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里氏木霉RUT-C30内切β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的分泌表达
陈小兵,丁宏标,乔宇,岳明
中国农业科学院饲料研究所
Expression of mannanase from Trichoderma reesei RUTC-30 in Pichia Pastoris
全文: PDF (0 KB)  HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 摘要:以里氏木霉(Trichoderma reesei)RNA为模板,采用RT-PCR扩增的方法获得不带自身信号肽man1基因的cDNA片段。构建了重组表达载体pPIC9K-man1,重组质粒SacⅠ线性化后用PEG(聚乙二醇)法导入毕赤酵母Pichia pastoris菌株GS115中,通过PCR和表型鉴定表明man1基因已经整合到毕赤酵母染色体上。经大量筛选,获得高效分泌表达甘露聚糖酶的毕赤酵母工程菌株RMAN23。将此菌株在5L发酵罐中进行高密度发酵,测定酶活最高达470IU /mL,同时对重组甘露聚糖酶的性质进行了初步研究。
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陈小兵
丁宏标
乔宇
岳明
关键词 里氏木霉甘露聚糖酶毕赤酵母    
Abstract:Abstract: The cDNA encoding mannanase without the native secretion was cloned by RT-PCR using RNA of the Trichoderma reesei as template. The secreted expression plasmid pPIC9K-man1 of Pichia pastoris was constructed and digested with SacⅠ and transformed into pichia pastoris GS115 by PEG . The positive transformants that integrated man1 gene in their genomes were obtained by PCR technique and determining Mut phenotype. After screen, the recombinant P. pastoris strain RMAN23 was obtained and fermented in large scale 5L fermenter. The recombinant mannanase activity could reach to 470IU/mL .The properties of the recombinant mannanase were characterized.
收稿日期: 2006-05-18     
通讯作者: 丁宏标   
引用本文:   
陈小兵,丁宏标,乔宇,岳明. 里氏木霉RUT-C30内切β-甘露聚糖酶基因在毕赤酵母中的分泌表达[J]. , 2007, 15(1): 0-0.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/     或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2007/V15/I1/0
 
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