L.reuteri亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中的表达及活性检测
张艳禾
东北农业大学食品科学学院
Overexpression and Identification of Bioactivity of L.reurei linoleite isomerase in Escherichia coli
摘要 以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21为表达宿主，重组表达亚油酸异构酶(gLI)。根据GenBank上发表的gLI基因序列，设计并合成一对引物，从L.reuteriPYR8基因组中，PCR扩增出去除5’端42bp信号肽的gLI基因片断，将其克隆入pMD－18－T载体中，序列测定后将gLI基因亚克隆到表达载体pET30a中（pET30a-gLI），将其转化大肠杆菌BL21(DE3)， 在1mmol/L IPTG 30℃条件下诱导表达，大肠杆菌裂解物经SDS-PAGE分析，出现了一新分子量约67kD的蛋白带，与预期目的蛋白分子量相符。生物学活性鉴定表明：经稀释、透析复性，获得的重组gLI在反应缓冲液可以将亚油酸（LA）转化为共轭亚油酸（CLA），30℃ pH7.3的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液，酶活最高为1377U。为进一步体外研究gLI的生物学活性、酶作用机制奠定了基础。
Abstract ：The recombinant expression of linoleite isomerase using Escherichia coli BL21as host cell was studied. A pair of primers were designed and synthesized according to the linoleic isomerase(gLI) gene sequence published by Genbank. Linoleic isomerase gene was amplified by PCR from genome of L.reuteriPYR8. Recombinant pET-gLI was constructed after the gLI gene was sequenced. BL21(DE3) was induced with 1.0mmol/L IPTG, SDS-PAGE showed recombinant protein was about 67 KD. After inducted and purified, the gLI can converts linolenic acid to CLA in phosphate buffer(pH7.3) 30℃ activity enzyme 1377U, which gave a foundation for biological activity and machnism。
收稿日期: 2006-04-10
通讯作者:
张艳禾
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