根据Genbank中挪威鼠（Rattus norvegicus）Hspa4基因序列(登录号：NM 153629)和玉米Ubi-1启动子序列(登录号：DQ141598 )设计引物，采用RT-PCR和PCR技术分别进行克隆。测序及同源性分析结果表明：Hspa4基因片段含有2530bp，编码840个氨基酸；获得的启动子Ubi-1序列大小为1992bp；克隆的序列与相应原序列同源性分别为99.96％和99.55%。以植物表达载体pCAMBIA1301质粒为基础，成功构建了植物表达载体pCAMBIA1301-Ubi-Hspa4，为利用Hspa4基因改良植物抗逆性打下了基础。

摘要：采用mRNA差异显示技术，以菜粉蝶提取物作为诱导剂，研究黄瓜幼苗抗炭疽病相关基因的差异表达，共得到67条差异表达基因片段。选其中5条被诱导表达的差异片段(D1、D2、D3、D4、D5)进行克隆、测序。生物信息学分析表明：D1片段序列(344bp)与来自叶绿体psbB基因编码的47kD蛋白结合叶绿素a构成的蛋白复合物photosystemIICP47同源性高达95.0%，其可能具有类似CP47的反复折叠的跨膜蛋白，在系统获得抗性信号途径中介导细胞壁和细胞质之间的信号传导；其余片段与已登记的基因同源性较低。

马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯X病毒（PVX）是侵染马铃薯的两种主要病毒，这两种病毒一般都是同时侵染马铃薯，导致减产60-80%以上。本文应用多重PCR技术建立了同时检测这两种病毒的复合RT-PCR技术体系。结果发现：当以Oligod(T)18引物反转录合成的cDNA经PCR扩增后，未扩出PVX带，究其原因是由于cDNA的特异性低造成的。为了提高cDNA的特异性，在反转录时加入PVX、PVY的3'端引物，合成的cDNA经PCR扩增后出现了两条特异性带，这两条带恰与PVX、PVY带位置相当。这说明在本实验的复合RT-PCR中，应用3'端引物进行反转录，可同时检测出PVX与PVY两种病毒。

摘要:抗病毒蛋白(统称PAPs)存在于美洲商陆的植物体内。研究美洲商陆营养器官的结构与蛋白质的关系有重要意义。利用解剖学和组织化学定位方法对不同生长龄美洲商陆营养器官解剖结构和蛋白质的储藏场所进行了研究，结果表明：不同生长龄的营养器官中除幼根外均有蛋白质分布。蛋白质分布的场所是薄壁细胞。幼茎中蛋白质含量最为丰富，颗粒也较大，与老叶、幼叶、老茎和老根中的蛋白质比较，数量及大小差异极显著。

用PCR方法从苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica nucleopolyhedrovirus，AcMNPV）基因组中扩增到orf59基因，插入原核表达载体pET-32a(+)，构建pET-Ac59质粒，再将该质粒转化大肠杆菌BL21，在IPTG诱导下表达了分子量约为30kDa的融合蛋白。用纯化的表达产物免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体，应用该抗体检测了AcMNPV感染的昆虫宿主细胞（Sf9）中orf59基因的表达，结果显示：在感染后的细胞中有两条分子量分别约为38kDa和25kDa蛋白质带能与所制备的抗体发生特异性反应。间接免疫荧光分析发现：在病毒感染的晚期，Ac59蛋白同时存在于所感染宿主的细胞核和细胞质中。这些研究为下一步深入进行Ac59功能的研究奠定了一定的基础。

目的 克隆牛杀菌/通透性增强蛋白(BPI)N端cDNA，构建原核表达载体，在大肠杆菌中表达BPI蛋白，并纯化重组蛋白。方法 参照Genbank报道的序列，应用RT-PCR技术，从牛嗜中性粒细胞mRNA中扩增出杀菌/通透性增加蛋白基因，然后将该基因插入原核表达载体pGEX-4T-1中，重组质粒转化大肠杆菌BL21，进行诱导表达。结果 获得BPI N端长度为714 bp的基因片断，序列分析证实该片断中有1个点突变。大肠杆菌中的表达产物为相对分子质量约为52×103的GST-BPI融合蛋白。结论 成功的表达和纯化了BPI重组蛋白。

研究κ-酪蛋白基因单核苷酸多态性及其组合与中国荷斯坦牛泌乳性状的关联性，为进一步加快高乳蛋白及高乳脂率奶牛育种进程提供参考依据。采用PCR-RFLP、CRS-PCR和DNA测序技术，对435头中国荷斯坦牛的κ-酪蛋白基因的外显子4和5上两个SNP位点进行了研究，计算其基因频率和基因型频率，确定其基因型组合，并对其基因型和基因型组合与泌乳性状进行了关联分析。结果发现，在435头试验牛群中，共有8种基因型组合。单个SNP位点关联分析表明：T10996A突变位点3种基因型间TA基因型个体乳脂率极显著高于AA基因型个体(P＜0.01), TA基因型个体乳蛋白率显著高于AA基因型个体(P＜0.05)。T12980C突变位点的3种基因型间TC基因型个体乳脂率极显著高于TT基因型个体(P＜0.01)，TC和CC基因型个体乳蛋白率显著高于TT基因型个体(P＜0.05)。T10996A/T12980C两种基因型组合分析中，在乳脂率上，TTCC基因型组合个体最高,TATC基因型组合个体位居第三位；在乳蛋白率上，TATC基因型组合个体显著高于AATT基因型组合个体(P＜0.05)。【结论】κ-酪蛋白基因不同基因型和基因型组合与中国荷斯坦牛乳脂率和乳蛋白率存在相关性,但与产奶量和脂蛋白比不相关。

采用PCR-RFLP技术用限制性内切酶BstYⅠ对河北省489头荷斯坦母牛和40头荷斯坦公牛BoLA-DRB3基因外显子2的284 bp扩增产物进行多态性分析。荷斯坦母牛经BstYⅠ酶切产生3种基因型AA、AB和BB，其频率分别为0.078、0.380和0.542；荷斯坦公牛经BstYⅠ酶切产生2种基因型AB和BB，其频率分别为0.250和0.750；荷斯坦母牛和公牛在该酶切位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态（母牛：χ2=0.45，P=0.799>0.05；公牛：χ2=0.82，P=0.665>0.05）；用最小二乘法分析BoLA-DRB3基因外显子2与荷斯坦母牛体细胞评分(somatic cell score，SCS)的关系，结果表明AA基因型SCS最小二乘均值极显著低于AB基因型所对应的值（P=0.0098<0.01），极显著低于BB基因型所对应的值（P=0.00009<0.0001）；AB基因型SCS最小二乘均值极显著低于BB基因型所对应的值（P=0.0096<0.01）；对乳房炎抗性而言，AA是最有利基因型，BB是最不利基因型。本研究结果可为奶牛乳房炎抗性标记辅助选择提供科学依据。

本研究采用巢氏PCR、DNA测序和CRS-PCR方法，研究中国荷斯坦牛、鲁西黄牛、渤海黑牛的CXCR1基因编码区的单核苷酸多态性（SNPs），发现了819（G/A）、995（G/A）和1008（C/T）3个SNPs，其中995（G/A）和1008（C/T）为首次报道的两个位点，995（G/A）导致氨基酸的改变Arg422His。CXCR1基因819（A/G）、995（A/G）、1008（C/T）3个位点在中国荷斯坦牛、鲁西黄牛、渤海黑牛群体的优势等位基因相同，分别为G、G、C，其等位基因频率分别为0.63/0.73/0.71、0.60/0.85/0.71、0.74/0.76/0.71。经χ2适合性检验，鲁西黄牛在995（A/G）和1008（C/T）位点达到Hardy-Weinberg平衡状态（P>0.05）；渤海黑牛的所有位点均达到Hardy-Weinberg平衡状态，荷斯坦牛在3个位点均未达到Hardy-Weinberg平衡状态（P<0.05）。3个品种牛在819（A/G）和1008（C/T）位点均表现为中度多态（0.25

从天祝白牦牛的基因组DNA中扩增了SRY（Sex-determining Region on the Y Chromosome，SRY）基因编码区序列，将其克隆至pGEM-T easy载体并送至生物公司测序，天祝白牦牛SRY基因编码区长687 bp，编码229个氨基酸；对牦牛和奶牛的SRY基因编码区进行序列比对，发现存在2个碱基的变异，造成1个氨基酸的变异；将牦牛SRY基因编码区连接至pET-28a(+)载体，成功构建了表达载体pET-28a/SRY；把表达载体pET-28a/SRY转入大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中，在合适的条件下诱导该大肠杆菌，SRY蛋白得到了大量表达；对表达产物进行了Western-blot检测，进一步确定牦牛SRY蛋白得到表达。

在成功地构建NDV-F基因真核表达载体pCDNA3-NDV-F的基础上，应用脂质体LipofectamineTM2000介导使其转染小鼠肥大细胞瘤细胞株（P815），以G418加压筛选（600μg/ ml）得到稳定的克隆并扩大培养成系。应用Trizol法提取细胞RNA，经RT-PCR鉴定，转染细胞在1600bp处出现目的条带。收集转染细胞，经Western blot和免疫荧光法检测到目的蛋白的表达。进一步将获得的细胞株在液氮中冻存6个月以检测其稳定性，实验证明该细胞株仍能很好的表达F基因。本实验采用脂质体法已成功建立了能够稳定表达NDV-F基因细胞株，为进一步研究ND核酸疫苗的效果奠定良好的实验基础。

摘要 以MC3T3-E1细胞系为实验材料，体外转染pEFNeu-HA-CHIP质粒，Western blot检测CHIP蛋白表达，建成了稳定过表达CHIP 蛋白的MC3T3-E1/HA-CHIP细胞系。然后用含10mM/ml甘油磷酸钠和50ug/ml抗坏血酸的α-MEM条件培养基诱导MC3T3-E1和MC3T3-E1/HA-CHIP细胞系向成骨细胞定向分化，结果表明诱导期MC3T3-E1/HA-CHIP细胞系中的ALP活性比MC3T3-E1细胞中的ALP活性低，ALP染色实验同时证实了这个结果；诱导培养18天以后，Von Kossa染色和茜素红染色结果表明MC3T3-E1/HA-CHIP细胞系中生成的磷酸钙比MC3T3-E1细胞系中生成的磷酸钙少。以上结果表明过表达CHIP蛋白抑制MC3T3-E1细胞的分化和矿化。

为了研究胰岛素和葡萄糖对鹅肝细胞内脂肪酸生成的协同作用，我们通过培养四川白鹅和朗德鹅原代肝细胞测定葡萄糖和胰岛素对其TG含量，FAS活性及基因表达的影响。结果：葡萄糖单独能诱导两种鹅原代肝细胞的TG积聚、FAS活性和基因表达，但与胰岛素两者共同作用诱导效果更加明显。另外，胰岛素和葡萄糖对肝细胞中TG积聚、FAS活性和基因表达的影响存在品种差异。结论：葡萄糖单独能诱导生脂基因FAS的mRNA表达和增强其酶活性，最终导致肝细胞中TG含量增加；胰岛素和葡萄糖共培养时其诱导效果更为显著。同时，胰岛素和葡萄糖对脂肪生成的协同效应存在品种差异。

细鳞鱼是我国一种珍贵的淡水经济鱼类，在人类和环境因素的影响下数量急剧下降。本文采用扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism, AFLP）技术对牡丹江（Mudanjiang River, MD）、鸭绿江（Yalujiang River, YL）和乌苏里江（Wusuli River, WSL）的三个细鳞鱼野生种群共72个个体进行了遗传多样性分析。结果显示，12对选择性扩增引物共扩增得到559个位点，其中多态性位点541个，多态性百分比为96.78％。文中对3个群体的Shannon多样性指数，Nei氏基因多样性等参数进行了分析。其总基因多样性Ht平均值为0.3512±0.0208；种群内基因多样性Hs平均值为0.2137±0.0152；群体间的基因多样性Dst为0.1375。基因分化系数Gst为0.3914，种群内的基因多样性占总群体的60.85%，种群间为39.15%，而基因流系数Nm 为0.7776。分子方差分析（AMOVA）表明：群体平均遗传分化系数Fst为0.55336，变异来源有44.84%来自群体间，55.16%来自群体内。三个群体中牡丹江群体的细鳞鱼种内多态性比例最高，而乌苏里江群体最低。

根据GenBank中猪2型圆环病毒的核苷酸序列，设计两对引物，对来源于河南省不同地市的4株PCV2细胞培养物进行鉴定，并扩增出ORF2基因，克隆到pMD18－T载体上，获得重组质粒pMD18-T-ORF2，并对其进行测序，结果表明所克隆的ORF2基因与其它PCV2 ORF2基因核苷酸同源性在92.4%～99.6%之间，氨基酸同源性在90.6％～97.9％之间。同时采用PCR从重组质粒pMD18-T-ORF2中扩增出587bp的ORF2基因，克隆到表达载体pET-32a，成功构建了重组质粒pET-32a-ORF2，经诱导表达了ORF2基因编码的结构蛋白，表达的重组蛋白为融合蛋白，分子量为40kD，经Western-Blot检测，重组蛋白可被PCV2阳性血清识别。

对氧磷酶是一种与高密度脂肪酸高度相关的脂酶，且被认为在脂肪代谢和心血管病发生方面起着关键的作用。本研究旨在对对氧磷酶１基因的酶切多态性与牛的生长和胴体性状进行关联分析。基于这一目标，应用RFLP技术对18头安格斯，23头晋南牛，20头利木赞，28头鲁西牛，26头秦川牛，29头西门塔尔牛和29头夏洛莱牛进行了基因型分型，SAS 9.1的GLM过程中的Duncan’s 检验对不同基因型之间进行了多重比较分析，结果表明，EcoRⅤ位点与体重、日增重、眼肌面积和嫩度之间存在显著生物学相关，并且AG基因型个体与其它基因型相比在日增重和嫩度上存在显著差异（p< 0.05），而AA基因型个体相对于其它基因型具有较大的眼肌面积（p< 0.05）。而AluⅠ位点则与体重、净肉重和嫩度之间具有显著的生物学意义（p< 0.05）.且AA型个体相对来说均优于其它基因型个体（p< 0.05）。品种间的比较表明，除实验牛始重相对趋于一致外，国外肉牛专门化品种在其它方面均优于国内品种。因此，本实验所研究的两个位点可作为牛肉多汁性（嫩度）的标记，为肉牛的选种提供生物学基础。

采用PCR-SSCP方法检测白耳鸡ADSL基因外显子2和GARS-AIRS-GART基因5’侧翼区多态性，分析多态位点不同基因型及聚合基因型与90日龄胸肌肌苷酸（IMP）含量的关联，并比较分析了不同聚合基因型个体的生产性能。结果表明：ADSL基因外显2和GARS-AIRS-GART基因5，侧翼区的多态位点C3484T、C-179T与IMP含量显著相关（P<0.05），TT为两种有利单基因型，其对IMP含量的加性效应分别为0.1710 mg/g和0.128 mg/g，显性效应分别为-0.025 mg/g和0.031 mg/g 。两种有利单基因型聚合个体TTTT的IMP含量显著高于其他基因型聚合个体（除TTCC型），且在聚合基因型中两种有利单基因型TT对IMP含量的影响均达到显著水平（P<0.05），但两者间的互作效应并不显著（P>0.05）。TTTT聚合基因型个体的90日龄平均体重、72周龄产蛋性能仍保持相对稳定。