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农业生物技术学报  2009年 17卷 5期  刊出日期:2009-10-31
 
研究论文
IGFBP5基因部分编码序列的SNP快速筛查及其突变对猪生产性能的影响
The quick screening SNP on partial coding sequence of porcine IGFBP5 gene and analysis of gene effect on production performance in pigs
赵晓枫,欧阳克,张阳,徐宁迎
2009, 17(5): 758-762  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (464 KB)  ( 231 )
摘要
摘要:胰岛素样生长因子(IGFs)是一类重要的生长因子,具有促进细胞生长、分裂和分化的作用,而IGFBPs对IGFs的代谢与分布起着关键作用,研究发现IGFBPs有独立于IGF之外的生物活性,并且受到翻译后的多种修饰。本研究采用基因池PCR扩增直接测序法,快速寻找到了IGFBP5基因编码序列+534处SNP座位的G/A突变,以此建立了PCR-RFLP的基因分型方法。然后利用该方法检测了300头金华×皮特兰杂交F2代猪,结果显示有GG、GA、AA 3种基因型,它们的基因型频率分别为0.064、0.589和0.348, G基因频率为0.358,A基因频率为0.642,采用一般线性模型分析结果表明,IGFBP5不同的SNP基因型对断奶体重和肌肉系水力有不同的遗传效应(p<0.05)。
CAST基因型与营养水平互作对猪胴体性状的影响研究
Interaction Effects of CAST Genotype and Nutrition Levels on Pig Carcass Traits
彭英林1,柳小春2,施启顺3,杨仕柳1,朱吉1
2009, 17(5): 767-772  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (462 KB)  ( 331 )
摘要
钙蛋白酶抑制蛋白CAST (Calpastatin)对肌内蛋白降解、肌细胞生长速度以及屠宰后钙蛋白酶的活性具有重要的影响,研究CAST基因多态性的遗传效应及其与营养水平的互作影响对猪胴体品质的控制具有重要的作用。本试验使用杜洛克和大围子2个纯种猪群,杜洛克×(长白×大白)和大白×大围子2个杂种猪群,利用HinfⅠ, MspⅠ和RsaⅠ3种内切酶研究了CAST基因的RFLP及其与营养水平互作对猪胴体性状的影响。结果表明,HinfⅠ、MspⅠ和RsaⅠ3种内切酶在4个猪群均获得RFLP,酶切位点分别存在一对等位基因A与B, C与D及E与F。AA型×高营养水平互作显著降低熟肉率和滴水损失,但与中水平互作却显著提高滴水损失(P<0.05)。AB型×高营养水平互作显著降低胴体长和眼肌面积,提高肌肉的滴水损失;但AB型×中营养水平互作则显著降低屠宰率、背膘厚和熟肉率,并提高腿臀比例和瘦肉率(P<0.05)。CD型×高水平互作对所有性状的互作效应显著,CC型×中营养水平组提高滴水损失(P<0.05)。EF型×高营养水平互作能对多个性状产生达到或超过群体均数的10%的效应(P<0.05),EE型×中营养水平互作显著增加背膘厚。
中国家鸭的分子遗传多样性及其起源探讨
Studies of the molecular genetic diversity and origin of Chinese domestic ducks
李慧芳
2009, 17(5): 802-807  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (536 KB)  ( 163 )
摘要
本研究测定了我国重点保护的8个家鸭品种及斑嘴野鸭的线粒体DNA D-loop区667bp序列,分析了这8种家鸭的遗传多态性和起源。遗传多态性分析结果显示A、G、C、T碱基平均含量分别为25.5%,15.3%,33.4%,25.8%;变异类型为转换和颠换,未发现缺失与插入。确定了20种单倍型,Hap2(A7)为家鸭的主体单倍型型,平均单倍型多样度为0.67136,平均核苷酸多样度为0.00192,攸县麻鸭单倍型多样度、核苷酸多样度最高,8个品种之间双参数遗传距离为0.00056-0.00414,其中连城白鸭和攸县麻鸭之间遗传距离最大。38种单倍型系统发生研究表明,8种家鸭都单一地起源于绿头鸭。
利用微卫星DNA标记分析7个绵羊群体遗传多样性与系统发育
Analysis of Genetic Diversity and phylogeny among 7 sheep Populations
成述儒1,罗玉柱1,韩建林1,Olivier Hanotte2
2009, 17(5): 808-814  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (426 KB)  ( 248 )
摘要
摘要:实验室检测了甘肃藏羊、甘南藏羊、湖羊、青海藏羊、小尾寒羊、滩羊、岷县黑裘皮7个绵羊群体268只个体15个微卫星座位等位基因,进而开展了等位基因变异分析、杂合度分析、哈代—温伯格比率检验、遗传距离估算、系统发生树构建和遗传结构推导。结果表明:7个绵羊群体在15个微卫星座位上共发现187个等位基因。哈代—温伯格比率偏差检验中共发现43个“群体-座位”偏离了哈代—温伯格比率,其中湖羊偏离哈代-温伯格比率的“群体-座位”数最多。群体杂合度分析表明青海藏羊群体的遗传多样性较丰富,而湖羊和岷县黑裘皮羊的遗传多样性较低。遗传距离和系统发生树的分析表明,滩羊、小尾寒羊和湖羊亲缘关系较近,类群起源上享有共同的祖先,岷县黑裘皮羊与其它6个绵羊群体遗传关系较远,7个绵羊群体的遗传结构推演为三类。
利用外源基因侧翼序列扩增筛选纯合转基因植株
Screening Homozygous Transgenic Plants by Flanking Sequences Amplification of T-DNA in Tomatoes
贾芝琪,张忠华,崔艳红,李颖,黄三文,杜永臣
2009, 17(5): 820-824  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (508 KB)  ( 354 )
摘要
摘要:传统的纯化外源基因的方法主要是通过多代自交,该方法耗时长,效率低。通过对转基因材料中外源基因T-DNA区域插入位点侧翼序列的分析,本文开发了筛选纯合转基因植株的新方法。首先,利用酶切连接接头的PCR方法,我们在番茄转基因植株中扩增外源基因Avr3a的两翼序列并测序;然后通过该序列设计的引物在转基因植株中验证,得到的两翼序列通过与SGN数据库比对分析,发现外源基因的插入位点有40bp的碱基缺失;最后利用侧翼序列和边界序列设计的引物,成功在转基因T1代植株中筛选出纯合单株,并在T2代进行了验证。
杀雄剂SQ-1诱导小麦雄性不育花药蛋白质组分分析
Analysis on Anther Proteins of Wheat Male Sterile line Induced by CHA SQ-1
叶景秀1,陈蕊红1,张改生1,王俊生2,王书平2,李 莉2,牛 娜2
2009, 17(5): 858-864  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (719 KB)  ( 327 )
摘要
采用固相pH梯度SDS聚丙烯酰胺双向凝胶电泳技术对杀雄剂SQ-1处理和未处理的小麦单核期、二核期花药总蛋白进行了分离,通过考马斯亮蓝G-250染色,获得了分辨率和重复性较好的双向电泳图谱。通过PDQuest 2DE图像分析软件的分析,在等电点(pI)4~7之间可识别约500个以上较为清晰的蛋白质点,处理和对照各时期蛋白质在等电点5~6,分子量20~40kD之间相对较集中;检测到单核期差异点43个,二核期差异点45个,并计算出了各差异点的分子量和等电点。其中11个点在处理材料的单核期缺失而在对照中表达,7个在处理中表达而在对照中缺失,14个点表达量在处理中明显减弱,而另外11个明显增强;在二核期45个差异点中,有13个在处理中缺失而在对照中表达,7个在处理中表达而在对照中不表达,12个表达量在处理中明显减弱而另外13个明显增强。经SQ-1处理后在单核期和二核期A-Z3(26.8/5.7)和C-Z5(26.8/5.7)点均缺失。点A-L10(26.8/5.9)在单核期处理的表达量下调,而到了二核期完全缺失C-Z6(26.9/5.9)点。通过双向电泳技术获得的这些差异蛋白可能直接或间接地参与了花药发育的各个途径,因此,处理和对照图谱中表现出的差异蛋白很可能与SQ-1诱导小麦雄性不育有关。
里氏木霉木聚糖酶基因Ⅱ在毕赤酵母中的分泌表达及其酶学性质研究
Expression of the Trichoderma reesei Rut C-30 Xylanase Gene2 in Pichia pastoris and Characterization of the Recombinant Enzyme
何军,余冰,陈代文
2009, 17(5): 920-924  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (734 KB)  ( 344 )
摘要
利用RT-PCR技术从高产木聚糖酶菌株T. reesei Rut C-30中成功扩增出其主要木聚糖酶基因XynⅡ,经序列分析证实,在该菌株诱变选育过程中其成熟肽序列有两处碱基发生突变;将不带原基因信号肽的XynⅡ克隆到毕赤酵母高效表达载体pPICZαA上,线性化后经电击转化到毕赤酵母中,经Zeocin及PCR筛选后得到的转化子用1%甲醇诱导。SDS-PAGE证实,重组子实现了分泌表达,且发酵上清中几无杂蛋白;对该重组酶酶学性质分析表明,该酶最适反应温度为60℃,最适反应pH值为6.0,该酶热稳定性较好,在50℃下保温30 min仍能保留其95%以上活性。
利用高效转座质粒克隆Streptinomonas maltophilia YHJ-1的分解羽毛相关基因
Cloning gene related to feather degradation in Stenotrophomonas maltophilia YHJ-1 using highly efficient transposon plasmid
黄亦钧1,季金殿1,尤升波1,单成刚2,岳寿松1
2009, 17(5): 931-936  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (682 KB)  ( 349 )
摘要
嗜麦芽窄食假单胞菌Streptinomonas maltophilia YHJ-1是一株能高效降解羽毛角蛋白的菌株;该菌对卡那霉素等多种抗生素不敏感。本实验利用携带Tn5转座酶和卡那霉素抗性转座质粒pRL27和含氯霉素抗性基因盒的pMCm质粒,构建了以氯霉素抗性作为选择标记的转座质粒pRH30。以E. coli UQ3021/pRH30为供体,通过双亲本杂交,构建了S. maltophilia YHJ-1的插入突变体文库,该库共含1246个转化子。随机挑选4个突变子的氯霉素抗性检测和PCR扩增测序分析结果显示文库是可靠的。已从文库中筛选出3株不能降解羽毛转化子,表明利用氯霉素抗性的转座质粒pRH30来构建菌株YHJ-1的突变体是克隆其相关基因并进行遗传分析的有效方法。
C3d对减毒沙门氏菌介导的NDV DNA疫苗诱导的特异性体液免疫应答的增强作用
Enhancement of the Humoral Immune Response against the Attenuated Salmonella typhimurium Harbouring Newcastle Disease Virus DNA Vaccine by C3d Molecule
潘志明,袁舟,刘蓓蓓,游猛,蔡雯婷,刘萌
2009, 17(5): 745-749  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (553 KB)  ( 195 )
摘要
采用PCR技术从重组质粒pVAX1-F扩增出新城疫病毒F48E8株的融合蛋白(F)基因,将其克隆入含有3 拷贝C3d 编码基因的pTR-C3d3质粒中,获得重组质粒pTR-F-C3d3。将F-C3d3基因片段从pTR-F-C3d3中切出,克隆入真核表达质粒pVAX1中,获得重组真核表达质粒pVAX1-F-C3d3。将pVAX1-F-C3d3转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F-C3d3)。重组菌分别以1×109 CFU的剂量两次口服免疫1日龄SPF鸡,结果显示,SL7207(pVAX1-F-C3d3)激发产生的血清抗体效价与SL7207 (pVAX1-F)免疫组之间存在显著性差异(P < 0.05)。SL7207(pVAX1-F-C3d3)免疫组的小肠黏膜抗体效价高于SL7207(pVAX1-F)免疫组,但两者间差异不显著(P > 0.05)。提示C3d可增强减毒沙门氏菌介导的NDV DNA疫苗诱导的特异性体液免疫应答水平,这为提高基于减毒沙门氏菌的NDV基因工程疫苗的免疫效果提供了新的途径。
肉鸡H9N2亚型禽流感病毒全基因测序及遗传进化分析
Phylogenetic analysis of the eight genes of H9N2 subtype avian influenza virus
万春和,傅光华,程龙飞,陈红梅,林芳,林建生,黄瑜,施少华
2009, 17(5): 750-757  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (698 KB)  ( 312 )
摘要
根据GenBank登陆的H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的全基因序列,设计11对引物,运用RT-PCR方法扩增A/Chicken/Zhejiang/HJ/2007(H9N2)毒株8个基因片段,并克隆到pMD18-T载体中进行序列测定。基因序列比较及遗传进化分析结果表明,所克隆的8个基因片段均有HJ毒株完整的开放阅读框(ORF),其血凝素(HA)基因蛋白裂解位点的氨基酸组成为-PSKSSR*G-,为不连续的碱性氨基酸,符合低致病性AIV HA基因裂解位点的序列特征;与QA/HK/G1/97的进化关系较近,处在同一分支。其神经氨酸酶(NA)基因在63、64、65位点上有3个氨基酸(T、E、I)缺失,在遗传进化上属于常见的CK/BJ/1/94(DK/HK/Y280/97)群系。核蛋白(NP)基因整合有同地分离的H5N1亚型流感病毒NP基因片段,进化关系较近。基质蛋白(M)基因与1999年香港感染儿童的两株流感病毒(HK/1073/99和HK/1074/99)进化关系属于同一分支。非结构蛋白(NS)基因与近年来分离的猪源H9N2亚型流感病毒进化关系相近,和1998年首次报道的猪源H9N2亚型流感病毒(SW/HK/9/98)处在同一进化分支。聚合酶蛋白(PA、PB2、PB1)中,PB1从33-47位存在15个连续碱基缺失,是首次报道该基因ORF内存在缺失,从遗传进化上和近年来分离的H5N1亚型流感病毒处在同一分支上;PA基因从遗传进化上和PB1基因类似;PB2基因与常见的流感病毒毒株的遗传进化关系较远,在相应的进化树另成分支。因此,A/Chicken/Zhejiang/HJ/2007(H9N2)是由不同流感病毒基因亚系间发生自然重排的产物。
猪ATGL基因特异性siRNA表达载体的构建及鉴定
Construction and identification of porcine ATGL siRNA expression vector
单体中,任阳,伍婷,汪以真
2009, 17(5): 763-766  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (623 KB)  ( 195 )
摘要
ATGL是一种新发现的甘油三酯分解酶。根据猪ATGL基因全长cDNA序列,设计合成其特异性RNA干扰片段,将其克隆入pSilencer 4.1-CMV neo干扰载体中,构建猪ATGL基因的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,并对其进行PCR、双酶切及测序鉴定。结果表明,成功构建了猪ATGL基因的特异性siRNA表达载体。这为进一步利用RNAi技术研究猪ATGL基因在脂肪代谢中的功能奠定了基础。
西农萨能羊骨桥蛋白基因OPN的筛选、克隆和生物信息学分析
Screening, Cloning and and Bioinformatics Analysis of OPN Gene in Xinong Saanen Goat
孙杰
2009, 17(5): 773-778  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (632 KB)  ( 205 )
摘要
摘 要: 采用抑制性削减杂交技术构建西农萨能羊乳腺组织在泌乳初期和泌乳高峰期的差异表达基因文库, 筛选泌乳初期和高峰期乳腺组织差异表达基因,通过RT-PCR方法克隆西农萨能羊乳腺组织OPN的CDs区序列,用实时定量PCR分析OPN基因的表达水平变化,并进行序列比对和功能预测。结果成功构建了西农萨能羊不同泌乳期乳腺组织中差异表达基因文库,克隆了乳腺组织OPN基因, GenBank登录号为: EU295699, 开放读码框由834个碱基组成,编码277个氨基酸,前16个氨基酸为推定的信号肽区域。西农萨能羊OPN与绵羊(AF_152416)、牛(NM_174187)、人(DQ_846871)、小鼠(NM_009263) 相应基因核苷酸同源性分别为98%、95%、71%和70%,氨基酸同源性分别为:98%、91%、55%和54%,泌乳初期乳腺组织中mRNA表达水平是泌乳高峰期的5.03倍;预测西农萨能羊OPN较人和小鼠OPN多2个潜在功能基序。
CELⅠ酶在水稻基因多态性检测中的应用
Application of CELⅠ for detection of gene polymorphism in rice
傅曼琴
2009, 17(5): 877-881  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (407 KB)  ( 205 )
摘要
CELⅠ酶是定向诱导基因组局部突变TILLING(Targeting Induced Local Lesions In Genomes)技术中的关键酶,能够特异识别并切割单碱基错配和扭曲的DNA异源双链。实验从芹菜(Apium graveolens)中提取了CELⅠ酶,采用SDS-PAGE检测在43kD处有主带。以杂合双链作为底物,检测了CELⅠ酶的错配切割活性,结果表明CELⅠ酶可在不同材料的DNA所形成的异源双链的错配处准确切割。通过CELⅠ酶的提取、活性分析以及在水稻基因多态性检测中的应用,为基因多态性检测提供一种简单易行的方法。
一种检测转Bt基因抗虫棉新棉33B和GK-12的PCR方法
A PCR Method to Detect Transgenic Bt Cottons 33B and GK-12
王奕海,谢家建,张永军,王锡锋,彭于发
2009, 17(5): 914-919  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (472 KB)  ( 213 )
摘要
测定了转基因抗虫棉新棉33B和GK-12的Bt基因表达盒的序列,发现它们在Bt基因和Bt基因与终止子连接区的序列存在差异,而在启动子与Bt基因连接区的序列完全一致。基于这种结构上的差异,设计3条特异性引物MG-P1、MG-P2和MG-P3,建立了检测这两个转基因抗虫棉的双重PCR方法。采用建立的方法,检测了40个转基因棉花样品,其中,只含有新棉33B的Bt基因结构的样品数为32个;只含有GK-12的Bt基因结构的样品数为6个;同时含有两者结构的样品数为2个。
转EGFP基因猪羊水干细胞的体外分化
In Vitro Differentiation of EGFP Gene Transfected Porcine Amniotic Fluid–derived Stem Cells
郑月茂,赵晓娥,华松,权富生,刘军,张涌
2009, 17(5): 792-796  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (499 KB)  ( 192 )
摘要
目的:获得转EGFP基因猪羊水干细胞并监测其自我更新、增殖和多向分化潜能。方法:利用羊水干细胞培养技术体系,从胎龄30 d猪胎儿羊水中分离培养羊水干细胞,通过脂质体介导转染技术,将EGFP基因导入羊水干细胞,诱导转基因羊水干细胞贴壁分化,观察其体外增殖、分化特点。采用RT-PCR技术检测干细胞和分化细胞表面标志或相关基因。结果:成功分离培养出羊水干细胞,获得转EGFP基因羊水干细胞,羊水干细胞在表达EGFP的同时仍具有多向分化潜能。羊水干细胞中β-Actin、NogoA、DCX、CyclinD2、CD133、Hes1、Oct4、Desmin、CD-90、Nanog和Sox2表达阳性;体外诱导的羊水干细胞可以分化为星形胶质细胞(表达GFAP)、少突胶质细胞(表达GalC)和神经元细胞(表达NF、NSE和MAP2);能分化为脂肪细胞(表达LPL和PPARγ-D)、成骨细胞(表达Osteonectin和Osteocalcin)、肌细胞(表达myf-6和myoD)和内皮细胞(表达CD31、CD34、CD144 和eNOS)。结论:从猪胎儿羊水分离羊水干细胞具有可行性和有效性,转EGFP基因羊水干细胞具有自我更新、增殖和多向分化潜能,可以用EGFP对羊水干细胞进行标记、追踪。
一氧化氮对小鼠卵母细胞自发成熟的影响及作用机制
Effects and mechanism of nitric oxide on mouse oocyte spontaneous maturation
王松波1,周波2,张美佳2,夏国良2
2009, 17(5): 797-801  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (918 KB)  ( 178 )
摘要
为研究一氧化氮(NO)供体硝普钠(nitroprusside sodium,SNP)对小鼠卵母细胞体外自发成熟的作用,并进一步探讨NO影响卵母细胞体外自发成熟的可能机制,我们采用了体外细胞培养方法和放射免疫分析法(RIA)。细胞培养研究结果显示,NO供体SNP(1mM)能够延迟卵丘卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes, COCs) 自发成熟过程中GVBD的发生,抑制PB1的释放。放射免疫分析(RIA)实验结果表明,1mM SNP能够显著的升高COCs内cGMP的水平,而可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)抑制剂ODQ(10μM)能够消除SNP对cGMP水平升高的促进作用。同时10μM ODQ还能够逆转SNP对卵母细胞自发成熟的抑制作用,而PKG抑制剂KT5823(1μM)却不能够逆转SNP对COCs自发成熟的抑制作用。以上结果说明NO是通过激活sGC,提高细胞内cGMP水平来发挥其作用的,但cGMP下游的PKG信号通路并不参与NO调控的COCs自发成熟过程。
Z0206细菌富硒多糖对小鼠的免疫调节作用研究
THE EFFECT OF ENRICHED-SELENIUM POLYSACCHARIDE Z0206 ON THE IMMUNOLOREGULATION IN MICE
羊雪芹,靳明亮,单体中,汪以真
2009, 17(5): 815-819  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF   (0 KB)  ( 204 )
摘要
本试验通过建立环磷酰胺(CP)诱导的免疫抑制小鼠模型,研究了Z0206细菌富硒多糖的免疫调节功能。试验分为四个处理:Ⅰ组为对照组;Ⅱ组为CP组;Ⅲ组为细菌富硒多糖组;Ⅳ组为细菌富硒多糖预防组。结果表明,与对照组相比,细菌富硒多糖组小鼠免疫器官指数、NK细胞活性、血液溶血素水平(HC50)和脾细胞抗体形成数(PFC)均显著提高(p<0.05),T细胞亚群增殖有所提高,但差异不显著(p>0.05)。与CP组相比,细菌富硒多糖预防组能使CP诱导的免疫抑制得到修复,改善试验小鼠免疫器官指数、T淋巴细胞和自然杀伤细胞(NK)活性、血液溶血素水平和脾细胞抗体形成数,差异显著(p<0.05)。提示:细菌富硒多糖能增强小鼠的免疫功能,对CP诱导的免疫抑制具有修复作用。
反义乙烯受体FaEtr1和FaErs1基因对草莓的转化
Transformation of Antisense Ethylene Receptor FaEtr1 and FaErs1 Gene in Strawberry
朱海生1,温庆放2,潘东明2,林义章2
2009, 17(5): 825-829  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (664 KB)  ( 227 )
摘要
通过根癌农杆菌EHA105将含有反义FaEtr1和FaErs1基因的双价植物表达载体pFRS导入草莓,经卡那霉素选择压下连续分化选择、扩繁和生根培养并经PCR和Southern blot检测证明,其中15株的基因组已成功导入和整合反义FaEtr1和FaErs1基因。Northern分析表明,转入的反义基因对靶基因都有部分的抑制。
冷诱导基因CBF-4转化辣椒与转基因植株抗寒性分析
Transformation of CBF4 Gene and Analysis of Coldhardness-related Indexes in Transgeniclines of Pepper
王兴娥,巩振辉*
2009, 17(5): 830-835  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (662 KB)  ( 310 )
摘要
以4个辣椒(Capsicum annuum L. )品种为试材,利用根癌农杆菌介导的带柄子叶转化法将拟南芥CBF-4基因转入辣椒,通过调整预培养、共培养以及延迟培养时间等因素,优化并完善了甜椒品种B12的遗传转化体系,并对获得的60株卡那霉素抗性再生植株进行PCR和RT-PCR检测表明,46株为阳性转基因植株,转化率高达76.67%。经过低温处理后,对阳性植株的抗寒性生理、形态指标分析发现,转基因植株的SOD、POD和MDA活性都明显高于未转基因植株,转基因植株比未转基因植株的株型紧凑,叶片肥厚、平直,叶色浓绿,叶面积大。
甘蔗Lea基因cDNA全长克隆及表达特性
Molecular cloning of sugarcane Lea gene and its expression character
阙友雄 1,刘金仙2,吴嘉云2,许莉萍2,陈如凯2
2009, 17(5): 836-842  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (758 KB)  ( 180 )
摘要
本研究从甘蔗叶片全长cDNA文库中获得了甘蔗Lea基因cDNA全长序列,命名为Sc-Lea。该基因全长921 bp, 含有一个495 bp编码164个氨基酸的的开放阅读框(open reading frame, ORF), 5’端非编码区(untranslated region,UTR)长64 bp,3’端UTR长362 bp,且在3’端UTR有明显的polyA结构, 起始密码子周围为CCCCAGCCATGGC, -3、+4位为G,C是该段序列的偏好碱基,符合Kozak规则。目的基因原核表达产物分子量大小约为17.9kD。同时还利用定量PCR技术研究了该基因在水杨酸(SA)、H2O2 PEG和NaCl等四种外源非生物胁迫因子作用下的表达特性。研究结果表明,甘蔗Lea基因的表达,会受到PEG和NaCl的强烈诱导,以及H2O2的抑制,同时也会受SA的影响。推测甘蔗Lea基因在甘蔗的抗旱和抗盐机制中发挥作用。
甘蔗叶片全长cDNA文库构建及EST序列分析
Construction of full-length cDNA library from sugarcane leaves and the corresponding EST analysis
阙友雄 1,许莉萍2,刘金仙2,郭晋隆2
2009, 17(5): 843-850  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (536 KB)  ( 17932 )
摘要
为分析甘蔗叶片基因表达情况, 以甘蔗3个生长时期的功能叶片为材料, 利用Oligo-capping法构建了一个甘蔗叶片全长cDNA文库。经鉴定该文库滴度1.8×105pfu/mL, 重组率为89 %, 平均插入片段约为1kb。利用该文库获得了228条5’端有效表达序列标签(EST), 生物信息学分析表明, EST序列拼接出154个假定独立转录本(tentative unique transcript, TUT); NCBI同源比对分析表明, 其中94条EST 拼接的65个TUTs与已知功能基因具有较高的同源性, 这些EST涉及细胞生长、信号转导、蛋白质合成、转录、能量代谢、抗逆反应和能量代谢等功能。
利用等位基因特异性PCR技术检测番茄高色素基因hp1和hp2的SNP
Assaying SNP of high pigment genes hp1 and hp2 based on Allele-Specific PCR in Tomato
金凤媚
2009, 17(5): 851-857  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (670 KB)  ( 323 )
摘要
摘要:番茄高色素基因hp1和hp2突变体与野生型基因相比均发生了单碱基的点突变,常规PCR技术很难把它们区分开。本试验对碱基错配类型和位置与特异性PCR的关系进行了研究。结果表明:引入TA-TG双碱基错配的引物,退火温度在49.3+0.1℃时能把hp1基因的突变位点和野生型的对应位点区分开来。引入T-C碱基错配的引物,退火温度在53.5+0.1℃时能把hp2基因的突变位点和野生型的对应位点区分开来。错配碱基在引物3′端的位置对PCR的特异性影响不大。
SSR和SRAP标记研究油菜杂交种骨干亲本的遗传多样性
Genetic diversity of parental lines of Rapeseed hybrids Based on SSR and SRAP Markers
胡琼,谭祖猛,李云昌,梅德圣,徐育松,李英德
2009, 17(5): 882-890  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (805 KB)  ( 240 )
摘要
用SSR和SRAP两种分子标记方法研究51份甘蓝型油菜杂交种亲本系的遗传多样性,并对两种分子标记研究结果进行比较。结果发现,在51份材料中,45对SSR引物共扩增出194条多态性条带,平均每对引物为4.3条,25对SRAP引物共扩增出197条多态性条带,平均每对引物为7.9条。UPGMA聚类分析表明,SSR和SRAP标记都可将51份亲本材料划分为五大类群,本所选育的玻里马细胞质雄性不育系(Polima CMS)的主要保持系和恢复系都聚在同一类群的不同亚群中。根据系谱资料分析发现,SRAP标记划分的类群与系谱资料更为接近,SRAP标记更适用于遗传关系较近材料的遗传多样性分析。SRAP标记揭示的亲本间遗传距离要大于SSR标记揭示的遗传距离。两种不同标记方法揭示出油菜亲本遗传多样性的差异主要是由不同的标记方法揭示的标记位点等位基因变异数不同造成的。
青藏高原野生老芒麦种质醇溶蛋白遗传多样性分析
Genetic Diversity of Gliadin in Native Elymus sibiricus L. from Qinghai-Tibetan Plateau in China
鄢家俊1,白史且1,张新全2,张昌兵1,游明鸿1
2009, 17(5): 891-901  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (1091 KB)  ( 216 )
摘要
采用酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE) 对采集自青藏高原的54份野生老芒麦(Elymus sibiricus L.)种质进行遗传多样性分析,获得下述结果:(1)供试材料共分离出42条带纹,多态率达92.86%。4个电泳分区(α、β、γ、ω)的平均Shannon指数为0.4627,Nei-Li遗传相似系数(GS)变异范围为0.2424~0.9767,平均值为0.5822。说明供试野生老芒麦材料具有较为丰富的醇溶蛋白遗传多样性。(2)对所有材料的聚类分析和主成分分析发现,在GS值为0.562的水平上供试材料可聚成4个大类,绝大部分来自于相同或相似生态地理环境的材料聚成一类,主成分分析显示了相似的结果,即醇溶蛋白图谱类型与材料的生态地理环境具有一定的相关性。(3)基于Shannon 多样性指数估算了5个老芒麦地理类群内和类群间的遗传分化,发现类群内遗传变异占总变异的68.17%,而类群间的遗传变异占总变异的31.83 %。(4)对各地理类群基于Nei氏无偏估计的遗传一致度的聚类分析表明,各地理类群间的遗传分化与其所处的地理生态环境具有较高的相关性。
EGCG与Cd2+对前列腺癌细胞PC-3生长的抑制作用研究
Inhibitory Effects of EGCG and Cd2+ on the Growth of Prostate Cancer PC-3 Cell
孙世利1,于海宁2,凌彩金1,沈生荣3,苗爱清1,潘顺顺1,赵超艺1
2009, 17(5): 902-907  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (589 KB)  ( 715 )
摘要
采用MTT法检测了EGCG、Cd2+及二者相互作用对PC-3细胞生长的抑制作用;通过倒置显微镜观察了前列腺癌细胞PC-3形态的变化;采用细胞凋亡罗丹明123染色试剂盒检测了PC-3细胞凋亡;利用ESR法检测了PC-3细胞膜流动性的改变。结果表明,EGCG与Cd2+都可抑制前列腺癌细胞的生长;二者都可改变细胞的外观形态;80 µmol/L的EGCG处理并未观察到凋亡的PC-3细胞,20 µmol/L的Cd2+处理主要导致PC-3细胞坏死,而80 µmol/L EGCG与20 µmol/L Cd2+共存可诱导细胞凋亡;同时,EGCG参与的处理都降低了PC-3细胞膜的流动性。
新型cry7Ab基因的鉴定克隆、表达与杀虫活性
Identification,Cloning, Expression and Insecticidal Activity Analysis for Novel cry7Ab Gene*
邓淑1,束长龙2,林毅1,宋福平2
2009, 17(5): 908-913  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (693 KB)  ( 316 )
摘要
本文应用PCR-RFLP法鉴定出Bt菌株HQ40中含有cry7Ab基因,并根据cry7A全长基因序列设计特异性引物,成功克隆了该基因。该基因核苷酸序列已经在国际基因库GeneBank中登记,其登录号为EU380678,并由Bt δ-内毒素基因国际命名委员会正式命名为cry7Ab4。通过穿梭载体pSTK 将该基因导入Bt 无晶体突变株中,获得工程菌HD7Ab4。SDS-PAGE分析表明cry7Ab4 基因在其中能正常表达,并形成菱形晶体。提取工程菌HD7Ab4和野生菌HQ40晶体蛋白,并在体外用胰蛋白酶酶解活化。分别对直翅目、鳞翅目和鞘翅目的害虫进行了杀虫活性测定。生测结果表明:Cry7Ab4蛋白trypsin酶解液对鞘翅目的大猿叶甲显示了一定的杀虫活性,其野生菌蛋白及表达蛋白酶解液LC50分别为231.59µg/ml及293.79µg/ml。表达产物虽不能使鳞翅目的小菜蛾、甜菜夜蛾和亚洲玉米螟死亡,但对它们的生长发育有明显的体重抑制作用。另外对马铃薯甲虫以及榆蓝叶甲也有体重抑制作用,而对直翅目的东亚飞蝗无毒。
屎肠球菌M-2所产细菌素的分离纯化与特性研究
Purification and characterization of an antilisteria bacteriocin produced by Enterococcus faecium M-2
刘国荣,畅晓渊,吴寒宇,李平兰
2009, 17(5): 925-930  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (536 KB)  ( 427 )
摘要
本文以前期从内蒙古传统干酪中分离到的一株产细菌素的屎肠球菌M-2为试材,对其所产细菌素进行提取纯化和理化特性研究。经80%硫酸铵盐析及SP Sepharose Fast Flow阳离子交换树脂层析得到纯化的细菌素,其比活力可达411.204AU/mg;Tricine SDS-PAGE电泳结果显示其分子量约为3400Da;特性研究发现该细菌素有很好耐热、耐酸碱、抗表面活性剂及蛋白酶敏感特性,且抑菌谱较广,不仅对李斯特氏菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌等革兰氏阳性菌有较强的抑制作用,还对大肠杆菌、假单胞菌等阴性菌表现出抑菌活性,有作为天然食品防腐剂的良好应用前景。
农杆菌浸种法介导中华结缕草遗传转化体系的建立
Establishment of Genetic Transformation System on Chinese zoysia(Zoysia sinica Hance)via Agrobacterium tumefaciens Soaked Seeds
王丹1,吴燕民2,刘水3,雷江丽1
2009, 17(5): 865-871  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (684 KB)  ( 294 )
摘要
以中华结缕草萌动种子为转化受体,利用NPT-Ⅱ筛选基因对影响农杆菌介导的遗传转化外部因素进行探索,通过优化转化条件,建立了农杆菌浸种途径介导的中华结缕草遗传转化体系。结果表明:利用催芽6-7d的种子,加入OD600值为0.9的农杆菌浸染菌液(在浸染菌液中添加100μmol.L-1乙酰丁香酮),附加5min+30s真空处理,振荡浸染48h,共培养3d后,用75mg.L-1卡那霉素筛选能够获得较好的转化效果。通过对卡那霉素抗性苗进行PCR检测和GUS组织化学染色,初步验证NPT-Ⅱ和GUS基因已经整合进植物基因组,阳性转化率为55.21%。
核桃EST-SSR标记的开发
Development of EST-SSR Markers in Juglans regia
齐建勋1,王克建1,吴春林1,王维霞1,郝艳宾1,冷平2
2009, 17(5): 872-876  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (409 KB)  ( 448 )
摘要
从GenBank数据库上公布的5025条核桃(Juglans regia)EST序列中,用SSRHunter软件搜索到485条EST序列中含有540个SSR,SSR出现频率为10.75%,SSR-ESTs检出率为9.7%。利用检出的SSR-ESTs序列设计SSR引物43对,对6个核桃样品、1个黑核桃(J. nigra)样品和1个核桃楸(J. mandshurica)样品进行了PCR扩增,其中40对引物有扩增带,占设计引物的93%,35对引物有多态性,占可扩增引物的87.5%。在有多态性的35对引物中,27对引物在核桃种内有多态性;8对引物在核桃种内无多态性,而在核桃、核桃楸和黑核桃种间有多态性。应用UPGMA方法对检测样品进行聚类分析,结果与传统分类一致。
研究简报
皖西白鹅肝脏中GHR,IGF-1和 IGF-1R基因的表达及与朗德鹅的比较
Comparison of GHR, IGF-1 and IGF-1R expression in Liver of Wanxi White Geese and Landaise Geese
郑智勇1,周杰2,朱枫桥3,李舜3,陆春瑞3
2009, 17(5): 937-938  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (291 KB)  ( 404 )
摘要
选择90日龄的皖西白鹅和朗德鹅各20只,取肝脏组织。采用半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)的方法,以β-actin为内标,对肝脏组织中生长激素受体(GHR)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子-1型受体(IGF-1R)的mRNA表达量分别进行比较分析,并分别与鹅的肝脏重及肝重率进行相关性分析。结果表明:皖西白鹅的肝脏重和肝重率都显著大于朗德鹅(p<0.05);皖西白鹅肝脏中IGF-1的mRNA表达明显高于朗德鹅(p<0.01);而GHR、IGF-1R mRNA在两品种间没有显著差异。体重与肝脏重显著正相关(r = 0.35,p<0.05),肝重率与肝脏中IGF-1的mRNA的表达显著正相关(r = 0.67,p<0.01),而与GHR、IGF-1R mRNA没有显著的相关性。结果提示:(1)90日龄的皖西白鹅肝脏生长优于朗德鹅;(2)两品种鹅肝脏生长的差异可能与肝脏中IGF-1 mRNA表达的差异有关。
雁鹅ISSR-PCR反应体系的优化*
Optimization of ISSR-PCR Reaction System in Yane geese
李莹1,梁强2,赵华宝2,王希春1,陈亮1,钱世荣2,骆国胜2,章孝荣1,吴金节1
2009, 17(5): 0-  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (347 KB)  ( 216 )
摘要
本试验以雁鹅基因组DNA为模板,采用正交试验设计L25(55)对PCR反应中5个因素(引物、dNTPs浓度、模板DNA、Mg2+、TapDNA聚合酶)在5个水平上进行优化实验,在初步实验的基础上通过因素内比较进一步优化各因素在ISSR-PCR反应中的浓度,快速准确地建立雁鹅ISSR-PCR的最佳反应体系,为进一步进行雁鹅遗传多样性的研究、遗传图谱构建和基因定位奠定技术基础。在25uL的反应体系中,确定雁鹅ISSR-PCR的最佳反应体系为:ISSR引物的浓度为0.20umol/L,dNTPs浓度为0.28mmol/L,模板DNA的用量为40ng,Mg2+浓度为1.5 mmol/L,Taq DNA聚合酶的用量为1.0U。在正交试验设计的基础上,通过因素内比较进一步优化各因素在ISSR-PCR反应中的浓度,可以更加准确地确立ISSR-PCR的最佳反应体系。
马铃薯花青素转录激活基因stmyc的克隆与表达分析
Cloning and Expression Analysis of the Anthocyanin Transcriptional Activator Gene stmyc of Solanum tuberosum (potato)
黄艳岚1,刘仕芸2,张树珍2
2009, 17(5): 0-  |  Full text (HTML) (1 KB)  |   PDF  (322 KB)  ( 227 )
摘要
根据GenBank 核酸数据库中报道的紫苏myc mRNA基因保守序列设计引物,用RT-PCR方法从紫色马铃薯紫皮RNA中获得花青素转录激活类基因stmyc的5’端保守区域, 通过3’-RACE获得长为600bp左右的序列。测序结果表明:基因全长1106bp,含有完整的阅读框,编码326个氨基酸,命名为stmyc,其编码的蛋白与紫苏myc基因编码蛋白的同源性02为46.98%,并具有典型的bHLH结构域。RT-PCR表达分析结果显示stmyc基因在紫色马铃薯皮、肉、茎、叶、根中都有表达,其中在紫茎中的表达量最高,紫皮中表达量最低;且该基因在白色马铃薯的皮、叶和肉中都有表达,推测该基因在马铃薯中为组成型表达。
 
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