农业生物技术学报

Pathogenic Studies on the Diseases of Avian Embryo in AA Broiler Breeder and the Detection of Its Main Pathogens by PCR

刘红芹;朱瑞良;孙秋艳;胡晓娜;毕建敏;刘红珍;李新苍;王伟

2006, 14(5): 646-651 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

2004年6月份以来，山东某一大型AA父母代肉种鸡场孵化场出现胚胎死亡、弱雏增多、孵出的雏鸡30日龄左右免疫应答不良、生长缓慢等症状。为了探明其病因，作者通过流行病学调查和病原学检查，结果表明造成该病的主要原因是由禽波氏杆菌(Bordetella avium)、沙门氏菌(Salmonella)、大肠杆菌(Escherichia coli)、支原体(滑液囊和鸡败血支原体)及鸡传染性贫血病病毒（CIAV）和病毒性关节炎病毒（VAV）共感染种鸡后，由种蛋垂直传播到鸡胚、雏鸡造成的。同时对其主要病原禽波氏杆菌进行了16S rRNA基因的扩增，结果扩增出783 bp的目的条带; 通过PCR对CIAV VP3基因及VAV S1基因进行扩增，结果分别扩增出582和532 bp的目的条带，其PCR产物均分别能与相应的探针杂交，呈现阳性反应。

猪UCP3基因多态性及其与脂肪沉积、肉质性状的相关分析

Polymorphism of Porcine Uncoupling Protein 3 (UCP3) and Its Association
with Fat Deposition and Meat Quality

任亮;朱宝芹;韩丹;张轶博;宋惠娟;曾瑞霞;苏玉虹

2006, 14(5): 652-656 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

在QTL定位的基础上选取猪解偶联蛋白3(UCP3)作为控制脂肪沉积性状和肉质性状的候选基因。对猪UCP3基因的部分编码区进行了测序，在395 bp处发现了1个cSNP位点。该cSNP位点发生G→A突变，并导致相应编码氨基酸由甘氨酸→精氨酸的改变。该位点可以被限制性内切酶SmaⅠ识别。利用PCR-RFLP方法，对186头大白×梅山F2资源家系进行UCP3片段SmaⅠ位点分析，发现AA、AB和BB三种基因型，其中A等位基因频率0.56，B 0.44。经统计分析发现，在该F2群体中，UCP3 SmaⅠ位点多态性与脂肪沉积性状中胸腰椎间膘厚、臀部膘厚显著相关；与肉质性状中的肌内脂肪、系水力和失水率显著相关。UCP3 SmaⅠ位点主要表现为加性效应，基因型AA降低膘厚，提高系水力和降低失水率，但同时也降低肌内脂肪含量。

实时荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌方法的建立

Establishment of Real-time Fluorescence PCR to Detect Streptococcus suis Serotype 2

罗宝正;薄清如;陈竞帆;徐海聂;杨素;杨建允;沙才华;廖秀云

2006, 14(5): 783-787 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

建立了一种检测Ⅱ型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2)的实时荧光PCR(real-time fluorescence polymerase chain reaction)方法。用Primer Express2.0和Oligo6.0设计针对Ⅱ型猪链球菌荚膜抗原基因簇中cps2I基因的引物和Taqman荧光探针。通过常规PCR方法扩增得到81 bp DNA片段，克隆到pMD18-T载体，测序表明得到的序列为目的基因片段。在Lightcycler荧光PCR仪上对Ⅱ型猪链球菌的扩增曲线表明，该实时荧光PCR具有良好的特异性，可成功地扩增Ⅱ型猪链球菌，而参考猪链球菌(S.suis)、大肠杆菌(Escherichia coli )、沙门氏菌(Salmonella)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureu)、志贺氏菌(Shigella)、单增李斯特氏菌(Listeria monocytoge)和空白对照都是阴性；该检测方法可达到检测10个细菌的灵敏度，反应过程仅需30 min完成；在两个不同时间检测同一浓度的菌液，每次做20个重复，2次检测所得的Ct (threshold，阈循环)值之间无统计学差异(P > 0.05)，方法稳定性好。该实时荧光PCR检测Ⅱ型猪链球菌的方法可用于出入境检疫和动物防疫监督部门的疫情监测。

鹅细小病毒vp1基因片段的原核表达及抗血清的制备

Expression of vp1 Gene Fragment of Goose parvovirus in Escherichia coli and Preparation of Its Antiserum

王静;王懂帅;韩宗玺;卲昱昊;冉多良;刘胜旺;孔宪刚

2006, 14(5): 788-792 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用PCR技术扩增了鹅细小病毒(Goose parvovirus , GPV)HG5/82株vp1基因5'端长662 bp的基因片段，将其克隆到pMD18-T Simple载体后，转化入大肠杆菌(Escherichia coli) DH5α细胞。筛选阳性质粒，并通过BamHⅠ和Hind Ⅲ将外源基因定向克隆到原核表达载体pPROEXTMHTb，所得的阳性重组质粒经序列测定，证明外源片段正确插入到pPROEXTMHTb的预期位置。将转入外源基因的工程菌经0.6 mmol/L IPTG诱导，SDS-PAGE电泳表明，外源基因表达，融合蛋白分子量约为32 kD。通过薄层扫描分析显示，融合蛋白表达量占工程菌菌体总蛋白的22.8%。经诱导后的工程菌用6 mol/L盐酸胍裂解，再经超声处理后离心，用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化。纯化所得的融合蛋白免疫白兔，制备了兔抗鹅细小病毒结构蛋白的抗血清。Western blot结果表明，抗血清与表达的融合蛋白及亲本病毒的VP1和VP2都具有反应性。

表达外源绿荧光蛋白重组山羊痘病毒的构建及纯化

Construction and Purification of Recombinant Goatpox virus
Expressing Exotic Green Fluorescence Protein

程小文;胡森;王喜军;鲍恩东;步志高

2006, 14(5): 798-802 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

以我国自行培养并得到广泛应用的山羊痘病毒 (Goatpox virus，GPV) 疫苗株为亲本，以复制非必需胸苷激酶 (tk) 基因作为外源基因插入靶点及同源重组臂。利用转移载体pTK-lacZ-gfp及其与GPV发生同源重组获得的病毒(rGPV-lacZ-gfp) 验证外源基因β-半乳糖苷酶 (lacZ) 和绿荧光蛋白 (gfp) 基因在背靠背启动子p11和p7.5启动下成功稳定表达后，将转移载体lacZ基因更换为gpt (黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶) 基因 (pTK-gpt-gfp)，利用MPA阻断核酸代谢途径筛选并获得了遗传稳定表达的单一纯化病毒克隆 (rGPV-gpt-gfp)。研究建立了表达外源基因重组GPV构建系统及其克隆纯化方法，为进一步开展GPV活载体疫苗研制及相关基础研究提供了技术平台。

三重巢式PCR技术检测抗草甘膦转基因大豆深加工产品

Detection of Roundup Ready Soybean in Highly Processed Products by Triplex Nested PCR

张明辉;高学军; 于艳波;秦君;李庆章

2006, 14(5): 752-756 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

实验以7种具有代表性的含有大豆成分的深加工产品(卵磷脂、大豆蛋白质粉、巧克力饮品、婴儿米粉、大豆粗油、大豆精炼油和大豆色拉油)作为样品进行定性检测，第一轮三重PCR均未能扩增出任何大豆成分，其灵敏度为0.5％。第二轮三重PCR可以扩增出除大豆精炼油和色拉油以外的所有深加工产品的内源基因Lectin、35S-CTP和EPSPS-NOS基因，其检测灵敏度达到0.005％，结果提示三重巢式PCR检测方法适用于大豆深加工产品的定性检测。

近年来大肠杆菌K88ac菌毛的变异和生物学特性

Variations and Biological Characterization of K88ac Fimbria of Escherichia coli of Late Years

陈祥;苗晓青;刘静;黄莉莉;高崧;焦新安;刘秀梵

2006, 14(5): 757-762 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

2000~2005年，从猪大肠杆菌病 (colibacillosis)中分离到一些表达K88菌毛的大肠杆菌(Escherichia coli )，这些分离株只与K88 a因子单抗反应，而不与K88 b、c和d因子单抗反应。分离的菌株 (13/16)以O149为常见血清型，且全部拥有STb毒素基因，通过K88常规血清交叉吸收试验、SDS-PAGE和Western印迹，表明这些菌株不仅与K88ac参考菌株C83907制备的c因子血清反应，而且与以分离株SEC586制备且经K88ab、K88ac和K88ad参考菌株吸收后的血清也反应，表明这些分离株仍为K88ac大肠杆菌。对新近分离的SEC464、SEC525、SEC586、SEC799和EC910株及80年代我国分离的TM128株的K88主要亚单位结构基因faeG进行克隆、测序，发现新近分离株的faeG基因由846对核苷酸组成，编码菌毛主要亚单位的261个氨基酸及21个氨基酸的信号肽，比国内外报道的K88ac FaeG亚单位 (262个氨基酸)少了一个氨基酸，比K88ab、K88ad (264个氨基酸)少了3个氨基酸。TM128株的FaeG氨基酸序列与K88ac(M29375)的同源性为100.0%，SEC464、SEC525、SEC586、SEC799和SEC910株的FaeG亚单位氨基酸序列的同源性为97.7%~99.6%，它们与K88ac的同源性为94.6%~96.6%；与K88ab的同源性为90.0%~91.6%；与K88ad的同源性为87.0%~88.9%。结果表明新分离的K88ac大肠杆菌黏附素主要亚单位已发生了部分变异。

Erwinia chrysanthemi 分离株CSCL006 hrpN 基因的克隆与高效表达

Molecular Characterization and Overexpression of Erwinia chrysanthemi Strain CSCL006 hrpNCSCL006 Gene, which Encodes An Elicitor of the Hyperdensitive Reaction

汤承;崔亚亚;吴伯骥;李名扬

2006, 14(5): 763-767 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

通过构建Erwinia chrysanthemi分离株 CSCL006的DNA文库，克隆出hrpN CSCL006基因，测序结果显示该基因编码区长1 020 bp; 推导的harpinCSCL006与Erwinia chrysanthemi EC16和3937编码的harpin蛋白同源性高，但与其它软腐菌的harpin蛋白同源性较低; 在大肠杆菌中(Escherichia coli) 高效表达了hrpN CSCL006基因，重组harpinCSCL006蛋白分子量为34 kD。以抗harpinEcc 的抗体为探针,Western blot 证实该蛋白确为harpin; 纯化的harpinCSCL006, 能引起烟叶的过敏反应。

东乡野生稻原位圃遗传多样性的微卫星标记分析

Genetic Diversity of In situ Conserved Dongxiang Wild Rice Detected by SSR

孔德利;谢建坤;庄杰云;樊叶杨;万勇

2006, 14(5): 742-746 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

遗传多样性的分析是收集与利用种质资源的重要前提。利用微卫星标记对113份东乡野生稻(Oryza rufipogon Griff.)(简称"东野")进行多样性分析，24对SSR引物共得到114个等位基因，平均每对引物得到4.75个，表明东野具有丰富的遗传多样性。聚类分析表明，东野群体内来自同一居群的部分材料遗传距离较近，3个居群中有2个居群最小遗传距离为0，1个居群最小遗传距离为0.018，但也有些材料间的遗传距离很大，最大达0.851。东野3个居群居群内的平均遗传距离为0.171~0.435，居群间的平均遗传距离为0.432~0.652，表明东野群体内的遗传变异以居群间为主，因此必须对东野原生地的现有居群实行有力的保护。

猪心型脂肪酸结合蛋白基因的克隆及不同生长阶段表达的差异

Cloning of Heart-type Fatty Acid-binding Protein (H-FABP ) Gene of Swine and
Difference of Its Expression at Different Stages

黄玉海;汪以真;单体中;刘建新;冯杰

2006, 14(5): 657-661 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

从1, 30, 50, 70和90 kg左右的杜长大猪肌肉组织中提取基因组RNA，用RT-PCR扩增猪心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP）基因，获得1条211 bp的片段，以pGEM-T 为载体，将该基因片段克隆到大肠杆菌(Escherichia coli ) DH5α中。从筛选到的阳性克隆中分离出脂肪酸结合蛋白基因，测定其序列。分析表明,该片段为脂肪酸结合蛋白基因cDNA的部分序列，与已报道的猪肌肉组织中的H-FABP cDNA部分序列同源性达到99%。以H-FABP基因片段的克隆为基础，构建了优化的半定量RT-PCR法，以18S rRNA为内标，研究不同生长阶段猪肌肉组织中H-FABP基因表达的差异。结果表明，从出生到50 kg，猪H-FABP基因表达呈下降趋势；50～90 kg阶段, H-FABP基因的表达又有所上升。

鸡MHC I α-生物素化序列融合基因的构建、表达及纯化

Cloning, Expression and Purification of Chicken MHC I α-BirA Substrate Peptide (BSP) Sequence in Escherichia coli

刘光亮;童铁钢;王群;肖一红;孟庆文;吴东来

2006, 14(5): 662-668 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

实验克隆了莱航鸡(Gallus gallus )MHC I α (BF2)(GenBank登陆号：AY989897)全基因，分析了其信号肽序列，构建了缺失信号肽且拼接了BirA底物肽序列(BSP)的融合蛋白重组表达载体pET-BF2-BSP，在大肠杆菌(Escherichia coli )中得到表达，并优化了诱导剂浓度、起始诱导菌体浓度及诱导时间等表达条件。SDS-PAGE分析结果表明所得融合目的蛋白约为40 kD，Western-blot结果显示该重组蛋白成功融合了6×His标签；pET-BF2-BSP最优化表达条件分别为：菌体起始诱导浓度OD600nm 0.8~1.2，IPTG诱导浓度1.1 mmol/L，诱导时间2~4 h；建立了该重组蛋白变性状态下通过镍柱亲和层析纯化包涵体的方法。实验获得了高纯度的在体外构建鸡MHC-肽四聚体所需的重组蛋白BF2-BSP。

稻瘟菌无毒基因簇的RAPD标记及其SCAR转化

SCAR Conversion of Two RAPD Markers Linked to An Avirulence Gene Cluster in Magnaporthe grisea

林艳;王宝华;杨婕;雷财林;鲁国东;王宗华

2006, 14(5): 768-773 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

为克隆稻瘟菌无毒基因簇Avr-Pi1、Avr-Pi2和Avr-Pi4a,以RAPD方法对稻瘟菌(Magnaporthe grisea）菌株FJ81278ZB15、GUY11及其F1后代群体进行扩增，得到2个与该无毒基因簇连锁的分子标记P1414700和P1389420 。对2个特异片段进行克隆和测序，并根据序列分别设计2对特异引物，对菌株FJ81278ZB15、GUY11及其F1后代群体进行扩增，扩增结果P1414700 成功转化为SCAR标记SC1414，而P1389420未能成功转化。对分子标记SC1414、P1389420和报道的RPF1.2与无毒基因簇Avr-Pi1、Avr-Pi2和Avr-Pi4a遗传连锁关系进行了分析，结果SC1414、RPF1.2、P1389420与Avr-Pi2的遗传距离分别为5.8、2.2 和4.4 cM；与Avr-Pi1的遗传距离分别为15.9、7.9和5.7 cM；与Avr-Pi4a的遗传距离分别为20.7、12.7 和10.5 cM。

甘蓝型油菜5个重要性状QTL分析*

QTL Analysis of 5 Important Traits in Brassica napus

刘列钊;林呐;谌利;唐章林;张学昆;李加纳

2006, 14(5): 747-751 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用种皮色泽差异显著的甘蓝型油菜(Brassica napus)黄籽GH06和黑籽P174为亲本以及由它们构建的132个F2：3家系群体，对饼粕蛋白质含量、皮壳率、皮壳含油量、千粒重及种子含油量5个性状进行考察及QTL分析，5个性状均表现为连续分布，有的甚至表现出单向或双向超亲优势，表明5个性状均为多基因控制的数量性状。5个性状共检测到13个QTL，其中千粒重1个QTL，对表型变异贡献率为18.7%；饼粕蛋白质含量5个QTL，解释表型变异在7.8% ~14.4%之间；皮壳率3个QTL，解释表型变异在26.5%~32.8% 之间；皮壳含油量3个QTL及种子含油量1个QTL，解释表型变异在8.3% ~12.1%之间。在第20连锁群上，发现有饼粕蛋白质含量QTL与皮壳含油量和千粒重QTL重叠的区段。

黑曲霉木聚糖酶基因xynB在大肠杆菌中的表达及重组木聚糖酶的特性

Expression of Xylanase Gene xynB from Aspergillus niger in Escherichia coli and Characterization of Its Recombinant Xylanase

邓萍;曹云鹤;陆文清;郭小华

2006, 14(5): 774-778 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

从黑曲霉(Aspergillus niger) mafic-005中克隆得到木聚糖酶基因xynB。序列分析表明，该基因全长745 bp，含有一个67 bp内含子，编码225个氨基酸，理论分子量为24 kD(GenBank登录号:DQ174549)，与已知黑曲霉xynB基因的同源性均较高。将该基因定向插入大肠杆菌(Escherichia coli )表达载体pET-28a (+)上，并转化E. coli BL21 获得重组菌株。经过IPTG诱导，xynB基因获得特异性表达。经SDS-PAGE分析，重组蛋白分子量约为30 kD。该重组蛋白经镍NTA琼脂糖凝胶FF纯化后达到电泳纯。酶学性质分析表明，重组木聚糖酶最适温度为40 ℃，最适pH值为5.0，在酸性和常温条件下具有良好的稳定性。

实时荧光定量PCR方法检测大肠杆菌O157:H7

Real-time Quantitative PCR Detection of Escherichia coli O157:H7

陈思;黄昆仑;许文涛;李媛; 罗云波

2006, 14(5): 779-782 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

针对大肠杆菌(Escherichia coli )O157:H7的致病基因eae设计了特异性引物，并用荧光染料SYBR GreenⅠ 进行了实时定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）。熔解曲线显示产物特异性较强，无非目的条带和二聚体产生。并对反应程序进行了优化，确定了最佳的反应程序，最终在合适的模板浓度内得出了标准曲线。结果显示Real-time PCR 比普通PCR灵敏1 000倍。

从原始生殖细胞分离昆明小鼠EG细胞及其传代培养

Isolation of Kunming Mice Embryonic Germ Cells Derived From Primordial Germ Cells and Their Passage Culture

郭志林;王新庄;张涌;王木;王轶敏;胡文举

2006, 14(5): 688-691 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

为提高昆明小鼠胚胎生殖细胞(embryonic germ cells, EG cells)建系效率，以怀孕8.5～12.5 d小鼠胎儿为材料，比较了胎儿后1/3部位的组织共培养、生殖嵴共培养、差速贴壁和穿刺生殖嵴4种分离胚胎原始生殖细胞(primordial germ cells，PGCs)的方法以及不同传代方式对EG细胞克隆的影响。结果表明：生殖嵴共培养和差速贴壁方式获得了较好分离EG细胞的效果，与其它两组比较差异显著；手工传代方式与连同成纤维细胞一起消化的传代方式相比获得了较高传代比率。对所分离EG细胞经形态观察、AKP染色和体外分化能力检测，证实其符合小鼠EG细胞的集落状生长、细胞未分化特性及细胞多能性等特征。

CB处理和胞质去除对山羊孤雌胚体外发育的影响

Effects of Cytochalasin-B and Cytoplasm Removal Treatment on In vitro Parthenogenetic Embryos of Goat

刘凤军;赵明涛;王国华;王勇胜;郑月茂;张涌;张玉玲

2006, 14(5): 692-696 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

为优化山羊核移植方案，实验研究了细胞松弛素B(cytochalasin-B，CB)处理和胞质去除对山羊孤雌胚体外发育的影响。将山羊MⅡ期卵母细胞用7.5 μg/mL CB分别处理5、10、15、20和30 min(实验Ⅰ)，处理后分别去除1/4～1/2的细胞质(实验Ⅱ)，并在每个实验中设对照组(不做任何处理)，孤雌激活后，用碘化丙啶和Hoechst 33258 对囊胚ICM细胞及TE细胞进行双染色，分别记录内细胞团(ICM)和滋养层(TE)细胞数。结果表明, 实验组Ⅰ及对照组均获得了较高的卵裂率(分别为76.83%～85.50%和86.50%)及较高的囊胚期发育率(分别为57.40%～62.20%和59.80%)，囊胚细胞数及ICM细胞数在各组间无统计学差异(P＞0.05)；实验Ⅱ，随着去除胞质比例的1增大孤雌胚的卵裂率(75.76%～16.07%)、囊胚率(38.67%～6.67%)、囊胚细胞总数(107.15～63.67)及ICM百分率(26.32%～19.37%)呈下降趋势，超过1/3时孤雌胚的发育力显著降低(P <0.05)。实验结果指出，(1)7.5 μg/mL CB在30 min以内对山羊孤雌胚体外发育力无不利影响；(2)胞质去除量控制在1/3以下对孤雌胚的发育影响不大。

patatin启动子调控烟草液泡转化酶抑制子在马铃薯抗低温糖化中的作用

Role of Tobacco Vacuolar Invertase Regulated by patatin Promoter in Resistance of Potato Tubers to Cold-sweetening

成善汉;柳俊;谢从华;宋波涛;刘勋;李竟才

2006, 14(5): 716-720 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

为了降低马铃薯(Solanum tuberosum )块茎低温贮藏下还原糖的积累，实验构建了马铃薯块茎特异性启动子（CIPP）调控的烟草液泡转化酶抑制子Nt-VIF基因表达载体pBICNI，并转化马铃薯植株。PCR、Northern杂交和Southern杂交分析结果显示，CIPP调控的Nt-VIF基因全长cDNA成功地导入鄂马铃薯3号（E-3）植株。14个转基因株系块茎分别贮藏在4℃和20℃条件下，贮藏1个月后进行还原糖含量和液泡酸性转化酶（VI）活性测定。结果表明，在20℃条件下转基因株系块茎还原糖（RS）含量与对照相比差异不明显，在4℃条件下RS含量则显著下降，与对照相比下降幅度从34%（株系B-13）至76.8%（株系B-1），说明Nt-VIF cDNA在马铃薯中的表达，成功地抑制了液泡酸性转化酶的活性，导致还原糖含量降低。进一步分析表明，转基因块茎低温贮藏其液泡转化酶活性与还原糖含量呈显著的正直线相关（VI = 0.3084RS + 0.0673）。实验获得的B-1、B-2、B-6、B-9、B-14等5个转基因株系，块茎低温贮藏后能直接满足炸片加工对还原糖含量的要求。

硬粒小麦（Triticum durum）贮藏蛋白的遗传变异分析(英文)

Genetic Variations of Gliadin and HMW Glutenins Subunits in Durum Wheat

王含彦;魏育明;颜泽洪;郑有良

2006, 14(5): 721-727 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

对来源于美、中、俄及埃塞阿比亚等22个国家的142份硬粒小麦材料的种子贮藏蛋白位点及遗传变异进行了研究。供试的硬粒小麦(Triticum durum Desf )材料共检测出37条醇溶蛋白条带，无1条带纹为所有材料共有，多态性达到100％，说明硬粒小麦具有丰富的醇溶蛋白等位变异。聚类分析将142份供试材料分为3个大类，材料间遗传差异大小在不同的国家有所不同，表明醇溶蛋白带型与地理来源有一定关系。高分子量谷蛋白电泳共分离出14种亚基和15种亚基组合，但是优质亚基所占比例不高，这可能是因为硬粒小麦加工用途的特殊性，使得多年的育种并未太多改变硬粒小麦高分子量谷蛋白亚基等位变异的频率，促成优质亚基的累计。

我国不同时期小麦品种高分子量麦谷蛋白亚基组成比较(英文)

Comparison of Allelic Variations at High-molecular-weight Glutenin
Subunit Loci in Wheat Cultivars Released in Different Periods in China

宋健民;刘爱峰;姜国华;李豪圣;刘建军;赵振东

2006, 14(5): 728-35 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

用SDS-PAGE方法测定了我国10个小麦主产省份171份小麦品种和高代品系的高分子量麦谷蛋白亚基（HMW-GS）组成。鉴定出18种HMW-GS，40种HMW-GS组成形式，其中20种亚基其组成形式只在一个品种（系）中出现。Glu-A1位点亚基1和Null出现最多，Glu-B1位点7＋8和7＋9亚基对占绝对优势，Glu-D1位点2＋12亚基对出现频率最高。Null、7＋9、2＋12、Null，7＋8，2＋12，1、7＋8，2＋12，1、7＋9、2＋12等亚基组成形成出现频率最高，占分析品种的49.71％。与前人研究相比，新育成品种HMW-GS亚基组成发生了明显变化，面包优质亚基（对）1、5＋10出现的频率显著升高，亚基多态性增加，组成形式明显改善，这些对于品质改良和品种选育是非常有利的，新育成品种Glu-1品质评分已超过7。尽管个别品种亚基组成好，品质优良，但总体上看，我国小麦品种与其它国家相比品质还存在一定差距，提高5＋10、17＋18等优质亚基的频率是改善我国小麦面包品质的重要措施。

　UV-B诱导拟南芥查耳酮合成酶（CHS）基因表达及其信号传导途径(英文)

Ultraviolet-B Induced Chalcone Synthase (CHS) Gene Expression and Its Signaling Pathways in Arabidopsis thaliana

吴颖;梁月荣;董俊杰;陆建良

2006, 14(5): 736-741 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

应用RT-PCR技术研究了6个拟南芥（Arabidopsis thaliana）株系的查耳酮合成酶（CHS）基因转录对UV-B照射以及过氧化氢（H2O2）、D/L-NG -一甲基精氨酸（D-NAME、L-NAME）和2-苯基-l-4,4,4,4-四甲基咪唑啉-1-烃氧基-3-氧化物（PTIO）等化合物处理的响应。结果表明，在6个株系中，Fah1-2突变株UV-B伤害最为敏感，而野生型WS2对UV-B伤害耐受力最强；在15 μmol/m2/s UV-B照射2 h，CHS基因转录产物明显增加，但24 h后消失。H2O2对CHS基因转录没有显著作用，D-NAME 和L-NAME能抑制CHS在UV-B照射下表达转录的增加，而PTIO对CHS基因表达的抑制作用很弱。据此认为，CHS基因对UV-B照射响应的表达和转录不受NO和H2O2的调节

具生物学活性的重组鸡Leptin的制备

Preparation of Bioactive Recombinant Chicken Leptin Fusion Protein

刘颖;刘志;施振旦;李孝伟;钟子穗

2006, 14(5): 641-645 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

将鸡Leptin成熟肽的cDNA片段插入表达载体pRSET A的Nhe Ⅰ和Hind Ⅲ两位点之间，构建重组表达质粒pLep -SCAU2并转化大肠杆菌(Escherichia coli )菌株BL21（DE3）, 将重组菌在含氨苄青霉素100 μg/mL 的LB培养基中培养至OD600大于0.6之后，经IPTG 0.05 mol/L诱导表达出分子量约为17.5 kD的含6×His标记的重组鸡Leptin，诱导4 h后表达量达最高，占总菌体蛋白的25％左右,且以包涵体形式存在。该重组鸡Leptin经50％Ni-NTA树脂纯化和透析复性折叠后分离出可溶性部分。对35日龄的矮脚黄鸡腹腔注射该可溶性重组鸡Leptin（2 mg/kg 体重）；注射后60 min内的采食量与对照组差异不显著（P > 0.05），但在注射后80~120 min都显著低于对照组（P < 0.05）。Leptin处理公鸡的采食量在注射2 h后逐渐上升并在5.5 h时与对照组公鸡相同。但Leptin处理母鸡的采食量持续受到抑制，在注射后5.5 h时仍然显著低于对照组母鸡（P <0.01）。表明所表达的重组鸡Leptin能显著抑制鸡的采食量（母鸡比公鸡效果更为明显），证明所制备的重组鸡Leptin融合蛋白具有生物学活性。

412元件插入引起的棒眼果蝇杂交后代scarlet基因突变分析

Analysis of a 412 insertion mutation at scarlet locus of outcross progeny of Bar fly

杨军;连林生;赵春江;白丽华;吴常信

2006, 14(5): 669-672 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

设计了6对引物对本实验室由棒眼果蝇Bar与野生型果蝇杂交所产生的亮红眼突变型果蝇stbr的scarlet基因进行了测序，结果在scarlet基因的第4外显子检测到了一个7.5kb的插入，进一步的测序证实此7.5kb插入为逆转座子412元件。在对棒眼果蝇和从日本引进的眼色突变品系st1果蝇的scarlet基因测序分析时也都检测到了412元件的插入，不同的是棒眼果蝇scarlet基因中412插入呈杂合型。对所有的412插入位点分析时发现，stbr果蝇的412元件以与scarlet基因转录方向一致的方向插入到了其第4外显子的1612thbp-1613thbp之间，且412元件的5´长末端重复LTR区发生了450bp的缺失；st1果蝇的412元件则以与scarlet基因转录相反的方向插入到了其第4外显子的1722ndbp-1723rdbp之间

利用PCR-SSCP分析鸡绿壳蛋基因的SNP标记

Analysis of SNP Markers for Blue-shelled Gene in Chicken by PCR-SSCP

赵瑞;刘珍珍;徐桂云;杨宁

2006, 14(5): 673-676 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

决定绿壳蛋鸡壳色的Oocyan(O)基因座位位于一号染色体。绿色蛋壳的色素主要有原卟啉、胆绿素以及胆绿素的锌络合物，将上述色素代谢途径中的酶对应的基因在家鸡基因组序列中进行比对，没有发现与O基因座位相符的位点。基于ALEV1周围微卫星标记较少，在家鸡一号染色体基因组序列上选取距离ALEV1上游3.5 cM的位点设计引物进行PCR-SSCP分析，寻找与绿壳基因座位紧密连锁的SNP标记位点，并且分析标记位点基因型与O位点不同基因型之间的相关性。结果表明,一个标记与绿壳基因位点紧密连锁，该标记上发生2个点突变，分别是家鸡Chr1:61754089T->A与Chr1:61754175A->T上的颠换。在纯合绿壳蛋鸡群体中，81%的个体在2个位点均发生突变，标为AA型，杂合绿壳群体中AB型为89%，粉壳蛋鸡群体中93%的个体与红色原鸡序列一致，标为BB型。在绿壳蛋鸡育种中，建议以AA型作为分子标记提高绿壳蛋鸡育种工作的效率。

草鱼leptin基因的分离鉴定及在巴斯德毕赤酵母中的表达

Identification of the leptin Gene from the Ctenopharyngodon idellus
and Its Expression in Pichia pastoris

戴汉川;伍晓雄;聂芬;赵娜;张维民;曾翠平;龙良启

2006, 14(5): 677-682 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用RT-PCR技术扩增出草鱼(Ctenopharyngodon idellus)的leptin基因，将leptin基因克隆至真核表达载体pPIC9K，电穿孔转化GS115菌株, 经G418筛选和甲醇诱导后，对表达产物进行SDS-PAGE琼脂糖凝胶电泳和Western blot分析。结果表明，草鱼leptin基因cDNA序列由438个核苷酸组成，编码146个氨基酸组成的多肽（GenBank登陆号AY551335），与鲤鱼(Cyprinus carpio)leptin基因相比，核苷酸和氨基酸的同源性为99%；与人、猪和鼠相比，核苷酸同源性分别为84%、86%和95%, 氯基酸的同源性分别为84%、82%和96%；与河豚(Takifugu rubripes)相比，氨基酸具有较大的差异，仅有9％的同源性，表明leptin在物种的进化上具有一定的差异；实现了草鱼leptin基因在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的表达，表达蛋白的分子量约为16 kD， Western blot 分析表明，表达产物具有一定的免疫学活性。

山羊骨髓MSCs体外向成骨细胞诱导和分化

The Osteoblast Differentiation In vitro of Goat Marrow Mesenchymal Stem Cells(MSCs)

庞全海;窦忠英

2006, 14(5): 683-687 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

以关中奶山羊骨髓间充质干细胞（MSCs）为对象，研究了体外诱导山羊MSCs向成骨细胞的分化。结果表明，山羊MSCs在地塞米松、β-磷酸甘油和抗坏血酸的作用下，从诱导的第4~5天开始，即可见有些MSCs体积逐渐增大，由梭形或多角形转变为立方形或卵圆形；随着诱导时间延长，立方形或卵圆形细胞不断增多，到第15天时，有较多的立方形细胞，且这种变化经历了从立方形向卵圆形转变的过程；第25天，可见卵圆形和方形细胞堆积，诱导分化率为90.2% ± 2.97%。说明其被诱导分化为成骨细胞表型，该类细胞呈茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色阳性。从而证明了山羊骨髓MSCs具有体外分化为成骨细胞的潜能，从而为利用该类细胞作为实验模型研究骨骼缺损修复等提供了科学依据。

用玻璃微管法冷冻猪卵母细胞

Experiment on Cryopreservation of Porcine Oocytes by Using Glass Micropipette

朱良成;芮荣;杨德吉;张德福;刘东

2006, 14(5): 697-700 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

用自制的玻璃微管（glass micropipette，GMP）冷冻猪卵母细胞。以FDA染色鉴定冷冻-解冻后卵母细胞存活力，结果表明，用常规细管程序化冷冻和GMP管玻璃化冷冻猪成熟（MⅡ期）卵母细胞时，冻后存活率分别为34.5%和63.3%（P <0.05）；以玻璃化冷冻比较细管和GMP管对猪MⅡ期卵母细胞冷冻效果的影响，两组冻后存活率分别为45.0%和65.9%（P < 0.05）；用常规细管程序化和GMP管玻璃化冷冻猪GV期卵母细胞时，冻后存活率为30.0%对59.7%，有显著性差异（P < 0.05）。研究表明，GMP法为一种有效的猪卵母细胞冷冻保存方法。

断奶仔猪饲喂甘露寡糖后粪样菌群的变化

Effect of Mannan-oligosaccharide on Bacterial Community of Piglet after Weaning

杭苏琴;毛胜勇;黄瑞华;苏勇;朱伟云

2006, 14(5): 701-705 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

来自6窝健康、体重相近的杜长大哺乳仔猪34头随机地分为两组，分别于断奶后饲喂基础日粮或基础日粮＋甘露寡糖(MOS)，收集仔猪断奶当天（实验前）及断奶后7、14、21和28 d粪样，利用PCR/DGGE技术对粪样细菌16S rDNA的V6～V8可变区进行了分析，以研究日粮中添加MOS对断奶仔猪粪样菌群稳定性及多样性的影响。结果表明，断奶前同窝仔猪带谱相似性较高(81%~88%)，但存在个体差异；断奶后同窝仔猪的相似性下降(61%～70%)；断奶后7、14、21和28 d相邻时间段之间，基础日粮组仔猪菌群相似性维持在61%左右，MOS组菌群相似性在断奶第一周下降后，逐渐增加至70%，说明断奶可引起菌群发生变化，而MOS具有使菌群快速稳定的作用。多样性结果显示，断奶7 d后MOS组菌群多样性增加，基础日粮组下降，14 d后两组的差异增加，28 d时基础日粮组多样性为1.52，MOS组为1.38，差异由断奶当天的0.09上升至28 d的1.14，但差异不显著（P >0.05）；条带数分析获得类似结果，即断奶7 d时两组条带数均减少，14 d后MOS组条带数增加，对照组的条带数却减少，实验期内MOS组条带数均高于对照组。结果提示，断奶导致了菌群的变化，日粮中添加MOS可加速菌群多样和稳定。

CpG-DNA对大肠杆菌诱导的大鼠实验性乳腺炎的影响

Effect of CpG-DNA on Mastitis Induced by Escherichia coli Infection in Rat Model

朱于敏;马海田;陈伟华;邹思湘

2006, 14(5): 706-710 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

72只雌性大鼠随机分成对照组和实验组(n =36)。对照组产后0 h于左后腿胫骨前肌肌肉注射0.01 mol/L，pH 7.2 磷酸盐缓冲液(PBS)100 μL,实验组肌注CpG-DNA 200 μg/只，72 h后经乳头管灌注2×1012 cfu (colony forming unit/mL)/mL,大肠杆菌(Escherichia coli )100 μL/侧到第4对(两侧)乳腺内，分别于灌注前0 h，灌注后8，16，24，48和72 h(n = 6)颈静脉放血处死。组织学观察显示大鼠感染后16 h为乳腺腺泡嗜中性粒细胞(polymorphonuclear leukocytes，PMN)浸润高峰，实验组PMN浸润迅速， 72 h已无浸润。乳腺组织细菌数在16 h上升至最高，实验组大鼠感染后16、24和48 h乳腺组织细菌数较对照组有显著下降。CpG-DNA能极显著地提高感染前乳腺组织中IL-2水平。乳腺组织IL-6在不同时间点均有显著上升，在16 h达最高。CpG-DNA能显著地提高16 h乳腺组织IL-6水平。实验组乳腺组织N-acetyl-β-D-glucosaminidase (NAGase)无显著变化。表明CpG-DNA可加速炎症初期PMN的快速浸润，促进IL-2和IL-6的产生，减少细菌数量，减轻炎症介质对细胞的损伤并缩短炎症过程，提示CpG-DNA对大肠杆菌诱发的大鼠实验性乳腺炎有一定的预防作用。

抗苯巴比妥单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选及ciELISA试剂盒的研制

Screening of Hybridoma Lines of Monoclonal Antibody and Development of ciELISA Kit for Rapid Detection of Phenobarbital

王自良;张改平;张海棠;杨艳艳;王艳荣;柴书军

2006, 14(5): 711-715 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

用BSA-pAPB免疫Balb/c小鼠，用细胞融合技术制备并用间接ELISA和阻断ELISA筛选抗苯巴比妥单克隆抗体(PB mAb)杂交瘤细胞株，体内诱生腹水法生产PB mAb，应用PB mAb研制PB残留竞争ELISA(ciELISA)快速检测试剂盒(PB-Kit)，并测定其性能。结果表明，筛选出3株杂交瘤细胞，最好的3F6-C4株的PB mAb间接ELISA效价为1∶6.4×105，亲和常数(Ka)为1.96×1010 L/moL，半数抑制浓度(IC50)为5.7 μg/L，与巴比妥的交叉反应率(CR%)12.4%，与其它化合物无CR；PB-Kit的线性检测范围1.0～81 μg/L，灵敏度0.75 μg/L，检测限1 μg/L；饲料样和猪尿样的平均添加回收率85.8%和91.3%，平均批内和批间变异系数均<15%。PB-Kit具有快速、敏感、特异、简便等特点，适合PB残留快速检测的推广应用。