农业生物技术学报

Effects of Conjugating Conditions on Goat Anti-rabbit Antibody Immobilization onto Bacterial Magnetic Particles

陈继峰;李颖;姜伟;王珍芳;孙建波;李健;李季伦;李绍华

2006, 14(3): 423-428 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

用羊抗兔抗体进行抗体连接到细菌磁小体(BMPs)实验，以探讨结合条件对抗体连接效率(以每毫克BMPs上连接抗体的微克数表示，单位为μg/mg)的影响。实验表明，冷冻干燥后的BMPs的抗体连接效率降低36%~55%；在液氮中(-196 ℃)预处理的抗体连接效率显著高于在-70 ℃和-20 ℃预处理的。室温(15 ℃)下反应18 h的抗体连接效率最高，为64.06 μg/mg，明显高于其它温度和连接时间的。反应体系中，BMPs用量由5 mg降到0.1 mg，抗体用量由10 μg增加到300 μg时，抗体连接效率逐渐上升，当BMPs用量为0.1 mg，抗体用量为300 μg时，抗体连接效率达762.37 μg/mg。PBS、HEPES、Tris-HCl、MOPS、VBS以及磷酸盐等溶液可用于抗体连接到BMPs体系中，在通常使用的缓冲液pH和浓度下，几种溶液的抗体连接效率变化范围为46.28±0.58 ~ 90.83±1.64 μg/mg；并且不同的溶液有相应的使抗体连接效率达到最高时的pH和溶液浓度，当HEPES的pH为3.5，浓度为20 mmol / L；Na3PO4的pH为5.6，浓度为5 mmol / L时，抗体连接效率分别为108.01和76.78 μg/mg。对连接到BMPs上的抗体进行SDS-PAGE定性检测结果表明，抗体连接到了BMPs的膜上。

5种笛鲷属鱼类的遗传多样性及分子标记

Genetic Diversity and Molecular Markers of 5 Species of Snappers

刘丽;刘楚吾

2006, 14(3): 349-355 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

运用RAPD及SSR技术对笛鲷属的画眉笛鲷(Lutjanus vitta)、金带笛鲷 (L. fulvus)、金焰笛鲷 (L. fulviflamma)、千年笛鲷(L. sebae)和星点笛鲷(L. stellatus)等5种鱼的遗传多样性及其分子标记进行了研究。RAPD研究结果表明, 5种鱼的平均多态性位点比率(P)依次为89.30%、86.70%、92.11%、86.47%和86.00%; 种内两个体间平均遗传距离(D)分别为0.3431，0.2130，0.3121, 0.1825和0.1775；平均遗传多样性指数(Hi)分别为0.1634、0.1095、0.1353、 0.1022和0.1024。引物OPA8和OPP10的扩增产物中得到9个RAPD标记，分别为OPA8-413bp、OPA8-140bp、OPP10-418bp、OPA8-697bp、OPP10-526bp、OPA8-361bp、OPP10-449bp、OPA8-311bp和OPP10-599b，可鉴别5种鱼。SSR研究结果显示, 5种鱼的有效等位基因数依次为1.9610、3.3793、3.2957、1.7893和3.6591；群体的杂合度(H)分别为0.332、0.462、0.593、0.367和0.676；多态信息含量(PIC)分别为0.302、0.438、0.554、0.332和0.641。在11个微卫星位点上得到6个微卫星标记，分别为13 Prs229-115 bp、4 Lca43-212 bp、4 Lca43-240 bp、13 Prs229-288 bp、19 Prs275-156bp和7Lca91-118 bp可用于鉴别5种鱼。

转nsLTPs类抗菌蛋白基因烟草对赤星病和青枯病的抗病性分析

Analysis of Disease Resistance of nsLTPs-like Antimicrobial Protein Gene Transgenic Tobacco against Brown Leaf Spot and Granville Blast

王晓雯;杨星勇;李德谋;桑贤春;佘容;裴炎

2006, 14(3): 365-370 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

以烟草叶盘为受体，通过根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将益母草 (Leonurus japonicus Houtt.) 非专一性脂转移蛋白(nsLTPs)类抗菌蛋白基因Lj-L和相应改造基因Lj-S分别导入烟草(Nicotiana tabacum cv. Xanthi.)，并进行抗病性分析。GUS染色和PCR分子验证表明外源基因已整合进烟草基因组中。RT-PCR分析表明，外源基因能够在烟草中稳定转录。T0代离体抗性实验表明，外源基因对烟草赤星病(Alternaria alternata)的抗性已达极显著水平; T1代活体抗性实验表明，Lj-L和Lj-S基因对青枯病(Pseudomanas solanacearum)的抗性也均达显著水平。抗性结果比较发现，Lj-L基因的抗病性效果优于Lj-S基因，且离体和活体抗病结果较一致，但并不与基因的转录水平成正比，似乎存在一个阈值。

水稻OsWRKY19基因启动子的分析

Analysis of a Rice OsWRKY19 Gene Promoter

郝中娜;王海华;白洋;郭泽建

2006, 14(3): 371-375 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用PCR技术从水稻(Oryza sativa)秀水11品种中克隆了转录因子WRKY19编码区5'上游大小为1 404 bp的调控序列，命名为OsW19p, 将它和长度为105、378、977、1 106、1 205和1 306 bp的5'端缺失体分别与gus基因融合，构建植物表达载体。用根癌农杆菌介导法将所有载体转化水稻，GUS组织化学分析和荧光测定结果表明：(1)培养基中的2,4-D强烈抑制 gus基因在愈伤组织阶段的表达；(2) gus基因在转基因植株的根、茎、叶和花中均有表达，在花粉和成熟种子中无表达，在种子萌发时胚有表达，在苗期种子根和不定根及它们的侧根均有表达但根尖无表达，成熟期根部只有侧根有表达；(3)除p105以外OsW19p (p1404)和其它5个不同长度的缺失体均可驱动gus基因在转基因苗叶片中的表达，p1205活性最高，p977和p1306的活性减弱,由此推测-1404～-1306 bp和-1205～-977 bp间包含正调控元件，-1306～-1205 bp和-977～-378 bp间包含负调控元件。

烟草DREB-like转录因子的克隆与鉴定

Cloning and Identification of DREB-like Transcription Factor in Nicotiana benthamiana

刘卫群;王永亮;赵同金;周海梦;郭蔼光

2006, 14(3): 376-380 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

在NCBI网站BLAST得到5个烟草表达序列标签(EST)，据此设计引物，从烟草(Nicotiana benthamiana)品种本塞母氏中分离出2条DREB(dehydration-responsive element binding protein)-like转录因子基因，分别命名为NbDREB1和NbDREB2。与相关AP2/EREBP类转录因子比对结果显示，NbDREB1和NbDREB2都具有典型的AP2/EREBP转录因子家族EREBP亚族A类AP2区特征，并且都能在大肠杆菌(Escherichia coli )中表达。酵母单杂交结果显示，都不具有激活功能。连接pGADT7反式激活载体进行酵母单杂交结果显示：NbDREB1能与DRE顺式作用元件结合，NbDREB2则不能，表明NbDREB1为抑制型DREB类转录因子。比较NbDREB1和NbDREB2的AP2区发现：两者在第2位和第49位氨基酸处不同，NbDREB1为Y和K，NbDREB2为N和R。

香菇低温胁迫应答基因的克隆及其表达分析

Cloning and Expression Pattern of a Cold Stress-responding Gene from Lentinula edodes

冯志勇;米朔甫;赵明文;陈明杰;李军辉;谭琦;潘迎捷

2006, 14(3): 381-386 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

用RT-PCR和RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术相结合，从香菇(Lentinula edodes)苏香菌株中得到了1个与低温胁迫相关的全长2 432 bp的cDNA，该基因含1个1 962 bp的开放式阅读框，基因组序列分析发现该基因有11个内含子。经数据库同源查找及序列比较，发现该基因编码的氨基酸与青霉菌(Penicillium nordicum)的聚酮合酶和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的α-氨基己二酸还原酶分别具有30%、22％的同源性和46%、40%的相似性。表达谱分析表明，当低温胁迫的温差为5 ℃时，该基因即开始表达，但mRNA丰度较低；温差达到10 ℃时，mRNA达到最大表达量；低温胁迫处理后，该基因在菌丝转色前的表达丰度低于转色后的丰度。将该基因初步命名为ICS (gene induced under cold stress, GenBank登录号为DQ211659)，并初步推测该基因可能参与了低温胁迫的信号传导，低温胁迫信号在影响氮代谢后进而诱发子实体的形成。

利用AFLP对桃遗传连锁图的加密及加密前后连锁图的比较分析

Density-increasing of Peach Genetic Map by AFLP Technique and Comparative Analysis between the Density-increased and the origin Peach Genetic Maps

辛翠花;朱美云;吴俊;张开春;姜立杰;周晓航;张晓明

2006, 14(3): 387-390 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

以桃(Pruns persica (L.) Batsch)品种大久保与兴津油桃杂交F2 代109株后代为作图群体，利用AFLP分子标记对已构建的桃遗传连锁图进行加密，在原有作图数据的基础上又增加了35个符合孟德尔分离比例的AFLP标记，其中28个新的标记被加到了遗传连锁图上。应用Mapmaker分析软件将所有的144个标记构建到包含11个连锁群的连锁图谱中，连锁群的总长度为1167.6 cM，覆盖了桃基因组范围的97.3%。连锁群的平均长度为106.15 cM，标记间的平均距离为12.04 cM。与已构建的连锁图比较，发现9个新的标记被加到了第9连锁群，而原有的5个标记丢失了；在第6连锁群，不仅标记间的顺序改变了，而且标记间的平均距离也加大了。另外，第3和第11连锁群间、第1和第10连锁群间，一些标记的位置发生了变化，并对产生这些差异的原因进行了初步分析。

海南荔枝(Litchi chinensis Sonn.)主要栽培品种的RAPD分析

RAPD Analysis on Main Cultivars of Litchi (Litchi chinensis Sonn.) in Hainan

王家保;邓穗生;刘志媛;刘玲枝;杜中军;徐碧玉;陈业渊

2006, 14(3): 391-396 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

从80个随机引物中筛选出12条重复性好的多态性引物，对包括15个栽培品种在内的22份海南荔枝(Litchi chinensis Sonn.)资源进行RAPD分析，扩增的多态性片段比例为64.1%, 平均为31.1%; 遗传距离在0.0000~0.6180之间，平均0.3732。UPGMA聚类分析显示，22份资源主要分为2类，部分供试品种存在明显的同名异物现象。

PRRSV GP5和M蛋白重组腺病毒对猪的安全性和免疫效力

Safety and Immunogenicity of the Recombinant Adenovirus Expressing the GP5 and M Protein of PRRSV in Piglets

张治涛;李玉峰; 姜平;汤景元; 邓雨修; 董信田; 李军星

2006, 14(3): 312-318 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

将猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) GP5 重组腺病毒(recombinant Adenovirus-GP5,rAd-GP5)和M蛋白重组腺病毒(rAd‐M)分别接种4只30日龄PRRSV阴性断奶健康仔猪，结果为仔猪接种后2周内体温和食欲正常，猪血液、鼻塞、粪便和猪舍环境中重组腺病毒及其野生型腺病毒检测均为阴性。同时，将rAd‐GP5、rAd-M、rAd-GP5+M (rAd-GP5和rAd-M,V/V=1)和PRRSV-Resp弱毒株分别接种4只30日龄PRRSV阴性仔猪，不同时间检测PRRSV抗体，结果为免疫后14和45 d可检出PRRSV ELISA抗体和中和抗体；免疫后60～90 d，rAd-GP5和rAd-M免疫组ELISA抗体滴度均达1∶2400以上，与PRRSV‐Resp弱毒免疫组相似，而中和抗体滴度达1∶6以上，低于PRRSV-Resp弱毒免疫组；rAd-M免疫组ELISA抗体和中和抗体滴度则低于rAd‐GP5免疫组。rAd-GP5和rAd-M混合免疫组ELISA抗体达1∶4800,其中和抗体滴度与其单独免疫组相似。15只仔猪免疫后28 d进行攻毒保护试验，结果为重组腺病毒免疫猪攻毒后3 d平均体温为39.5℃,病毒血症和排毒时间仅为2周，与PRRSV-Resp弱毒免疫组相似，而空白对照组病毒血症和排毒时间至少60 d。攻毒后7～14 d，rAd-GP5和rAd‐M免疫组ELISA抗体和中和抗体水平明显升高。研究表明rAd-GP5和rAd-M重组腺病毒具有较好的安全性，均可诱导猪体产生较好的免疫反应，两者具有明显的协同免疫作用。

猪繁殖与呼吸综合症病毒ORF5基因的融合表达

Fusion Expression of ORF5 gene of Porcine reproductive and respiratory syndrome virus

陈勇军;苏鑫铭;高晓飞;郑其升;于春梅;曹瑞兵;周斌;陈溥言

2006, 14(3): 319-322 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus , PRRSV)ORF5基因的核苷酸序列设计3对特异性引物，从重组质粒pMD- ORF5中扩增去除ORF5基因中包括全部信号肽在内的N端跨膜区(28 residues)和中部跨膜区(60 residues)。改造后的ORF5基因分别命名为ORF5-1和 ORF5-2。将2个基因片段定向克隆到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-ORF5-1和pET-ORF5-2,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞，经IPTG诱导表达和SDS-PAGE电泳分析，ORF5-1和ORF5-2基因获得融合表达，表达量分别为12.2%和39%，证明删除双跨膜区能明显提高ORF5基因的表达量。经Western blot分析，融合蛋白具有一定的免疫学活性，表明摘除跨膜区对该蛋白的抗原性影响不大。

梅山猪、大白猪和梅大杂交猪背最长肌中差异表达的14个表达序列标签的分离、鉴定及组织表达分析(英文)

Isolation, Identification and Expression Profile of Fourteen Differentially Expressed Sequence Tags in the Longissimus Dorsi Muscle Tissues from
Meishan, Large White and Meishan×Large White Cross Pigs(English)

刘永刚;熊远著;左波;蒋思文;邓昌彦;李家连;李凤娥;郑嵘

2006, 14(3): 323-328 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

为了揭示猪杂种优势的分子机理，利用mRNA差异显示技术研究梅山猪，大白猪和梅大杂交猪背最长肌中基因表达的差异, 分离14条在杂种与纯种背最长肌中差异表达的表达序列标签(EST), 并用半定量RT-PCR鉴定。核苷酸序列分析表明, 这14个EST与已知的基因或表达序列标签没有明显的同源性，随后这14条EST 被提交到GenBank数据库。组织表达谱分析揭示了这些EST在心、脾、肝、肾、小肠、卵巢、肺等绝大多数组织中表达, 说明这些基因对生命过程很重要。这些研究结果表明梅山×大白杂交组合的杂种与纯种之间的不同基因差异表达的方向存在巨大差异，猪杂种优势可能是在一定阶段有诸多不同的必不可少的基因向各种方向差异表达共同作用的结果。

睾丸酮丛毛单胞菌活化因子基因的质粒载体构建及表达

Construction and Over-expression of the Activator Gene from Comamonas testosteroni

戴艺民;潘大仁;Guangming Xiong;吴明霞;周以飞

2006, 14(3): 416-422 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

提取睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonas testosteroni)的基因组DNA，利用PCR扩增activator基因，将扩增产物克隆到pKtac1(含强启动子tac)中，构建重组质粒pKtac1-act1和 pKtac1-act2。经酶切分析和测序，鉴定出正确的重组质粒pKtac1-act1和 pKtac1-act2。将重组质粒转化入大肠杆菌(Escherichia coli)HB101中，用酶联免疫分析方法测定细菌总蛋白质中的activator表达量；将pAX1(含3α-HSD/CR基因)分别和重组质粒(pKtac1-act1和pKtac1-act2)一起转化入E. coli HB101中，测定细菌总蛋白质中的3α-HSD/CR和activator的表达量。结果表明：重组质粒能明显提高activator的表达；pAX1与重组质粒共转化的蛋白质粗提物中，activator和3α-HSD/CR的表达量都显著提高。

反胶束中单宁酶催化没食子酸烷基酯的合成

Biosynthesis of Alky Gallates Catalyzed by Tannase in Reverse Micelle

王征;田云;卢向阳;于华忠;罗泽民

2006, 14(3): 429-433 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

没食子酸烷基酯是一类优良的抗氧化剂，具有潜在的药用价值。为了避免化学合成方法带来的弊端，建立了生物合成没食子酸烷基酯的方法。利用单宁酶在有机相可成功地催化没食子酸烷基酯的合成。在合成没食子酸丙酯(PG)、没食子酸丁酯(BG)和没食子酸戊酯(AG)的反胶束(reverse micelle, RM)催化合成体系中，反胶束组成为双(2-乙基己基)磺基琥珀酰钠(AOT)、异辛烷和水。单宁酶浓度为0.6 mg/mL；pH值为6； W0(水与表面活性剂的摩尔比)分别为15、15和12.5；反应温度分别为30、40和45℃；AOT浓度分别为0.1、0.2和0.2 mol/L时，没食子酸转化率分别为87.4%、90.3%和92.5%。3个体系中由于底物脂肪醇的不同，致使各种因素对单宁酶催化活力的影响不同。

小麦Rubisco抗体的制备和旗叶中Rubisco含量的ELISA测定

Preparation of Rubisco Antibody and Determination of Rubisco Content
of Flag Leaves in Wheat by ELISA

李卫芳;王秀海;贺文娟

2006, 14(3): 397-400 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

Rubisco(核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶)为光合生物中的关键性酶。以小麦(Triticum aestivum L. cv.)叶片为材料，在(NH4)2SO4盐析和DEAE-Sepharose F F层析纯化的基础上添加了Sephacryl S 300分子筛，进一步纯化了Rubisco。将纯化的Rubisco免疫大白兔制备了Rubisco的多克隆抗体，经Western blot检测，Rubisco抗体与Rubisco呈免疫反应特异性。并运用Rubisco抗体，采用ELISA方法直接测定小麦旗叶生长发育过程中Rubisco含量的变化，结果表明：不同生长阶段，旗叶的Rubisco含量与光合速率大小呈正相关。该方法比免疫沉淀法更为快捷、准确。

松材线虫单克隆抗体的研制

Screening and Characterization of Monoclonal Antibody to Bursaphelenchus xylophilus

蒋立琴;郑经武;陈正贤;吴建祥

2006, 14(3): 412-415 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)匀浆液免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合获得一株能稳定传代并分泌抗松材线虫单克隆抗体的杂交瘤细胞，命名为1D3，经ELISA检测其特异性好、效价达到1∶5.12×105，抗体类型为IgG1亚类。Western blot 分析表明，1D3 单克隆抗体株与松材线虫匀浆液有明显反应。单克隆抗体的制备成功为准确地鉴定松材线虫提供了一种快速、灵敏和有效的诊断方法。

小鼠生后发育过程中腮腺分泌蛋白(PSP)的表达

Expression of Mouse Parotid Secretory Protein (PSP) in Postnatal Development of Parotid Glands

田兴华;张表;樊宝良;李宁;吴常信

2006, 14(3): 345-348 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

对小鼠生后发育的不同时期腮腺分泌蛋白(PSP)表达的研究发现，在各发育期中，小鼠PSP mRNA的拷贝数是4.79E+06～1.32E+08，比三磷酸甘油醛(GAPDH，拷贝数是1.32E+04)高出102倍以上；并随腮腺发育期的不同呈动态变化: PSP表达量从初生到3周龄一直处于上升状态，到3周龄达到最高峰，3周龄以后开始下降；12周龄以后基本达到平稳状态。

西安地区荷斯坦奶牛群5个基因位点遗传多态性与泌乳性状的相关分析

Associations between Genetic Polymorphisms at Five Loci and Milk Production Traits in Xi'an Population of Chinese Holstein

张润锋;陈宏;雷初朝;房兴堂;孙维斌;胡沈荣;苏利红

2006, 14(3): 329-333 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

首次以IGFBP-3基因作为中国荷斯坦牛泌乳性状的候选基因，对中国荷斯坦奶牛群5个基因位点中4个多态基因位点与泌乳性状进行了相关分析。κ-cn、β-lg、β-lg 5′侧翼区和IGFBP-3多态基因位点基因型与泌乳性状的最小二乘分析和多重比较表明，κ-cn基因位点基因型对所有的性状影响不显著；IGFBP-3 BB型的305 d泌乳量显著高出AA、AB型1054.17 kg和838.15 kg (P <0.05)， AB型的乳蛋白率显著高于BB型(P< 0.05)；β-lg AA型对乳脂率与乳蛋白率的比值有正效应，AB型对乳蛋白率具有负效应；β-lg 5′侧翼区AA型的305 d泌乳量显著高于AB型(P <0.05)，AA型的乳脂率显著高于BB型(P < 0.05)， BB型的乳蛋白率显著高于AB型(P <0.05)。

不同基因型肉鸡十二指肠SGLT1和GLUT2 mRNA表达的发育性变化

Ontogenetic Expression of SGLT1 and GLUT2 mRNA in Duodenum of Different Genotype Broiler Chicken

王修启;谭会泽;束刚;苏海林;代发文;冯定远

2006, 14(3): 334-340 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

选用遗传背景相同的1 d父母代雄性Arbor Acre (AA)和岭南黄肉雏鸡各120羽，饲养58 d，统计其生产性能并在不同时间采集十二指肠样品，采用相对定量RT-PCR方法研究不同基因型肉鸡在不同时期十二指肠钠葡萄糖共转运载体1(sodium/glucose cotransporter1, SGLT1) 和葡萄糖转运载体2(glucose transporter2, GLUT2) mRNA的表达丰度。结果显示： ①AA鸡每周平均日采食量(ADFI)和平均日增重(ADG)均显著高于黄羽肉鸡(P＜0.05)。②AA鸡和黄羽肉鸡SGLT1 mRNA表达，从2～30 d不断升高，44 d下降，55 d回升；不同基因型之间SGLT1 mRNA丰度比较，AA鸡均高于黄羽肉鸡，且在16和30 d差异显著(P＜0.05)。③AA鸡和黄羽肉鸡GLUT2 mRNA的表达在2～30 d呈现升高的趋势，且16和30 d均显著高于2 d(P＜0.05)；AA鸡44和58 d GLUT2 mRNA的表达显著低于16和30 d(P＜0.05), 而黄羽肉鸡GLUT2 mRNA的表达，58 d显著高于2、16和30 d(P＜0.05)；不同基因型之间GLUT2 mRNA丰度比较，16和30 d AA鸡显著高于黄羽肉鸡(P＜0.05)，58 d时黄羽肉鸡GLUT2 mRNA的表达显著高于AA鸡(P＜0.05)。以上结果说明，AA鸡生产性能显著高于黄羽肉鸡，营养水平的改变对动物生产性能有较大影响，AA鸡的反应比黄羽肉鸡更敏感; 不同基因型肉鸡十二指肠SGLT1 mRNA的表达具有相同的发育模式，且与生产性能的表现相一致；更换饲料下调SGLT1 mRNA的表达，提示调控SGLT1的表达，可以改善生产性能; 生长发育后期黄羽肉鸡GLUT2 mRNA的表达模式，是其有别于AA肉鸡的重要特征。

DHA对脂肪细胞周期及COX-2 mRNA表达的调节

Regulation of Docosahexaenoic Acid (DHA) on Adipocytes Cycle and COX-2 Expression

李惠侠;杨公社;孙世铎

2006, 14(3): 341-344 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

以大鼠前体脂肪细胞原代单层培养为模型，分别以0(对照组)、40(低剂量组)和160 μmol/L(高剂量组)的二十二碳六烯酸(DHA)处理未分化的前体脂肪细胞(培养第1天)和分化的脂肪细胞(分化第1天)。采用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布；逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析环氧合酶-2(COX-2 )mRNA表达情况，探讨DHA对脂肪细胞周期及基因表达的调节作用。结果显示，未分化的前体脂肪细胞经DHA作用48 h，各处理组前体脂肪细胞G1期百分比均呈上升趋势，但与对照无显著性差异；分化的脂肪细胞经DHA作用24 h，40 μmol/L组细胞内COX-2 mRNA的表达量显著下降，而160 μmol/L组则显著增加。以上结果表明，DHA对大鼠前体脂肪周期无明显的调节作用，而对脂肪细胞内COX-2 mRNA的调节具有明显的浓度依赖效应。

cDNA微阵列的标准化方法研究

Study on Normalization Method for cDNA Microarray Data

张纪刚;张勤;殷宗俊

2006, 14(3): 356-359 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

针对目前通用的cDNA微阵列数据的标准化处理方法(常称为对数比转换法)中存在的缺陷，提出了一种新的cDNA微阵列数据标准化方法－非转换法。该方法利用Huber等(2003)提出的芯片数据分析模型，在对芯片背景进行校正后，根据最小二乘估计原理，通过迭代的方式直接对样品中的基因转录水平进行估计，从而达到数据标准化的目的。利用计算机模拟，比较了在各种条件下(不同的芯片内探针重复数、不同的背景变异程度、不同的差异表达基因上下调比例等)该方法与对数比转换法的优劣。结果表明，在所有条件下，非转换法都优于对数比转化法，由非转换法得到的估计值的相对偏差都在5％以下，而由对数比转化法得到的估计值的相对偏差都在20％以上，而且对数比转化法对背景变异和差异表达基因上下调比例更敏感，随着背景变异程度的增大和差异表达基因上下调比例不对称性的提高，其估计值的偏差急剧上升，而非转换法则基本不受影响。因而非转换法可以作为cDNA微阵列数据标准化的一种替代方法。

棉纤维发育重要基因FbL2A的SNPs研究及定位

Divergence and Mapping of SNPs of the FbL2A Gene for Cotton Fiber Development

韩志国;楚鹰;郭旺珍;张天真

2006, 14(3): 360-364 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用PCR技术在7个四倍体棉种(Gossypium hirsutum L.和G.barbadense L.)和2个二倍体祖先棉种(G. herbaceum L.和G. richmondii U.)中扩增出棉纤维发育重要基因FbL2A, 分析了不同材料间存在的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)。根据TM-1和海7124两个材料中FbL2A基因的测序结果, 采用NEBcutter软件分析, 选择BstUⅠ内切酶酶解扩增产物, 利用Mapmaker v3.0b作图软件将FbL2A基因定位到第14染色体。另对该基因在4个陆地棉高强纤维品系间的SNPs位点进行了分析，发现编码区的SNPs位点中存在非同义突变，可能与陆地棉纤维品质等表型相关。

嗜热子囊菌光孢变种cbh1基因的cDNA克隆及在毕赤酵母的高效表达

cDNA Cloning of the Cellobiohydrolase Gene cbh1 from hermoascus aurantiacus var. levisporus and Its Expression in Pichia pastoris
　

陈静;李多川;张玉芹;杜欣可

2006, 14(3): 406-411 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

以嗜热子囊菌光孢变种(Thermoascus aurantiacus var. levisporus)总RNA为模板，通过RT-PCR克隆出外切纤维二糖水解酶基因cbh1片段，采用RACE方法获得全长cDNA克隆，其全长为1 710 bp，编码一种由457个氨基酸组成的单肽，推导的氨基酸序列中1～19位为信号肽序列，GenBank的登录号为AY840982。将该片段克隆到毕赤酵母(Pichia pastoris)分泌型表达载体pPIC9K上，获得表达重组质粒pPIC9K/cbh1，转化毕赤酵母GS115，所得重组子经PCR验证后进行诱导表达，筛选出一重组子GSp-15,经144 h诱导后，外切纤维二糖水解酶表达量为1.17 mg/mL，产酶活力为20.3 U/mL。

共表达PCV2衣壳蛋白和猪GM-CSF重组质粒的构建与体外表达

Construction of Recombinant DNA Plasmid Co-expressing Capsid Protein of
Porcine circovirus Type 2 and Porcine Granulocyte-macrophage Colony-stimulating Factor and Its Expression In vitro

宋勤叶;杨汉春;郭鑫;陈艳红;查振林

2006, 14(3): 307-311 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

将猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2, PCV2)orf2和猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(gm-csf)基因插入同一哺乳动物细胞表达载体pIRESneo中，构建出重组共表达质粒pIRES-orf2/gm-csf。以脂质体转染方法将重组质粒pIRES-orf2/gm-csf转染COS7细胞，经间接免疫荧光实验和集落刺激形成实验检测，结果表明orf2和gm-csf基因在COS7细胞中得到表达，转染细胞呈现特异性荧光，转染细胞培养上清能剌激猪骨髓细胞形成集落。重组质粒pIRES-orf2/gm-csf的成功构建为进一步研究猪圆环病毒2型的DNA疫苗奠定了基础。

HA基因密码子及表达载体优化的H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果比较

Comparation of Protection Effects of H5 Subtype Avian Influenza DNA Vaccine Optimized with HA Gene and Expressive Vector

姜永萍;张洪波;李呈军;步志高;邓国华;于康震;陈化兰

2006, 14(3): 301-306 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

为评估HA基因密码子优化及不同表达载体对H5亚型禽流感DNA疫苗免疫效果的影响，pCIHA5、pCAGGHA5 、pCIoptiHA5和 pCAGGoptiHA5分别以100 和10 μg剂量一次免疫3周龄SPF鸡，4周后分别用100 LD50的高致病力禽流感病毒(HPAIV) A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]鼻腔途径进行攻击，观察发病与死亡情况，分别于攻毒后第3、5和7无采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况，同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、AGP抗体的动态变化，对4种疫苗单次免疫的免疫保护效果进行比较评估。结果表明，100 μg剂量组中， pCAGGoptiHA5和pCAGGHA5 均可对免疫鸡形成100％完全保护（不发病、不致死和不排毒），pCIoptHA5(75%) 和pCIHA5(50%)仅可形成部分免疫保护；10 μg剂量免疫组中， pCAGGoptiHA5和pCAGGHA5 可对免疫鸡形成100％的保护（不发病和不致死），pCIoptiHA5可形成对免疫鸡的部分免疫保护(75%)，而pCIHA5则基本不能形成免疫保护。结果表明，HA基因密码子的优化以及鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平，增强免疫保护效果同时证明，通过密码子和载体的优化，可使H5亚型禽流感DNA疫苗有效免疫保护剂量降低至10 μg，其推广应用已具备充分的经济可行性。pCAGGoptiHA5作为免疫效果良好、成本低廉的优化DNA疫苗，有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。

苏云金芽孢杆菌vip2A(c)基因在昆虫细胞中的表达

Expression of vip2A(c) Gene from Bacillus thuringiensis in Insect Cell

师永霞;吕雷;徐炜;袁美妗;庞义

2006, 14(3): 401-405 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus, AcMNPV)Bac-to-Bac表达系统在粉蚊夜蛾(Trichoplusia ni ) TnHi5细胞中表达了GFP与Vip2A(c) 酶活成分区域的融合蛋白(GV2融合蛋白)，研究了该蛋白对昆虫细胞和病毒产生的影响。Bac-gfp DNA转染48 h后部分TnHi5细胞已经检测到荧光，48~120 h出现荧光的细胞数目增加，最后70％左右的细胞都有较强的荧光。而Bac-gv2 DNA转染后2~5 d仅有极少TnHi5细胞出现荧光且多呈零散分布，推测这可能是由于杆状病毒极晚期表达的GV2融合蛋白中的Vip2A对细胞骨架成分肌动蛋白进行ADP-核糖基化，从而影响了芽生型病毒粒子(BV)的正常产生或限制了BV在其它细胞间的传播。

苹果山梨醇脱氢酶(NAD-SDH)基因的克隆及其反义表达载体对农杆菌的转化

Cloning of NAD-SDH from Apple Fruit and Transformation to Agrobactrium tumefaciens from Its Antisense Expression Plasmid

管清美;马锋旺;梁东;程顺昌;金伟波

2006, 14(3): 440-441 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

脂肪组织RNA提取的三种方法比较与改进

Comparison and Improvement of Three Methods for Extracting Total RNA from Adipose

吴江维;杨公社;孙超

2006, 14(3): 444-445 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

3种野鲮亚科鱼类线粒体细胞色素b基因序列分析及种质鉴定

Sequence Analysis of Cytochrome b Genes from Three Kinds of Labeoninae Family Fishes and Germplasm Identification

张殿昌;江世贵;邵艳卿;黄燕琴;吕俊霖;朱彩艳

2006, 14(3): 446-447 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

藏猪SLA-DQA基因外显子2的PCR-RFLP多态性分析

Polymorphism Analysis of the Exon 2 of SLA-DQA Gene of Tibet Pig by PCR- RFLP

蒋岸岸;李华;于辉;李学伟;何志平;赵海全

2006, 14(3): 442-443 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai )微卫星DNA的筛选与引物设计

Isolation and Primer Designing of Microsatellite Marker in the Pacifi
Abalone(Haliotis discus hannai)

曹洁;常亚青;丁君;孙效文;鲁翠云;贾智英

2006, 14(3): 448-449 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

植物转座元件及其分子标记的研究进展

Progress on Plant Transposable Elements and Their Molecular Markers

代红艳;张志宏

2006, 14(3): 434-439 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

转座元件是基因组中可移动的DNA分子，在真核生物的基因和基因组进化中起着重要的作用。植物的转座元件分为反转录转座子和DNA转座子两大类，其中，反转录转座子又分为长末端重复序列(LTR)反转录转座子和非LTR反转录转座子两个亚类，而DNA转座子分为自主元件、非自主元件和微型反向重复转座元件(MITE)三种类型。基于植物转座元件的分子标记目前主要有序列特异扩增多态性(S-SAP)、MITE显示、转座子显示(TD)、MITE位点间多态性(IMP)、反转录转座子位点(IRAP)、反转录转座子-微卫星扩增多态性(REMAP)和基于反转录转座子插入多态性(RBIP)。综述了这些分子标记技术的原理及其在生物遗传多样性与系统进化分析、基因作图、品种鉴定等方面的应用。