采用比较基因组学和RT-PCR方法，根据人和小鼠SMAF1基因的保守序列，设计简并引物，克隆了猪SMAF1基因的cDNA序列。所克隆片断全长256bp（GeneBank登录号 DQ191892），包括一个编码了81个氨基酸的完整编码区，该序列与人和小鼠的SMAF1基因的相似性分别为86%和78％，预测的氨基酸序列与人、小鼠、大鼠和牛的相似性分别为81％、67％、70%和84%。猪SMAF1基因在脂肪组织中高丰度表达，在4月龄瘦肉型猪（大白猪）脂肪组织中的表达量显著低于脂肪型猪（梅山猪）（P＜0.05）。本研究结果表明，猪SMAF1基因可能具有和其它物种SMAF1基因相似的功能，推测其在脂肪细胞发生和/或脂肪细胞功能中具有重要的调控作用。

本文从第19期（孵化68~72h）鸡（Gallus domesticus）生殖嵴分离到原始生殖细胞（PGC），通过PGC-体细胞共培养进行了原代和传代培养，并对PGC做了c-kit免疫组化鉴定。通过改变PGC的体外培养条件，诱导PGC分化成了神经样细胞、上皮样细胞和骨骼肌样细胞，并分别通过神经元特异性烯醇化酶（NSE）和角蛋白（keratin）免疫组化进行了分化细胞的鉴定，均呈阳性。结果表明培养的鸡胚PGC在体外可分化成神经样细胞、上皮样细胞和骨骼肌样细胞。

根据异性孪生不育母牛是性染色体嵌合体（XX/XY），而正常母牛性染色体型为XX这一现象，通过检测被检母牛体内是否存在Y染色体特异的Sry基因，研究开发了一种基于PCR技术的检测异性孪生不育母牛的方法。利用该项技术，可以快速、准确的检测出异性孪生不育母牛。

BoLA-DRB3基因是主要组织相容性复合物(Major Histocompatibility Complex, MHC)基因家族中的Ⅱ类基因，它是该基因家族中最主要的功能基因，所编码的MHC抗原与免疫应答，与抗病性密切相关。其第2外显子是编码抗原的主要功能区。本试验采用PCR-RFLP方法对鲁西牛、南阳牛、晋南牛3个群体的DRB3基因第2外显子扩增产物进行多态性分析，检测到A、B和C 3个等位基因，出现6种基因型。χ2适合性检验结果表明鲁西牛和晋南牛在该酶切位点均达到了Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05），而南阳牛未达到Hardy-Weinberg平衡状态（P<0.01）。结合测序，结果显示在DRB3基因第2外显子的第154、155、156和157位的碱基产生突变使得产生HaeⅢ酶切多态。序列比对后发现有13.70％的核苷酸发生突变，相对应有14.61％的氨基酸发生了替代。

根据GenBank已公布的植物谷胱甘肽硫转移酶基因EST序列，设计引物利用3’和5’RACE方法，获得紫杆柽柳GST基因(TaGST)全长cDNA序列，全长为1175 bp，开放读码区672 bp, 编码224个氨基酸。其所编码的蛋白与大豆的GST10同源性最高为48%。利用pET-28a（+）构建了紫杆柽柳GST基因的原核表达载体，转入BL21大肠杆菌进行了原核表达。诱导表达蛋白的SDS-PAGE检测表明, 所表达的蛋白分子量约为26 kD，与预测的分子量大小一致。初步的酶学活性的检测表明所克隆的基因编码的肽段具有催化GST蛋白通用底物CDNB和GSH反应的活性。

根据GenBank已公布的植物谷胱甘肽硫转移酶基因EST序列，设计引物利用3’和5’RACE方法，获得紫杆柽柳GST基因(TaGST)全长cDNA序列，全长为1175 bp，开放读码区672 bp, 编码224个氨基酸。其所编码的蛋白与大豆的GST10同源性最高为48%。利用pET-28a（+）构建了紫杆柽柳GST基因的原核表达载体，转入BL21大肠杆菌进行了原核表达。诱导表达蛋白的SDS-PAGE检测表明, 所表达的蛋白分子量约为26 kD，与预测的分子量大小一致。初步的酶学活性的检测表明所克隆的基因编码的肽段具有催化GST蛋白通用底物CDNB和GSH反应的活性。

利用PCR的方法从油菜(Brassica napus)基因组中扩增得到花瓣特异性启动子XY355，将XY355与玉米花青素调节基因Lc融合构建植物表达载体pXY60。用冻融法将pXY60转入根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）LBA4404，然后以烟草（Nicotiana tabaccum L.）和矮牵牛（Petunia hybrida）的叶盘为外植体，通过根癌农杆菌介导法进行遗传转化。对再生植株的PCR检测证明外源基因已经整合到转基因烟草和矮牵牛的基因组中。对转基因烟草和矮牵牛的表型进行观察：转Lc基因烟草的花色由浅红变成了红色，转Lc基因矮牵牛的花色由白色变成了浅紫色。

本研究利用一套以籼稻品种“特青”为遗传背景的云南元江普通野生稻（Oryza rufipogon Griff.）渗入系为材料，采用单标记回归分析和渗入片段叠代法，对出糙率、整精米率、垩白粒率、垩白度、长宽比等5个品质性状的QTL进行了分析，初步定位了16个QTL，有10个QTL来自野生稻的等位基因能改良群体的品质性状。在第5染色体RM289附近检测到了同时影响长宽比、垩白粒率QTL，来自野生稻的等位基因能增加长宽比、降低垩白粒率，贡献率也较高。在第8染色体RM152附近检测到降低垩白粒率和垩白度的QTL，其贡献率分别为14％和9%。本研究结果不仅为品质性状分子标记辅助选择提供参考，而且充分显示了利用野生稻的优异基因改良栽培稻品质性状的巨大潜力。

本实验以四种米粉为原料，每个样品做三个梯度：120mg, 800mg, 2000mg，采用改进的经典酚/仿法、CTAB沉淀法以及盐酸胍/氯仿法提取基因组，并通过聚合酶链式反应(PCR)通过扩增内标基因(SPS)来检测提取方法的优劣。结果显示：120mg的样品经三种方法提取的基因组均不能扩增出内标基因；800mg的样品和2000mg的样品只有用CTAB沉淀法提取的基因组(采用相同的膜板量)能全部扩增出内标基因。结论：CTAB沉淀法提取基因组的效果最好，对PCR的抑制现象最少。

本试验建立检测兽用疫苗中霉形体污染的PCR-ELISA方法，探索其最佳试验条件及优化组合，并与PCR检测法作对比，评价其应用价值。试验依据Genbank中登录的鸡源霉形体和猪源霉形体16s rRNA基因序列，运用DNAStar软件和Primer 5.0软件设计PCR特异性引物和探针，其中引物用地高辛标记，探针用生物素标记。然后以培养的霉形体中提取的DNA为模板，依据PCR-ELISA技术原理设计试验，建立并优化PCR-ELISA反应条件。最后用建立的PCR-ELISA扩增体系和条件对从市场上随机购买的30批鸡新城疫Ⅰ系活疫苗样品、30批鸡新城疫La Sota系活疫苗样品和30批猪瘟活疫苗样品进行检测。检测结果表明：应用建立的PCR-ELISA反应体系和条件可以从疫苗样品中检测到霉形体，检测率为35.6%，比PCR法的检测率高11.2%。该方法灵敏度高，特异性强，在疫苗的霉形体污染检测中具有推广应用价值。

摘要：以里氏木霉（Trichoderma reesei）RNA为模板，采用RT-PCR扩增的方法获得不带自身信号肽man1基因的cDNA片段。构建了重组表达载体pPIC9K-man1，重组质粒SacⅠ线性化后用PEG（聚乙二醇）法导入毕赤酵母Pichia pastoris菌株GS115中，通过PCR和表型鉴定表明man1基因已经整合到毕赤酵母染色体上。经大量筛选，获得高效分泌表达甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株RMAN23。将此菌株在5L发酵罐中进行高密度发酵，测定酶活最高达470IU /mL，同时对重组甘露聚糖酶的性质进行了初步研究。

以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21为表达宿主，重组表达亚油酸异构酶(gLI)。根据GenBank上发表的gLI基因序列，设计并合成一对引物，从L.reuteriPYR8基因组中，PCR扩增出去除5’端42bp信号肽的gLI基因片断，将其克隆入pMD－18－T载体中，序列测定后将gLI基因亚克隆到表达载体pET30a中（pET30a-gLI），将其转化大肠杆菌BL21(DE3)， 在1mmol/L IPTG 30℃条件下诱导表达，大肠杆菌裂解物经SDS-PAGE分析，出现了一新分子量约67kD的蛋白带，与预期目的蛋白分子量相符。生物学活性鉴定表明：经稀释、透析复性，获得的重组gLI在反应缓冲液可以将亚油酸（LA）转化为共轭亚油酸（CLA），30℃ pH7.3的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液，酶活最高为1377U。为进一步体外研究gLI的生物学活性、酶作用机制奠定了基础。

采用比较基因组学和RT-PCR方法，根据人和小鼠SMAF1基因的保守序列，设计简并引物，克隆了猪SMAF1基因的cDNA序列。所克隆片断全长256bp（GeneBank登录号 DQ191892），包括一个编码了81个氨基酸的完整编码区，该序列与人和小鼠的SMAF1基因的相似性分别为86%和78％，预测的氨基酸序列与人、小鼠、大鼠和牛的相似性分别为81％、67％、70%和84%。猪SMAF1基因在脂肪组织中高丰度表达，在4月龄瘦肉型猪（大白猪）脂肪组织中的表达量显著低于脂肪型猪（梅山猪）（P＜0.05）。本研究结果表明，猪SMAF1基因可能具有和其它物种SMAF1基因相似的功能，推测其在脂肪细胞发生和/或脂肪细胞功能中具有重要的调控作用。

本文从第19期（孵化68~72h）鸡（Gallus domesticus）生殖嵴分离到原始生殖细胞（PGC），通过PGC-体细胞共培养进行了原代和传代培养，并对PGC做了c-kit免疫组化鉴定。通过改变PGC的体外培养条件，诱导PGC分化成了神经样细胞、上皮样细胞和骨骼肌样细胞，并分别通过神经元特异性烯醇化酶（NSE）和角蛋白（keratin）免疫组化进行了分化细胞的鉴定，均呈阳性。结果表明培养的鸡胚PGC在体外可分化成神经样细胞、上皮样细胞和骨骼肌样细胞。

采用组织块培养的方法获得奶牛乳腺上皮细胞，通过添加不同浓度的蛋氨酸以及等量的蛋氨酸和蛋氨酸二肽之间的替换，研究其对体外培养的乳腺上皮细胞酪蛋白αs1基因表达的影响。蛋氨酸添加水平为0、20、40、60、80和100 μg/ml。结果表明：添加蛋氨酸的浓度为0-60 μg/ml 时酪蛋白αs1基因表达随蛋氨酸浓度的增加而增强，当添加蛋氨酸的浓度为60-100 μg/ml时酪蛋白αs1随蛋氨酸浓度的增加而减弱，添加蛋氨酸为60 μg/ml时基因表达最强，与0 μg/ml组间差异显著（P<0.05)，其余各组间差异均不显著；用60 μg/ml 蛋氨酸二肽替代等量的蛋氨酸时，蛋氨酸二肽组乳腺上皮细胞酪蛋白αs1基因表达要极显著高于蛋氨酸组（P<0.01)，表明乳腺可以利用蛋氨酸二肽，而且其利用效率高于蛋氨酸。

根据异性孪生不育母牛是性染色体嵌合体（XX/XY），而正常母牛性染色体型为XX这一现象，通过检测被检母牛体内是否存在Y染色体特异的Sry基因，研究开发了一种基于PCR技术的检测异性孪生不育母牛的方法。利用该项技术，可以快速、准确的检测出异性孪生不育母牛。

通过辐射杂交板的方法将猪的Tool-like Receptor 4 (TLR4)定位在SSC1q2.9-q2.13,它与SW1957紧密连锁(15cR; LOD score 15.16)。用RT－PCR表明TLR4在猪的各种组织中广泛表达如睾丸、灰质、肌肉、白质、肾脏、心脏、小肠、胸腺、淋巴结、脾、肺和肝脏。在肺中的表达量最高。这些知识有助于我们对TLR4作为候选基因的认识。

为了阐明鸭主要组织相容性复合体 I 结构并推进其功能研究，本文采用Full RACE PCR法从其淋巴细胞cDNA文库中克隆了鸭MHC I 轻链 (b2m) cDNA. 随后，在pMAL-p2Ｘ/E.coli TB1原核表达系中可溶性表达了其成熟肽蛋白基因，并进行了纯化、蛋白酶切和Western Blot鉴定. 最后，测定了融合蛋白和MBP单体的圆二色谱(CD)值. 鸭b2m cDNA长792 bp，包含18 bp 5’端和414bp 3’端非翻译区. 其ORF为119个氨基酸 (aa)，包含20个aa信号肽和99 aa成熟肽。成熟肽序列的第25位和80位为半胱氨酸(C)，第80位半胱氨酸附近序列为“YTCRVDH”，与免疫球蛋白超基因家族的特征基序 “F/YCXV/AXH”相符.氨基酸序列与鸡、鱼、蛙、人和鼠β2m比较，同源性在30.3%-65.9%之间. CD测定结果表明鸭b2m α螺旋、β折叠、转角、随机卷曲分别为0 aa、50 aa、23 aa 和26 aa，呈典型的β折叠。同源模建也显示鸭b2m 三级结构(3D)由7个β片层折叠而成，不含α螺旋，这与CD测定结果相符合，并与人和小鼠b2m 3D结构相似.

BoLA-DRB3基因是主要组织相容性复合物(Major Histocompatibility Complex, MHC)基因家族中的Ⅱ类基因，它是该基因家族中最主要的功能基因，所编码的MHC抗原与免疫应答，与抗病性密切相关。其第2外显子是编码抗原的主要功能区。本试验采用PCR-RFLP方法对鲁西牛、南阳牛、晋南牛3个群体的DRB3基因第2外显子扩增产物进行多态性分析，检测到A、B和C 3个等位基因，出现6种基因型。χ2适合性检验结果表明鲁西牛和晋南牛在该酶切位点均达到了Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05），而南阳牛未达到Hardy-Weinberg平衡状态（P<0.01）。结合测序，结果显示在DRB3基因第2外显子的第154、155、156和157位的碱基产生突变使得产生HaeⅢ酶切多态。序列比对后发现有13.70％的核苷酸发生突变，相对应有14.61％的氨基酸发生了替代。

构建了两个含西红柿原系统素基因的双元载体pNAR304（UbiI5’+Prosystemin+NOS3’）和pNAR305 (UbiI5’+Prosystemin+NOS3’+ PinⅡ5’+PinⅡ+PinⅡ3’)，并用农杆菌介导方法将其转入水稻品种秀水63、合江19和日本晴。经潮霉素抗性、PCR和Southern blot确证，共获得转基因水稻14株。Northern blot检测表明，原系统素基因(Prosystemin)和马铃薯蛋白酶抑制剂基因(PinⅡ)在这些转基因植株中都能转录表达。然而，植株的二化螟和褐飞虱抗虫性鉴定表明：单独转入Prosystemin（pNAR304）不能提高转基因水稻的抗虫能力；Prosystemin和PinⅡ双价（pNAR305）转基因植株能明显提高水稻的抗虫性，但其抗性水平与PinⅡ单个基因的转基因水稻植株间并无显著差异。 这表明，Prosystemin基因转入水稻并不能有效调节转基因水稻PinII基因的表达量。据此试验结果推测，水稻中可能不存在类似于西红柿系统素的信号途径，很可能水稻的伤害信号转导是经由与双子叶植物系统素体系不同的其它途径来实现的。

为了阐明鸭主要组织相容性复合体 I 结构并推进其功能研究，本文采用Full RACE PCR法从其淋巴细胞cDNA文库中克隆了鸭MHC I 轻链 (b2m) cDNA. 随后，在pMAL-p2Ｘ/E.coli TB1原核表达系中可溶性表达了其成熟肽蛋白基因，并进行了纯化、蛋白酶切和Western Blot鉴定. 最后，测定了融合蛋白和MBP单体的圆二色谱(CD)值. 鸭b2m cDNA长792 bp，包含18 bp 5’端和414bp 3’端非翻译区. 其ORF为119个氨基酸 (aa)，包含20个aa信号肽和99 aa成熟肽。成熟肽序列的第25位和80位为半胱氨酸(C)，第80位半胱氨酸附近序列为“YTCRVDH”，与免疫球蛋白超基因家族的特征基序 “F/YCXV/AXH”相符.氨基酸序列与鸡、鱼、蛙、人和鼠β2m比较，同源性在30.3%-65.9%之间. CD测定结果表明鸭b2m α螺旋、β折叠、转角、随机卷曲分别为0 aa、50 aa、23 aa 和26 aa，呈典型的β折叠。同源模建也显示鸭b2m 三级结构(3D)由7个β片层折叠而成，不含α螺旋，这与CD测定结果相符合，并与人和小鼠b2m 3D结构相似.

摘要：以里氏木霉（Trichoderma reesei）RNA为模板，采用RT-PCR扩增的方法获得不带自身信号肽man1基因的cDNA片段。构建了重组表达载体pPIC9K-man1，重组质粒SacⅠ线性化后用PEG（聚乙二醇）法导入毕赤酵母Pichia pastoris菌株GS115中，通过PCR和表型鉴定表明man1基因已经整合到毕赤酵母染色体上。经大量筛选，获得高效分泌表达甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株RMAN23。将此菌株在5L发酵罐中进行高密度发酵，测定酶活最高达470IU /mL，同时对重组甘露聚糖酶的性质进行了初步研究。

摘要：本研究利用PCR克隆法成功的从乙肝患者血清中扩增出乙肝表面抗原基因，并构建了含有此基因的植物表达载体。用农杆菌侵染法将乙肝表面抗原基因转入百脉根，从转化植株中提取DNA，PCR检测初步验证了目的基因已整合到百脉根的基因组中。

利用PCR的方法从油菜(Brassica napus)基因组中扩增得到花瓣特异性启动子XY355，将XY355与玉米花青素调节基因Lc融合构建植物表达载体pXY60。用冻融法将pXY60转入根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）LBA4404，然后以烟草（Nicotiana tabaccum L.）和矮牵牛（Petunia hybrida）的叶盘为外植体，通过根癌农杆菌介导法进行遗传转化。对再生植株的PCR检测证明外源基因已经整合到转基因烟草和矮牵牛的基因组中。对转基因烟草和矮牵牛的表型进行观察：转Lc基因烟草的花色由浅红变成了红色，转Lc基因矮牵牛的花色由白色变成了浅紫色。

应用PCR扩增到得到玫瑰黄链霉菌S. roseoflavus的几丁质酶基因的整个催化域，将其与包含信号肽区、纤维素结合区、几丁质结合区三个结构功能域的S. lividans chiC基因片段相连接，插入pET23b (+)质粒上，构建成表达载体，用来转化大肠杆菌JM109(DE3)，转化子在几丁质酶培养基上表现活性。

构建了两个含西红柿原系统素基因的双元载体pNAR304（UbiI5’+Prosystemin+NOS3’）和pNAR305 (UbiI5’+Prosystemin+NOS3’+ PinⅡ5’+PinⅡ+PinⅡ3’)，并用农杆菌介导方法将其转入水稻品种秀水63、合江19和日本晴。经潮霉素抗性、PCR和Southern blot确证，共获得转基因水稻14株。Northern blot检测表明，原系统素基因(Prosystemin)和马铃薯蛋白酶抑制剂基因(PinⅡ)在这些转基因植株中都能转录表达。然而，植株的二化螟和褐飞虱抗虫性鉴定表明：单独转入Prosystemin（pNAR304）不能提高转基因水稻的抗虫能力；Prosystemin和PinⅡ双价（pNAR305）转基因植株能明显提高水稻的抗虫性，但其抗性水平与PinⅡ单个基因的转基因水稻植株间并无显著差异。 这表明，Prosystemin基因转入水稻并不能有效调节转基因水稻PinII基因的表达量。据此试验结果推测，水稻中可能不存在类似于西红柿系统素的信号途径，很可能水稻的伤害信号转导是经由与双子叶植物系统素体系不同的其它途径来实现的。

本研究利用一套以籼稻品种“特青”为遗传背景的云南元江普通野生稻（Oryza rufipogon Griff.）渗入系为材料，采用单标记回归分析和渗入片段叠代法，对出糙率、整精米率、垩白粒率、垩白度、长宽比等5个品质性状的QTL进行了分析，初步定位了16个QTL，有10个QTL来自野生稻的等位基因能改良群体的品质性状。在第5染色体RM289附近检测到了同时影响长宽比、垩白粒率QTL，来自野生稻的等位基因能增加长宽比、降低垩白粒率，贡献率也较高。在第8染色体RM152附近检测到降低垩白粒率和垩白度的QTL，其贡献率分别为14％和9%。本研究结果不仅为品质性状分子标记辅助选择提供参考，而且充分显示了利用野生稻的优异基因改良栽培稻品质性状的巨大潜力。

本实验以四种米粉为原料，每个样品做三个梯度：120mg, 800mg, 2000mg，采用改进的经典酚/仿法、CTAB沉淀法以及盐酸胍/氯仿法提取基因组，并通过聚合酶链式反应(PCR)通过扩增内标基因(SPS)来检测提取方法的优劣。结果显示：120mg的样品经三种方法提取的基因组均不能扩增出内标基因；800mg的样品和2000mg的样品只有用CTAB沉淀法提取的基因组(采用相同的膜板量)能全部扩增出内标基因。结论：CTAB沉淀法提取基因组的效果最好，对PCR的抑制现象最少。

本试验建立检测兽用疫苗中霉形体污染的PCR-ELISA方法，探索其最佳试验条件及优化组合，并与PCR检测法作对比，评价其应用价值。试验依据Genbank中登录的鸡源霉形体和猪源霉形体16s rRNA基因序列，运用DNAStar软件和Primer 5.0软件设计PCR特异性引物和探针，其中引物用地高辛标记，探针用生物素标记。然后以培养的霉形体中提取的DNA为模板，依据PCR-ELISA技术原理设计试验，建立并优化PCR-ELISA反应条件。最后用建立的PCR-ELISA扩增体系和条件对从市场上随机购买的30批鸡新城疫Ⅰ系活疫苗样品、30批鸡新城疫La Sota系活疫苗样品和30批猪瘟活疫苗样品进行检测。检测结果表明：应用建立的PCR-ELISA反应体系和条件可以从疫苗样品中检测到霉形体，检测率为35.6%，比PCR法的检测率高11.2%。该方法灵敏度高，特异性强，在疫苗的霉形体污染检测中具有推广应用价值。

摘要：利用基因重组技术将鸡传染性支气管炎病毒S1基因分段（A段和B段）克隆到pGEX-6p-1载体中，并利用IPTG诱导表达。表达产物裂解后，经SDS-PAGE电泳和考马司亮蓝染色，有明显的融合表达蛋白条带。通过特异性抗体的Western-blot检测，两段表达产物均在相应位置出现了明显的条带，证明表达产物具有部分抗原性。用Glutathione Sepharose 4B纯化出GST融合蛋白。将纯化得到的融合蛋白免疫家兔，连续免疫3次，将得到的抗体与200TOCID50/0.1ml病毒工作液在37℃温育1h进行气管环试验，计算结果 A段抗体的50%血清中和终点为1：18，而B段抗体的50%血清中和终点为1：53，从而表明这两段的表达产物具有较好的免疫原性，且B段表达产物的免疫原性比A段高。

用网状内皮组织增生病病毒（REV）感染SPF鸡造成免疫抑制状态，用双抗体夹心ELISA对鸡脾淋巴细胞IFN-γ的分泌量进行了测定。结果显示，SPF雏鸡接种REV后，除呈现生长缓慢症状外，并且出现了中枢免疫器官严重萎缩等免疫抑制状态的典型表现。IFN-γELISA显示，REV感染后7 d (7 dpi)，脾淋巴细胞IFN-γ的分泌量显著升高，与对照组相比差异极显著。至15 dpi，IFN-γ水平最高，以后逐渐下降，但至50 dpi仍显著高于对照鸡。这是REV感染鸡后对IFN-γ影响的首次直接定量研究。

以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21为表达宿主，重组表达亚油酸异构酶(gLI)。根据GenBank上发表的gLI基因序列，设计并合成一对引物，从L.reuteriPYR8基因组中，PCR扩增出去除5’端42bp信号肽的gLI基因片断，将其克隆入pMD－18－T载体中，序列测定后将gLI基因亚克隆到表达载体pET30a中（pET30a-gLI），将其转化大肠杆菌BL21(DE3)， 在1mmol/L IPTG 30℃条件下诱导表达，大肠杆菌裂解物经SDS-PAGE分析，出现了一新分子量约67kD的蛋白带，与预期目的蛋白分子量相符。生物学活性鉴定表明：经稀释、透析复性，获得的重组gLI在反应缓冲液可以将亚油酸（LA）转化为共轭亚油酸（CLA），30℃ pH7.3的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液，酶活最高为1377U。为进一步体外研究gLI的生物学活性、酶作用机制奠定了基础。

采用组织块培养的方法获得奶牛乳腺上皮细胞，通过添加不同浓度的蛋氨酸以及等量的蛋氨酸和蛋氨酸二肽之间的替换，研究其对体外培养的乳腺上皮细胞酪蛋白αs1基因表达的影响。蛋氨酸添加水平为0、20、40、60、80和100 μg/ml。结果表明：添加蛋氨酸的浓度为0-60 μg/ml 时酪蛋白αs1基因表达随蛋氨酸浓度的增加而增强，当添加蛋氨酸的浓度为60-100 μg/ml时酪蛋白αs1随蛋氨酸浓度的增加而减弱，添加蛋氨酸为60 μg/ml时基因表达最强，与0 μg/ml组间差异显著（P<0.05)，其余各组间差异均不显著；用60 μg/ml 蛋氨酸二肽替代等量的蛋氨酸时，蛋氨酸二肽组乳腺上皮细胞酪蛋白αs1基因表达要极显著高于蛋氨酸组（P<0.01)，表明乳腺可以利用蛋氨酸二肽，而且其利用效率高于蛋氨酸。

通过辐射杂交板的方法将猪的Tool-like Receptor 4 (TLR4)定位在SSC1q2.9-q2.13,它与SW1957紧密连锁(15cR; LOD score 15.16)。用RT－PCR表明TLR4在猪的各种组织中广泛表达如睾丸、灰质、肌肉、白质、肾脏、心脏、小肠、胸腺、淋巴结、脾、肺和肝脏。在肺中的表达量最高。这些知识有助于我们对TLR4作为候选基因的认识。

摘要：利用基因重组技术将鸡传染性支气管炎病毒S1基因分段（A段和B段）克隆到pGEX-6p-1载体中，并利用IPTG诱导表达。表达产物裂解后，经SDS-PAGE电泳和考马司亮蓝染色，有明显的融合表达蛋白条带。通过特异性抗体的Western-blot检测，两段表达产物均在相应位置出现了明显的条带，证明表达产物具有部分抗原性。用Glutathione Sepharose 4B纯化出GST融合蛋白。将纯化得到的融合蛋白免疫家兔，连续免疫3次，将得到的抗体与200TOCID50/0.1ml病毒工作液在37℃温育1h进行气管环试验，计算结果 A段抗体的50%血清中和终点为1：18，而B段抗体的50%血清中和终点为1：53，从而表明这两段的表达产物具有较好的免疫原性，且B段表达产物的免疫原性比A段高。

用网状内皮组织增生病病毒（REV）感染SPF鸡造成免疫抑制状态，用双抗体夹心ELISA对鸡脾淋巴细胞IFN-γ的分泌量进行了测定。结果显示，SPF雏鸡接种REV后，除呈现生长缓慢症状外，并且出现了中枢免疫器官严重萎缩等免疫抑制状态的典型表现。IFN-γELISA显示，REV感染后7 d (7 dpi)，脾淋巴细胞IFN-γ的分泌量显著升高，与对照组相比差异极显著。至15 dpi，IFN-γ水平最高，以后逐渐下降，但至50 dpi仍显著高于对照鸡。这是REV感染鸡后对IFN-γ影响的首次直接定量研究。

摘要：本研究利用PCR克隆法成功的从乙肝患者血清中扩增出乙肝表面抗原基因，并构建了含有此基因的植物表达载体。用农杆菌侵染法将乙肝表面抗原基因转入百脉根，从转化植株中提取DNA，PCR检测初步验证了目的基因已整合到百脉根的基因组中。

应用PCR扩增到得到玫瑰黄链霉菌S. roseoflavus的几丁质酶基因的整个催化域，将其与包含信号肽区、纤维素结合区、几丁质结合区三个结构功能域的S. lividans chiC基因片段相连接，插入pET23b (+)质粒上，构建成表达载体，用来转化大肠杆菌JM109(DE3)，转化子在几丁质酶培养基上表现活性。

植物的诱导抗虫基因可分为3类，即防御基因、防御物质合成基因和信号途径基因，综述了这3类基因的种类及其功能。植物诱导抗虫基因除了受昆虫和损伤诱导外，还受植物激素茉莉酮酸酯、水杨酸、阿司匹林、脱落酸和乙烯，以及其它信号物质的调控，这些信号物质的调控途径组成了复杂的植物防御的信号传输网络。植物诱导抗虫基因的研究将为害虫防治提供新的途径。

植物的诱导抗虫基因可分为3类，即防御基因、防御物质合成基因和信号途径基因，综述了这3类基因的种类及其功能。植物诱导抗虫基因除了受昆虫和损伤诱导外，还受植物激素茉莉酮酸酯、水杨酸、阿司匹林、脱落酸和乙烯，以及其它信号物质的调控，这些信号物质的调控途径组成了复杂的植物防御的信号传输网络。植物诱导抗虫基因的研究将为害虫防治提供新的途径。

前期研究中，我们采用小鼠卵母细胞胞浆内精子注射（ICSI）技术，成功地用新鲜精子获得了生理健康的ICSI小鼠。在此基础上，本文结合细胞冻干技术，进行了冻干精子ICSI生产试管小鼠的尝试。B6D2F1成年公鼠的精子在Tris-HCl-EDTA（pH8.2）溶液中冻干4 h后解冻，将其精子头注入到KM小鼠成熟卵母细胞的胞质中。6 h后，83.0%的卵子受精。用CZB溶液体外培养发现，冻干精子生产的胚胎，体外发育至2-C (92.0% vs 99.5%)、4-C（52.7% vs 97.2%）、桑椹胚（36.6% vs 86.3%）和囊胚的比例（21.4% vs 68.7%）极显著地（p<0.01）低于新鲜精子生产的ICSI胚胎。移植2-C期冻干精子ICSI胚胎检测体内发育，结果发现，D10的着床率为63.0%（17/27）；胎鼠的出生比例为21.7%（13/60），这些ICSI小鼠成年后的生理和生殖能力正常。试验结果说明，精子冻干后，仍能生产ICSI动物，冻干技术可以用于哺乳动物精子的保存。

在转CBF1基因烟草的后代中发现了花器官变异的植株，主要有花瓣裂瓣、花型变小、花丝变短花粉萌发率降低和育性降低等表型变化。采用TAIL－PCR方法，从花器官变异明显和不明显的植株中分别克隆到了各自的T－DNA插入区域的侧翼序列。将这些侧翼序列与GenBank database及pBI121质粒进行比对。结果表明表型差异明显的2个植株的T－DNA插入位点相同，属于一个转基因株系；且T－DNA插入区位于烟草基因组的非编码区。说明这些花型的变异并非由T－DNA在受体基因组中插入位点不同造成的，也不是由外源转基因对受体功能基因的破坏引起的。

前期研究中，我们采用小鼠卵母细胞胞浆内精子注射（ICSI）技术，成功地用新鲜精子获得了生理健康的ICSI小鼠。在此基础上，本文结合细胞冻干技术，进行了冻干精子ICSI生产试管小鼠的尝试。B6D2F1成年公鼠的精子在Tris-HCl-EDTA（pH8.2）溶液中冻干4 h后解冻，将其精子头注入到KM小鼠成熟卵母细胞的胞质中。6 h后，83.0%的卵子受精。用CZB溶液体外培养发现，冻干精子生产的胚胎，体外发育至2-C (92.0% vs 99.5%)、4-C（52.7% vs 97.2%）、桑椹胚（36.6% vs 86.3%）和囊胚的比例（21.4% vs 68.7%）极显著地（p<0.01）低于新鲜精子生产的ICSI胚胎。移植2-C期冻干精子ICSI胚胎检测体内发育，结果发现，D10的着床率为63.0%（17/27）；胎鼠的出生比例为21.7%（13/60），这些ICSI小鼠成年后的生理和生殖能力正常。试验结果说明，精子冻干后，仍能生产ICSI动物，冻干技术可以用于哺乳动物精子的保存。

在转CBF1基因烟草的后代中发现了花器官变异的植株，主要有花瓣裂瓣、花型变小、花丝变短花粉萌发率降低和育性降低等表型变化。采用TAIL－PCR方法，从花器官变异明显和不明显的植株中分别克隆到了各自的T－DNA插入区域的侧翼序列。将这些侧翼序列与GenBank database及pBI121质粒进行比对。结果表明表型差异明显的2个植株的T－DNA插入位点相同，属于一个转基因株系；且T－DNA插入区位于烟草基因组的非编码区。说明这些花型的变异并非由T－DNA在受体基因组中插入位点不同造成的，也不是由外源转基因对受体功能基因的破坏引起的。

Bt转基因棉花于1997年在我国商业化种植，到2006年种植面积已达棉花总面积的70％。环境影响监测表明，Bt棉花有效地控制了棉铃虫和红铃虫的发生和为害，但盲蝽蟓类害虫演化上升成为棉田的主要害虫。抗性分析显示，虽然棉铃虫自然种群对Bt棉花抗性基因频率没有明显的变化，但Bt棉花髙强度种植地区的棉铃虫耐受性正逐年提高，已成为影响Bt棉花持续利用的主要因素。基于Bt棉花环境风险和影响因子的综合分析，本文讨论了Bt棉花环境风险的管理策略。

Bt转基因棉花于1997年在我国商业化种植，到2006年种植面积已达棉花总面积的70％。环境影响监测表明，Bt棉花有效地控制了棉铃虫和红铃虫的发生和为害，但盲蝽蟓类害虫演化上升成为棉田的主要害虫。抗性分析显示，虽然棉铃虫自然种群对Bt棉花抗性基因频率没有明显的变化，但Bt棉花髙强度种植地区的棉铃虫耐受性正逐年提高，已成为影响Bt棉花持续利用的主要因素。基于Bt棉花环境风险和影响因子的综合分析，本文讨论了Bt棉花环境风险的管理策略。