方法测定抗体效价达1∶12800，Western blot方法显示抗体具有较高的特异性。用此抗血清分析了鸡C/EBPα的组织表达特性，结果表明，鸡的回肠、肾脏、肌胃、腺胃、心脏、肝脏、腹脂、脾脏等组织中C/EBPα蛋白表达量较高，而在胸肌、腿肌中表达量较低。同时分析C/EBPα基因在高低脂系公鸡肝脏组织中的表达差异，结果显示该基因在低脂系公鸡肝脏中表达量较高。

绵羊多胎主效基因FecB分子检测方法的建立与应用

Establishment of Molecular Detection Methods for High Prolificacy Major Gene FecB in Sheep and Its Application

储明星;狄冉;叶素成;方丽;刘忠慧;彭志兰;张跟喜;贾立华;孙洁; 冯涛

2009, 17(1): 52-58 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

FecB（Fec，fecundity；B，Booroola）是在布鲁拉美利奴(Booroola Merino)绵羊（Ovis aries）中发现的能增加排卵数和产羔数的一个常染色体突变基因，是在绵羊中识别出的第1个高繁殖力主效基因。建立了绵羊多胎主效基因FecB的PCR-RFLP和PCR-SSCP检测方法，对小尾寒羊、湖羊、中国美利奴、东弗里生、杜泊、萨福克、特克塞尔、多赛特、考力代、德国肉用美利奴、南非肉用美利奴以及杂种羊共6 647只绵羊的检测结果表明，两种检测方法均能准确判型，稳定可靠性好，而且两种方法的检测结果完全一致。检测结果表明小尾寒羊和湖羊携带FecB突变（A746G），中国美利奴、东弗里生、杜泊、萨福克、特克塞尔、多赛特、考力代、德国肉用美利奴和南非肉用美利奴绵羊都不携带该突变。

鲤鱼品系的部分线粒体序列的遗传变异

Genetic Diversity of Domestic Strains of Common Carp
Based on Partial Mitochondrial DNA Sequences

赵莹莹;曹顶臣;匡友谊;孙效文

2009, 17(1): 59-66 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

运用PCR测序法，以9个我国常见鲤鱼（Cyprinus carpio）养殖品种和2个野生群体为研究材料，分析线粒体DNA的16S rRNA、Cyt b和D-loop序列片段，用于分析的序列共有1 457 个位点，其中变异位点32个，简约信息位点21个，共有单倍型16个。分别利用以上3个基因片段以及合并后的序列，构建NJ和MP进化树。由不同方法获得相似的进化树，由不同基因片段得到的进化树均为两支，其中贝尔湖野鲤（BE）单独成支，其它群体聚为1支，只是由D-loop得到的进化关系更为详细，而由合并后的序列构建的进化树也与利用不同基因序列所得到的进化树并不矛盾。各品系间的分化时间约为3.03×104～1.21×105年前。根据序列的特征，16S rRNA的1个变异位点、Cyt b基因的4个变异位点和D-loop的14个变异位点可以作为鉴定不同的养殖品系和野生群体的SNP，证明mtDNA序列分析可以应用于品系的鉴定。

中华蜜蜂两种化学通讯相关蛋白基因时空表达分析

Spatio-temporal Expressed Analysis of Two Kinds of Chemical Communication
Related Proteins in Working Bee of Apis cerana cerana

李红亮;王海燕; 高其康; 程家安

2009, 17(1): 73-77 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用Real-time PCR技术对中华蜜蜂(Apis cerana cerana)两个化学通讯相关蛋白：气味结合蛋白Ac-ASP2和化学感受蛋白Ac-ASP3基因的时空转录谱进行了研究。结果表明，Ac-ASP2是一个特异表达于中蜂触角的基因，在幼虫及蛹中均不表达；利用2-ΔΔCt的相对定量方法，发现Ac-ASP2在成虫触角中具有几个丰度较高的日龄，即1、9、15、27和30日龄，这几个高表达日龄均较其它时期高出近10倍以上；利用标准曲线的绝对定量方法，Ac-ASP3在其不同器官中的原始拷贝数关系为：翅>腹>胸>足>触角>头，其中翅、腹和胸部模板拷贝数较高（均达到106数量级），而在足、触角以及头中的表达丰度相对较低（均为105数量级），表明Ac-ASP3与中蜂翅与腹部的化学感受行为有密切的关系。

反刍动物饲料中乳源性成分与牛羊肉骨粉的区分

Discrimination of Milk Powder with Bovine or Ovine Meat and Bone Meal in Ruminant Feedstuffs

胡菡; 王加启; 卜登攀; 魏宏阳; 叶巧燕; 刘开朗; 周凌云

2009, 17(1): 67-72 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用奶粉的溶解性，通过水和0.5%次氯酸钠溶液洗涤混有乳源性成分和牛、羊肉骨粉的饲料样品，去除饲料中的乳粉成分后，再使用16S rDNA PCR方法进行动物源性检测。结果表明，实验所建立的方法能够完全区分饲料中的乳粉与肉骨粉。当乳粉含量分别为25%、50%和75%时，混合饲料中牛、羊肉骨粉的检出限分别为2%、0.5%和0.1%。此方法操作简单，容易掌握，可用于鉴别反刍动物饲料中非乳源性成分的牛、羊源性成分。

西伯利亚蓼Tau类谷胱甘肽转移酶基因的克隆与表达分析

Cloning and Expression Analysis of Tau Class Glutathione Transferase Gene from Polygonum sibiricum Laxm

刘明坤;刘关君;阎秀峰;刘昌财;魏志刚;刘桂丰;杨传平

2009, 17(1): 98-106 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

用RACE技术从西伯利亚蓼（Polygonum sibiricum Laxm.）中克隆了谷胱甘肽转移酶（PsGSTU1）基因完整编码区 cDNA序列，长度669 bp，编码222个氨基酸。经与谷胱甘肽转移酶家族其它成员的氨基酸序列比对和系统进化分析，初步确定PsGSTU1属于谷胱甘肽转移酶Tau家族。利用荧光定量RT-PCR分析表明，PsGSTU1在西伯利亚蓼的叶、茎和地下茎中均有表达，茎中表达量最高，叶和地下茎次之； 3% NaHCO3胁迫后，此基因在叶和茎中的最大表达量出现在胁迫后48 h，而茎在72 h；去胁迫后，此基因在不同部位的表达量表现为：地下茎＞叶＞茎。将PsGSTU1完整的cDNA片段连接至pET28a质粒以构建原核表达载体，并导入大肠杆菌（Escherichia coli），经IPTG诱导后表达了分子量为26 kD的目的蛋白，表达PsGSTU1的大肠杆菌显著提高了耐受NaHCO3胁迫的能力。

香石竹GA20-oxidase基因的克隆及RNA干扰载体的构建

Cloning of Carnation GA20-oxidase Gene and Construction of Plant RNAi Vector

金亮;孙振元;刘芸;李天红

2009, 17(1): 107-113 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

根据已发表的菠菜、烟草等植物GA 20-oxidase基因序列在保守区设计简并引物，通过RT-PCR和RACE的方法克隆了Marster香石竹（Dianthus caryophyllus L. cv. Marster）GA 20-oxidase基因的全长cDNA（1 179 bp），命名为Dc20ox。同源性分析表明该基因与其它作物上发表的GA 20-oxidase基因的氨基酸序列同源性为66%~75%。在此基础上选用同源性相对较高的400 bp DNA片段，构建了RNA干扰（RNAi）载体pART400。

麦长管蚜嗅觉相关蛋白Gqα基因的克隆及真核表达

Cloning and Expression of Gene Encoding Gqα-protein in the England Grain Aphid (Sitobion avenae )

范佳; 陈巨莲; 程登发; 孙京瑞

2009, 17(1): 78-83 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

根据已报道无脊椎动物嗅觉相关蛋白Gqα的氨基酸序列保守区设计简并引物，以麦长管蚜(Sitobion avenae)有翅成蚜cDNA为模板，结合RT-PCR及RACE技术扩增编码麦长管蚜Gqα蛋白的cDNA序列，其cDNA序列开放阅读框长为 1 062 bp，编码352个氨基酸，预测蛋白分子量为40.8 kD，与GenBank多个物种Gqα cDNA序列及氨基酸序列均有很高相似性(≥82.17%)(GenBank登录号为EF638906)，并具有Gα亚基q类蛋白的典型特征。利用TOPO及Gateway技术，通过体外重组反应，构建苜蓿丫纹夜蛾核型多角体杆状病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus, AcMNPV)重组病毒。将N端融合了V5-His6标记的V5-His6Gqα序列整合到AcMNPV病毒基因组DNA中, 得到具有独立转染活性的重组杆状病毒。转染粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)离体细胞系Tn-5B1-4(Tn细胞)，进行Gqα蛋白的真核表达。SDS-PAGE检测到预期分子量约42 kD的蛋白带，Western blot检测到表达产物。表明含有6个组氨酸标签及V5抗体结合位点的Gqα融合蛋白V5-His6Gqα在昆虫离体细胞系中成功地表达。

小金海棠S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因（MxSAMS）的克隆和表达分析

Cloning of S-adenosylmethionine Synthetase Gene from Malus xiaojinensis （MxSAMS） and Its Expression under Iron-deficiency Stress

朱妍婕;孔瑾;王忆;许雪峰; 刘丽丽;韩振海

2009, 17(1): 121-125 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

从本实验室建立的小金海棠缺铁差减文库中分离出一个cDNA片段，在GenBank中发现该片段与其它植物的S-腺苷甲硫氨酸合成酶(SAMS)基因具有90%的同源性。利用RACE技术成功地获得小金海棠（Malus xiaojinensis）SAMS基因(MxSAMS)的cDNA全长序列（GenBank登录号：EU639408），该基因cDNA全长1 479 bp，最大开放阅读框1 176 bp，编码392个氨基酸，酶蛋白理论分子量为42.99 kD；与其它植物的蛋白质氨基酸序列同源性在88.1%~92.6%之间。推测的MxSAMS蛋白质三级结构包含3个保守结构域和一个保守的ATP结合位点GAGDQG。Southern 杂交显示，MxSAMS基因在小金海棠基因组中是单拷贝的。半定量RT-PCR结果表明，该基因在小金海棠的根和叶中均受缺铁胁迫诱导增强表达。

鸡冠花品种间耐热差异与超氧化物歧化酶(SODs)之间的关联

Relationships Between the Tolerance Difference to High Temperature Stress and Superoxide Dismutases (SODs) in Different Cultivars of Celosia cristata

李永红;魏玉香

2009, 17(1): 126-131 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

为研究鸡冠花（Celosia cristata）品种间耐热差异与超氧化物歧化酶(SOD)之间的关联，选用鸡冠花耐热品种世纪绿叶和热敏品种世纪铜叶的10叶期幼苗为试材,用二乙基二硫代氨基甲酸钠 (DDTC) 进行48 h预处理之后，在45 ℃、相对湿度75%~90%,、光照1 500 1x (12 h/d)条件下进行热胁迫处理，研究其形态和生理生化的变化。结果表明，20 mmol/L DDTC预处理能显著抑制幼苗叶片SOD活性，明显降低鸡冠花幼苗的热胁迫耐性，热敏品种受影响程度明显大于耐热品种；经高温梯度胁迫处理后，SOD同工酶条带的亮度变化为先增强后降低，亮度变化最明显的是MnSOD，其次是Cu/ZnSOD。热敏品种在35 ℃诱导产生了1条新的Cu/ZnSOD条带，而耐热品种则在40 ℃时出现此条带；当温度达到45 ℃时，耐热品种留下FeSOD2、微弱的FeSOD3和Cu/ZnSOD1条带，而热敏品种仅剩FeSOD2，其它条带基本消失，表明耐热品种的SOD同工酶在高温下较热敏品种具有更强的活性和稳定性。DDTC预处理抑制了任何与上述热胁迫诱导有关的新的条带产生。由此结果表明，鸡冠花热胁迫耐性与SOD活性相关联，品种间热胁迫耐性差异与FeSOD3和Cu/ZnSOD1活性强度相关联。

一个与水稻条纹叶枯病抗性基因紧密连锁的分子标记的鉴定

Identification of A Marker Closely Linked to Rice Stripe Disease Resistance Gene in a Japonica Rice Variety

周彤; 王磊;程兆榜; 陈洁;范永坚;周益军

2009, 17(1): 144-147 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

针对水稻条纹叶枯病粳型(Oryza sativa ssp. japonica)抗源镇稻88尚无可供育种利用的分子标记的现状，以镇稻88和感病品种武育粳3号配组构建F2作图群体。在采用单分蘖鉴定和苗期接种鉴定方法对F2群体和F2:3家系分别进行抗性遗传分析的基础上，通过标记分析表明，RAPD标记OPO11与镇稻88中抗性基因紧密连锁，表现为共分离。使用该标记对徐稻3号等3个镇稻88衍生抗性品种进行分析，结果表明，RAPD标记OPO11可应用于镇稻88与武育粳3号组合及其衍生组合的分子标记辅助选择。

小麦抗叶锈病基因Lr2c的SSR标记

SSR Markers Linked to Leaf Rust Resistance Gene Lr2c in Wheat

张娜; 闫红飞; 张英春;李爱霞;陈玉婷;张立荣;杨文香;刘大群

2009, 17(1): 148-152 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

选取抗叶锈病基因位于2D染色体上的TcLr2c等7个小麦（Triticum aestivum）近等基因系、感病亲本Thatcher及215株TcLr2c与Thatcher杂交F2代为材料，研究抗叶锈病基因Lr2c SSR分子标记。从筛选的29对位于小麦2D染色体的SSR引物中获得4对能够揭示Lr2c多态性的分子标记，通过215株TcLr2c × Thatcher F2群体验证，结果表明Xgwm261和Xgwm296与Lr2c紧密连锁，其距目的基因的遗传距离分别为1.9和3.6 cM，可用于小麦抗叶锈病分子辅助育种。

β-琼脂糖酶ⅠDagA的原核表达和活性鉴定

Expression of β-agarase ⅠDagA in Prokaryotic Cell and Its Activity Identification

周雁胜;王保莉;曲东

2009, 17(1): 132-137 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

采用PCR技术从假别单胞菌（Pseudoalteromonas atlantica）19262基因组DNA中获得β-琼脂糖酶Ⅰ基因（dagA）及去除信号肽的编码序列dagA(▽)，分别与载体pET21a连接后转入大肠杆菌（Escherichia coli）ER2566中，共表达分子伴侣DsbC及FkpA，筛选出以包涵体为主要表达形式的高效表达体系：ER2566-pET21a-dagA(▽)-DsbC菌株。包涵体蛋白达到菌体总蛋白的60%左右。包涵体用8 mol/L尿素溶解、镍离子亲和层析纯化和梯度稀释复性。SDS-PAGE检测表明，复性后的DagA蛋白相对分子质量约为30.8 kD，且具有水解琼脂糖的生物活性。酶学特性分析表明，在pH 4.8~6.8范围内，DagA蛋白活性保持60%以上，最适pH 5.8；在温度37~60 ℃均有活性，最适温度为55 ℃。

新疆苹果皱果类病毒(AFCVd)的检测与序列分析

Detection of Apple fruit crinkle viroid in Xinjiang Apple and Its Specific Fragment Sequencing

赵英;牛建新

2009, 17(1): 164-169 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

采集新疆焉耆地区的老果园中的苹果（Malus domestica Brkn）树枝条、叶片和韧皮部，提取总RNA，根据GenBank中的AB104558序列设计引物，利用RT-PCR技术扩增出苹果皱果类病毒（Apple fruit crinkle viroid ，AFCVd）特异条带，通过回收、克隆和测序，结果表明，获得的10条序列，已在GenBank中登录（登录号：EU031507～EU031516）。利用带有AFCVd目的DNA的质粒为模板，成功地合成了地高辛标记的cDNA探针，该探针能很好地用于AFCVd的检测。并利用原位RT-PCR技术做进一步检测，证明苹果叶片中有苹果皱果类病毒存在，主要分布在叶肉细胞的细胞核中。

含抗白粉病新基因普通小麦-黑麦1R二体异附加系的遗传学鉴定

Genetic Identification of Wheat-rye 1R Alien Disomic Additional Line with
Novel Resistance Gene to Powdery Mildew

吴金华;王新茹;王长有;王秋英;吉万全

2009, 17(1): 153-158 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

黑麦（Secale cereale）含有丰富的优良基因，在小麦遗传改良中具有重要利用价值。为了鉴定普通小麦（Triticum aestivum）与奥地利黑麦杂交后代选育的抗白粉病品系N9436-1的黑麦遗传物质，对其进行了细胞学、基因组原位杂交、Giemsa-C分带、SCAR（sequence characterized amplified region）标记以及酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE)分析。结果表明，N9436-1形态学和细胞学稳定，2n=44=22Ⅱ，对白粉病免疫，携带奥地利黑麦的多小穗性状。以奥地利黑麦总基因组DNA为探针的原位杂交结果及Giemsa C-分带显示，N9436-1含有2条奥地利黑麦的1R染色体， SCAR标记鉴定及A-PAGE分析进一步证实N9436-1携带有黑麦遗传物质，表明N9436-1携带的抗白粉病基因不同于Pm8和Pm17，是新的抗白粉病基因，可作为白粉病抗源用于小麦抗病育种。

纳米TiO2对黄瓜叶围细菌群落的影响

Effect of Nano-TiO2 on the Bacterial Community of the Cucumber Phyllosphere

常立艳;王琦;梅汝鸿

2009, 17(1): 159-163 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用可培养和变性梯度凝胶电泳(DGGE)方法，对经不同浓度TiO2处理黄瓜(Cucumis sativus)叶围细菌群落结构的变化进行了分析。研究发现，TiO2处理后黄瓜叶围可培养细菌数量较对照显著降低。随着TiO2浓度从0.02 mg/mL提高至20 mg/mL，黄瓜叶围可培养细菌数量从1.8×107 cfu/g降低至3.1×106 cfu/g。DGGE指纹图谱分析表明，当TiO2的喷雾浓度超过0.02 mg/mL时，黄瓜叶围细菌的多样性显著降低。对DGGE条带克隆测序结果显示，在黄瓜叶围至少存在7种不同属的细菌，其中只有一种叶围细菌不受TiO2喷雾浓度影响。

陆地棉GhLipase基因的克隆、特征分析及定位

贺亚军, 郭旺珍, 张天真

2009, 17(1): 84-89 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用已构建陆地棉7235纤维cDNA文库测序, 结合5′RACE技术从陆地棉 (Gossypium hirsutum L) 7235纤维中获得了1个1 286 bp的cDNA。序列分析结果表明, 该cDNA 包含一个编码368个氨基酸的开放读码框, 5′非翻译区和一个带有Poly (A) 的3′非翻译区区域。与已报道的其它植物的脂肪酶基因具有较高的氨基酸序列同源性, 命名为GhLipase,提交到GenBank, 登录号为EU273298。RT-PCR分析表明, GhLipase在棉花的胚珠及纤维细胞中优势表达。Southern blot分析结果表明, GhLipase在陆地棉基因组可能存在两个拷贝。将该基因定位在四倍体棉花遗传图谱的A13染色体上。

荧光RT-PCR鉴别诊断O型与AsiaⅠ型口蹄疫病毒方法的建立

Establishment of Real-time RT-PCR Assay to Differentiate O and AsiaⅠType Foot-and-mouth disease virus

薄清如;罗宝正;杨素; 徐海聂;沙才华; 罗吉新

2009, 17(1): 24-28 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

从GenBank中获取多个口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus, FMDV）基因组序列，进行多序列比对之后，设计对应于口蹄疫病毒的3D、VP3和3C区域的引物和探针，分别建立了FMDV群特异性实时荧光RT-PCR、O型特异性实时荧光RT-PCR和AsiaⅠ型特异性实时荧光RT-PCR检测方法。三种FMDV实时荧光RT-PCR在Lightcycler荧光PCR仪上扩增均出现标准的S型曲线，并且具有良好的特异性，可以很好地将FMDV与传染性牛鼻气管炎病毒（Infectious bovine rhinotracheitis virus）、猪传染性胃肠炎病毒（Swine transmissible gastroenteritis virus）、赤羽病病毒（Akabane virus）和猪呼吸系统冠状病毒（Porcine respiratory corona virus）区分。FMDV群特异性实时荧光RT-PCR可以成功扩增O型（O1和O2毒株）和AsiaⅠ型（AsiaⅠ1和AsiaⅠ2毒株）FMDV；O型特异性实时荧光RT-PCR可成功扩增O型（O1和O2毒株）FMDV，AsiaⅠ型（AsiaⅠ1和AsiaⅠ2毒株）FMDV为阴性；AsiaⅠ型特异性实时荧光RT-PCR可成功扩增AsiaⅠ型（AsiaⅠ1和AsiaⅠ2毒株）FMDV，O型（O1和O2毒株）FMDV为阴性。FMDV群特异性实时荧光RT-PCR、O型特异性实时荧光RT-PCR和AsiaⅠ型特异性实时荧光RT-PCR都可以检测到10个拷贝的模板，灵敏度接近检测方法的极限。检测时间短，从加样到反应结束只需要70 min。该方法有潜力用于FMDV的实验室筛查与鉴别诊断。

拟南芥甘油二酯激酶(AtDGK7)基因抗逆的生理作用

Stress Physiological Roles of Diacylglycerol Kinase (AtDGK7) Gene in Arabidopsis thaliana

袁苑;刘庆周;武玉叶;李德全

2009, 17(1): 90-97 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

构建表达载体PBI121-AtDGK7，转化拟南芥（Arabidopsis thaliana）获得过表达转基因植株。通过抗逆生理指标测定、ABA、NaCl和甘露醇抗性试验, 以及半定量RT-PCR方法，对拟南芥甘油二酯激酶(AtDGK7)基因的抗逆生理功能进行初步研究。结果表明，过表达AtDGK7转基因拟南芥对高浓度ABA的敏感性比野生型要低，能更好地抵御盐胁迫。通过测定脯氨酸(Pro)和丙二醛(MDA)含量以及超氧物歧化酶(SOD)活性，进一步证实过表达AtDGK7转基因拟南芥植株的耐低温能力增强。

应用重组PCR技术构建植物基因RNA干扰的结构

Construct RNAi Structare in Plant Gene by Recombiant PCR

马建;厉志;刘慧婧; 魏益凡;王丕武

2009, 17(1): 176-177 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

松毛虫属5种松毛虫不同地理种群RAPD遗传多样性分析

RAPD Analysis of Genetic Diversity among Five Species of Dendrolimus (Lepidoptera: Lasiocampidae )

南宫自艳; 高宝嘉;徐志娥; 杨君

2009, 17(1): 178-179 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

橡胶棒孢霉落叶病菌rDNA-ITS区的PCR扩增与序列分析

PCR Ampification and Sequence Analysis of rDNA-ITS of Corynespora cassiicola from Rubber

漆艳香;张欣;蒲金基;李顺利;张贺;张辉强;黄思良;谢艺贤

2009, 17(1): 180-181 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

RNA干扰技术在植物寄生线虫中的应用

Application of RNA Interference in Plant Parasitic Nematodes

黄文坤;彭德良;彭焕

2009, 17(1): 170-175 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

已证实在植物寄生线虫中存在RNA干扰(RNAi)现象，当寄生前的线虫幼虫或卵吸取能激发系统RNA干扰反应的双链RNA后，能诱导特定类型细胞中的基因表达沉默。RNAi将成为基因组范围内鉴定基因功能的有力工具，可以帮助更好地了解植物寄生线虫。最近的研究描述了RNAi技术在植物寄生线虫中的作用机制、途径、表现型的决定、专化性和持久性等。研究进展表明，植物双链RNA表达靶定的线虫基因能够成功地诱导线虫基因沉默。