实时荧光定量PCR方法检测大肠杆菌O157:H7
陈思;黄昆仑;许文涛;李媛; 罗云波
中国农业大学食品学院 北京 100083
Real-time Quantitative PCR Detection of Escherichia coli O157:H7
CHEN Si;HUANG Kun-lun;XU Wen-tao;LI Yuan;LUO Yun-bo
College of Food Science, China Agricultural University, Beijing 100083, China
摘要 针对大肠杆菌(Escherichia coli )O157:H7的致病基因eae设计了特异性引物,并用荧光染料SYBR GreenⅠ 进行了实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)。熔解曲线显示产物特异性较强,无非目的条带和二聚体产生。并对反应程序进行了优化,确定了最佳的反应程序,最终在合适的模板浓度内得出了标准曲线。结果显示Real-time PCR 比普通PCR灵敏1 000倍。
关键词 :
大肠杆菌O157:H7 ,
SYBR GreenⅠ ,
实时荧光定量 ,
real-time PCR
Abstract : A rapid and accurate real-time quantitative polymerase chain reaction (Real-time PCR) method with SYBR GreenⅠfor detecting Escherichia coli O157:H7 was established. A pair of amplify primers were designed to amplify eae gene. The dissociation curves showed that the amplified product was very specific. The optimal reaction program and standard curve were founded. The result indicated that Real-time PCR was sensitive 1000 times more than ordinarily PCR.
Key words :
Escherichia coli O157:H7
SYBR green Ⅰ
fluorescence quantitative
real-time PCR
收稿日期: 2005-04-29
通讯作者:
罗云波
[1]
朱丰晓, 陈家璐, 张智俊. 竹花叶病毒SYBR GreenⅡ 反转录实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(4): 752-760.
[2]
陈翠腾, 陈珍, 朱春华, 蔡国漳, 刘斌琼, 黄瑜. 鸭腺病毒3型MGB TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(3): 564-570.
[3]
朱海生 刘建汀 王 彬 陈敏氡 张前荣 叶新如 林珲 李永平 温庆放. 丝瓜过氧化物酶基因的克隆及其在果实褐变中的表达分析 [J]. , 2018, 26(1): 43-52.
[4]
张贤 王建红 李增强 曹凯 庄俐 徐昌旭 曹卫东. 紫云英实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择 [J]. , 2017, 25(8): 1356-1365.
[5]
张利卫 曹贝贝 张云飞 张君涛 韦学雷 兰培英 胡慧. 猪δ冠状病毒SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用 [J]. , 2017, 25(6): 969-975.
[6]
熊力 陈虹 潘阳阳 胡威 温泽星 孙政东 樊江峰 崔燕 余四九. 生长激素受体(GHR)在牦牛不同组织中的表达分析 [J]. , 2015, 23(9): 1234-1239.
[7]
张译夫 潘阳阳 崔燕 余四九 张倩 樊江峰 杨琨 杨融. 牦牛输卵管蛋白(Ovn)的cDNA克隆及其在发情周期中的差异性表达 [J]. , 2015, 23(9): 1217-1225.
[8]
吕鹏 潘阳阳 崔燕 何翃闳 刘鹏刚 李秦 郑红飞 樊江峰 余四九. 牦牛热休克蛋白70-12B基因(HSPA12B)的克隆及其在体外受精胚胎中的表达 [J]. , 2015, 23(9): 1226-1233.
[9]
洪阳 尹俊梅 黄少华 李崇晖 陆顺教 杨澜 牛俊海. 红掌细菌性叶疫病胁迫下实时荧光定量PCR (qRT-PCR)内参基因的筛选 [J]. , 2015, 23(9): 1178-1187.
[10]
吴娅红 陈松林 刘肖峰 董忠典 张宁 于洋 修旺姗. 半滑舌鳎富含亮氨酸的G蛋白偶联受体基因(LGR8)的分子克隆和表达分析 [J]. , 2015, 23(9): 1188-1195.
[11]
郑嫩珠 李丽 辛清武 缪中纬 朱志明 陈黎 刘凤辉 吴剑飞 黄勤楼. 酪氨酸酶(TYR)、小眼畸形相关转录因子(MITF)和刺鼠信号蛋白(ASIP)基因对白绒乌骨鸡黑色素沉积的遗传效应 [J]. , 2015, 23(8): 1076-1083.
[12]
亢春雨 于宏伟 郭润芳 贾英民. 单增李斯特氏菌Lm319主要毒力基因的时序性表达研究 [J]. , 2015, 23(6): 788-797.
[13]
秦子禹 孙建设 王娜 邵建柱. 一种高效的苹果茎沟病毒(ASGV)TaqMan探针实时荧光定量(qRT-PCR)检测方法 [J]. 农业生物技术学报, 2015, 23(6): 816-822.
[14]
刘梦洋 卢银 韩文素 王彦华 赵建军 申书兴. 大白菜抗小菜蛾突变体硫甙含量及相关基因的表达分析 [J]. , 2015, 23(3): 320-328.
[15]
刘洪峰 高乐旋 胡永红. 牡丹不同发育阶段种子和花瓣组织实时荧光定量PCR中内参基因的挖掘与筛选 [J]. , 2015, 23(12): 1639-1648.