农业生物技术学报

Analysis of Chromosome Karyotypes of Oreochromis aurea(♀), Siniperca chuatsi(♂) and Their Offspring

曹丽萍;丁炜东;贾永义;夏德全;吴婷婷

2006, 14(2): 187-190 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

采用人工授精法以奥利亚罗非鱼(Oreochromis aurea)为母本，鳜(Siniperca ahuasti)为父本，获得了能正常发育的后代。利用微量全血培养法对奥利亚罗非鱼、鳜及它们杂交后代的染色体数目和核型进行了分析，结果表明, 奥利亚罗非鱼染色体数目为2n =44，核型公式为 6sm+24st+14t，染色体臂数(NF)=50；鳜鱼为2n =48，核型公式为 8sm+4st+36t，NF=56；杂交后代为2n =44，核型公式为 6sm+26st+12t，NF=50。经对比分析，杂交后代与奥利亚罗非鱼的核型相似。

烟粉虱B型及二个非B型种群的SCAR分子标记

SCAR Molecular Markers of the B Biotype and Two Non-B Populations of the Whitefly, Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae)

臧连生;江彤;徐婧;刘树生;张友军

2006, 14(2): 208-212 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

用随机引物H16对浙江采集的烟粉虱(Bemisia tabaci)B型和2个非B型种群进行RAPD分子标记，结果表明: B型、非B型ZHJ-1和非B型ZHJ-2 3个种群分别能稳定地扩增出446、390和1317 bp的特异性片段。将3个种群的特异性片段分别克隆和测序，根据测序结果设计3对SCAR引物。通过PCR反应条件的优化，B型、非B 型ZHJ-1和非B型ZHJ-2 3个种群各自的SCAR引物分别能扩增出本种群的特异性条带，其大小依次为439、366和1238 bp，而其它种群与温室白粉虱(Trialeurodes vaporariorum )则无扩增。

甘薯肌醇-1-磷酸合成酶基因的克隆及序列分析

Cloning and Sequence Analysis of Myo Inositol-1-phosphate Synthase Gene in Sweetpotato

柳哲胜;刘庆昌;翟红;王玉萍

2006, 14(2): 219-225 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

甘薯(Ipomoea batatas (L.) Lam.)新品系农大603是从感茎线虫(Ditylenchus destructor)病品种徐薯18的辐照后代中获得的一个抗茎线虫病的突变体。以农大603和徐薯18块根的mRNA为模板，根据植物抗线虫病基因NBS保守氨基酸序列设计引物，进行 RT-PCR分析，发现农大603的肌醇-1-磷酸合成酶(Myo inositol-1-phosphate synthase , MIPS)基因的表达量高于徐薯18。采用3'RACE技术扩增出MIPS基因的3'末端cDNA。根据植物MIPS基因 5'端一段保守的氨基酸序列设计兼并引物，并与3'端的特异引物组合，扩增出该基因的5'端cDNA序列。DNA序列比对表明，甘薯MIPS基因与大豆(Glycine max)、番茄(Lycopersicon esculentum )的MIPS基因同源性较高，分别达83.63 %和83.89 %。甘薯MIPS基因全长cDNA的克隆，有利于进一步研究该基因与抗甘薯茎线虫病的关系。

豇豆胰蛋白酶抑制剂和硫氧还蛋白的融合表达和活性测定

Expression and Bioactivity Assay of Fusion Protein of
Cowpea Trypsin Inhibitor(CpTI) and Thioredoxin

畅文军王宇光雷禄旺

2006, 14(2): 226-230 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

采用融合蛋白表达技术，通过1个人工设计合成的柔性接头，将豇豆胰蛋白酶抑制剂(cowpea trypsin inhibitor,CpTI)基因与表达载体上的硫氧还蛋白(thioredoxin )基因连接，构建了融合表达载体。将表达载体转入大肠杆菌(Escherichia coli )GI724，通过色氨酸诱导获得高效表达，产物以可溶状态存在。活性测定显示，融合蛋白具有抑制胰蛋白酶的生物学活性。以大豆胰蛋白酶抑制剂为参照，将融合蛋白热处理后进行活性测定，发现它具有较好的热稳定性。将肠激酶(enterokinase)与融合蛋白在37 ℃作用16 h，可获得切掉thioredoxin的CpTI蛋白。活性测定显示，切除thioredoxin后CpTI的胰蛋白酶抑制活性比同样处理条件下的thioredoxin-CpTI明显下降，比活力仅为原来的80%，说明融合蛋白具有更高的稳定性。研究结果为thioredoxin-CpTI作为一种生物农药的应用奠定了基础。

芪合酶基因转化小白菜的研究*

Transgenic Plants of Brassica campestris with Resveratrol Synthase Gene

胡小平;商文静;蔡文启;韩青梅;康振生

2006, 14(2): 231-234 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用质粒pBin438构建了含有NPT Ⅱ基因和葡萄芪合酶(RS)基因的芪合酶组成型植物表达载体EHA105/pBinRS。用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导法将RS基因导入纯合系小白菜(Brassica campestris ssp. chinensis)品种中，经Kan抗性筛选、PCR及RT-PCR检测，RS基因已整合到小白菜基因组中并得到了表达，共获得了7株转基因植株。

韭菜的雄性不育无性系育种

Breeding of Allium tuberosum via Male-sterile Clone

李春玲;蒋钟仁;佟曦然

2006, 14(2): 235-240 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

田间发现的韭菜(Allium tuberosum)无花粉单株经鉴定为雄性不育而雌性可育后，利用组织培养技术将此雄性不育单株迅速扩繁为雄性不育无性系并作为杂交的母本，与其它优良父本杂交，从F1中快速选出了优良品系J-54和新品种海韭一号。雄性不育无性系能长期稳定地试管保存。从3个F1杂种后代和2个品种的后代中选育出无花粉单株,并用组织培养建立了5个相应的雄性不育无性系.

中国姜品种遗传多样性的研究与应用

RAPD Analysis of Genetic Diversity among Zingiber officinale Cultivars

高德民;刘振伟;樊守金

2006, 14(2): 245-249 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用RAPD技术对20个姜(Zingiber officinale)品种进行了遗传多样性的研究。从200多个引物中筛选出25个有效引物，共扩增出171条DNA带，其大小分布在100~3 500 bp之间，其中111条为多态性，约占总数的64.91%，平均每个引物的扩增带为6.8条。利用25个有效引物扩增的DNA带数计算出品种间的J系数，并进行UPGMA聚类分析，在此基础上，建立了中国姜品种亲缘关系系统树。在相似性系数0.67处，20个品种分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ类。Ⅰ类可分为A、B和C组；Ⅳ类可分为D和E组。其中，A组可再分为A1和A2亚组；B组可再分B1和B2亚组。各亚组内相似性系数较大，表明它们之间的亲缘关系较近，但也存在着一定的差异。

转基因产品中PAT蛋白的酶联免疫检测

Enzyme Linked Immunosorbent Assay for PAT Protein Detection in Genetically Modifed Rape

许文涛;黄昆仑;邓爱科;罗云波

2006, 14(2): 250-254 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

建立并优化了转基因油菜(Brassica campestris )中的PAT蛋白酶联免疫检测技术。首先通过Western杂交和酶活性分析鉴定了PAT蛋白的纯度和活性。然后以其为抗原免疫新西兰大白兔制备了PAT蛋白的多克隆抗体，并采用硫铵沉淀法和protein A-Sepharose 4B对其进行了纯化。所得抗体对PAT蛋白的检测限为2×10-5 mg/mL，且与植物源的几种结构功能相关蛋白均无交叉反应。然后对植物蛋白进行初步提取，应用酶联免疫检测技术对转基因油菜(MS1/RF1 and MS8/RF3)中的PAT蛋白进行了检测，结果表明ELISA能高效地鉴别转基因和非转基因油菜.

中国兔病毒性出血症病毒衣壳蛋白基因的克隆及遗传变异分析

Analysis and Sequencing of the Capsid Protein Gene of Rabbit hemorrhagic disease virus (RHDV) JX/97 Strain

刘光清;倪征;张玉颖;云涛;梁华丽;华炯刚;李双茂

2006, 14(2): 191-196 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

对中国兔病毒性出血症病毒(Rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)JX/97株的衣壳蛋白基因进行了克隆和测序。结果表明，该蛋白的核苷酸序列长度为1739 nt，推导的氨基酸序列为579 aa。利用分子生物学软件分析了该病毒与国内外22株RHDV的基因序列，结果显示，RHDV不同分离株之间的序列同源性几乎都在90％以上。衣壳蛋白基因的系统发生树分析结果表明，所选的RHDV参考毒株按照一定的遗传距离，可以分为4个基因群，基因群之间的距离有加大的趋势，表明RHDV受环境的影响有向不同方向演变的趋向，即RHDV在长期适应特定环境的过程中，有可能逐渐演变成各具特色的RHDV。

番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC基因的序列分析及其在大肠杆菌中的表达

Sequence Analysis of the σC Gene of Muscovy duck reovirus ZJ99 Strain and Its Expression in Escherichia coli

余旭平;何世成;朱军莉;金俊杰;郑新添

2006, 14(2): 197-202 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

参考已发表的番鸭呼肠孤病毒(Muscovy duck reovirus, mDRV)的S4序列，自行设计1对扩增σC基因的引物，对mDRV ZJ99株的RNA抽提物进行RT-PCR扩增，成功地获得了843 bp特异性的扩增片段(GenBank: AY619690)。将PCR产物克隆测序，BLASTn比较结果显示, mDRV ZJ99株σC基因与福建MW9710株对应基因的同源性为98％，与法国89026和89330株对应基因的同源性分别为92％和93%； BLASTp比较结果显示, ZJ99株编码的σC蛋白与MW9710、89026和89330株相应蛋白分别具有94％、89％、 89％同一性(identity)和95％、92％、93％相似性(similarity)。进一步将σC基因亚克隆至原核表达载体pET28a，转化大肠杆菌(Escherichia coli )BL21(DE3)，IPTG诱导阳性重组子，SDS-PAGE电泳检测发现, σC蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式高效表达，目的蛋白的表达量可达到细菌总蛋白的22.9％。

基因芯片技术检测5种马病毒的研究

Development of Diagnostic Gene Chip for Detecting Five Kinds of Virus in Horses

朱来华;梁成珠;陆承平;吴华;杨元杰;马丰忠;王树峰;于红光

2006, 14(2): 203-207 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

通过分子克隆技术获得马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus 1, EHV1)、马动脉炎病毒(Equine arteritis virus , EAV)、马流感病毒(Equine influenza virus, EIV)、马传染性贫血病毒(Equine infectious anaemia virus , EIAV)和东部马脑脊髓炎病毒(Eastern equine encephalomyelitis virus, EEEV)等5种病毒各一段高度保守的特异性基因片段，用芯片点样仪逐点分配到处理过的玻片上，制备成检测芯片。提取样品中的RNA，进行反转录和荧光标记后滴加到芯片上进行特异性杂交，对杂交结果进行扫描检测和计算机软件分析。结果显示，制备的基因芯片可同时检测和鉴别上述5种病毒，可检测到阳性杂交信号的最高稀释度为10-6的病毒液，约25个病毒DNA拷贝，但其它病毒材料未见红色荧光信号，证明了本方法的特异性。在进口马的隔离检疫期间，采集马鼻肺炎、马动脉炎中和抗体阳性但病毒分离阴性马匹的白细胞悬液，分别在EHV1和EAV位点处可检测到阳性杂交信号。证明基因芯片技术不但快速、准确和敏感，而且可同时进行多种病毒的检测。

60Co-γ射线对菊花组培苗的诱变效应

Effect of 60Co-γ Rays on In vitro Mutagenesis of Chrysanthemum morifolium Ramat

王晶;刘录祥;赵世荣;郭会君;赵林姝;陈文华

2006, 14(2): 241-244 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

对菊花(Chrysanthemum morifolium Ramat.)品种秋之山的组培苗, 采用5～30 Gy的60Co-γ射线照射处理。研究了γ射线对组培苗生长、增殖和生根的影响以及对组培再生植株移栽后生长开花的影响。结果表明20 Gy是γ射线处理菊花组培苗的致死剂量；从生根和继代培养生长和增殖的结果看，诱变处理的最佳剂量在10 Gy左右；组培再生植株移栽后发现，10 Gy处理的植株中花色变异率为8.2%。与对照花鲜艳的纯黄色相比，变异花增加了不同深浅的红色素，且突变植株均为同质稳定突变。

鸡胃肠道生长抑素(SS) mRNA表达的组织特异性

Tissue Specificity of Somatostatin(SS) mRNA Expression
in Gastrointestinal Tracts of Chicken

王修启;谭会泽;苏海林;代发文;冯定远

2006, 14(2): 170-173 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

以30 d Arbor Acre (AA)肉鸡为模型，采集胃肠道样品，采用相对定量RT-PCR方法研究了生长抑素(SS ) mRNA在鸡胃肠道分布的组织特异性。结果表明，腺胃SS mRNA的表达量高于所有肠段，差异极显著 (P＜0.01)；十二指肠和空肠SS mRNA的表达丰度相似，二者均显著高于回肠(P＜0.05)。定性研究显示，肌胃和结直肠均有SS mRNA表达，但其表达量显著低于腺胃、十二指肠、空肠和回肠。SS mRNA在主要的消化(腺胃)、吸收(十二指肠和空肠前段)器官的高丰度表达，提示SS对营养物质的消化吸收具有重要的调控作用。

猪脂蛋白脂酶基因片段的克隆及不同体重的表达差异

Cloning of Lipoprotein Lipase(LPL)Gene of Swine and the Difference of LPL Gene Expression at Different Avoirdupois Stages

单体中;汪以真;李民

2006, 14(2): 151-155 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

从杜长大母猪的肠系膜脂肪中提取基因组RNA，用RT-PCR扩增脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase LPL)基因，获得1条约689 bp的片段，以pGEM-T Easy vector 为载体，将该基因片断克隆到大肠杆菌(Escherichia coli )DH5α中。从筛选的阳性克隆中分离出LPL基因，测定其序列。分析表明，该片段为LPL cDNA的部分序列，编码229个氨基酸组成的多肽。研究得到的基因片段与报道的猪脂肪组织中LPL cDNA部分序列同源性达到98%，氨基酸序列同源性达到99.1％。以LPL基因片段的克隆为基础，构建了优化的半定量RT-PCR法，以β-actin 为内标，研究不同体重猪脂肪组织LPL基因表达的差异。结果发现，从刚出生到30 kg，LPL基因表达呈上升趋势，在30～50 kg，LPL基因表达呈下降趋势，50～90 kg，LPL基因表达又呈上升趋势。

梅山猪等5个群体中钙蛋白酶抑制蛋白基因的多态性及其与肉质和背膘厚的关系

Analysis of Calpastatin Gene Polymorphism and Its Associations with Pork Quality and Backfat in Five Pig Populations

孙立彬;孟和;李婧;李长龙;白春艳;潘玉春

2006, 14(2): 156-161 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin，CAST)是钙蛋白酶系统的内源性抑制剂，并且已被确定能影响宰后肉的嫩度。采用PCR-RFLP技术，分析了CAST基因在5个实验群体110头猪中的多态性分布及其与肉质性状和背膘厚间的相关。结果表明, CAST基因存在4个多态位点，且在5个群体中的分布存在极显著差异。在A、B位点上，基因型效应仅对肌肉嫩度有显著影响(P <0.05)，而基因效应中基因的加性效应显著(P<0.05)，显性效应不显著；在C位点上，基因型效应对所有性状的影响都未达到显著水平(P >0.05)。在D位点上，基因型效应只对背膘厚有显著影响(P<0.05)，而基因效应中，基因的显性效应极显著(P<0.01)，加性效应不显著。因此, 可以把CAST基因作为影响猪肉质性状和屠体性状的候选基因。

与PPAR基因连锁的5个微卫星标记与猪肉质性状的相关性*

Effects of 5 Microsatellite DNA Markers Linked with PPAR Gene on Meat Quality Traits in Pig

邵根宝;贾超;刘红林;赵茹茜;丁红梅;陈杰;黄瑞华;徐银学

2006, 14(2): 162-165 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

从已公布的猪13号染色体连锁图谱中选择与PPAR(peroxisome proliferator activated receptor)基因连锁的5个微卫星位点，在苏太猪群体中对这些位点进行群体遗传学特性分析。结果表明, 各位点等位基因数6~9个，杂合度0.59~0.81，多态信息含量0.51~0.76；背膘厚与嫩度、系水力和肌内脂间的相关系数分别为-0.358、0.020和0.311，且背膘厚与嫩度及肌内脂间的相关性达到极显著水平(P <0.01）。方差分析结果显示, 微卫星位点SW482对背膘厚影响显著(P <0.05)；SW937对系水力影响达到极显著水平(P <0.01)；其它位点S0222、S0281和S0021对各性状影响均未达到显著水平(P >0.05)。

小尾寒羊MTNR1A基因外显子2的克隆与序列分析

Cloning and Sequence Analysis of Exon 2 of MTNR1A Gene in Small Tail Han Sheep

程笃学;储明星;刘文忠;方丽;叶素成

2006, 14(2): 166-169 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

对常年发情的绵羊品种小尾寒羊和季节性发情的绵羊品种多赛特羊共20只母羊的褪黑激素受体1A(melatonin receptor 1A，MTNR1A)基因外显子2的824 bp扩增产物进行了克隆测序及序列比较分析。结果表明, 小尾寒羊MTNR1A基因外显子2的核苷酸序列与已发表的绵羊序列(GenBank登录号U14109)完全相同。小尾寒羊与多赛特羊MTNR1A基因外显子2的差异由5个变化的核苷酸(分别为C329T、G355T、C566T、C580A和A675G)组成，核苷酸同源性为99.4%。小尾寒羊与山羊、母牛、猪、人、小鼠、挪威大鼠、西伯利亚仓鼠和鸡之间MTNR1A基因外显子2的核苷酸序列同源性为73.2%～98.5%，氨基酸序列同源性为78.5%～98.5%。

PHAs合酶phaC2基因转化烟草叶绿体的研究

Stable Transformation of phaC2 Gene in Tobacco Chloroplast Genome

王玉华;吴忠义;张秀海;黄丛林;杨清

2006, 14(2): 213-218 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

中长链羟基脂肪酸聚酯 (medium-chain-length-PHAs, mcl-PHAs) 属于微生物聚酯。Ⅱ型PHA合酶是mcl-PHAs生物合成途径中的关键酶。将编码Ⅱ型PHA合酶的基因phaC2与水稻(Oryza sativa )叶绿体psbA基因的启动子和终止子构建表达盒(RpsbA-pro-phaC2-RpsbA-ter)，连同壮观霉素抗性基因aadA表达盒(prrn-aadA-TpsbA-ter)一起克隆进烟草叶绿体基因组同源片段rbcL和accD中，构建了烟草叶绿体转化表达载体pTC2。基因枪法转化烟草(Nicotiana tobacum L.)叶片，获得具有壮观霉素抗性的转基因烟草。对T0代和T1代转基因植株的PCR和Southern blot鉴定结果表明, 外源基因确已整合进烟草叶绿体基因组中，T1代转基因植株已达同质化。RT-PCR分析结果证实phaC2基因已在转录水平上表达。转基因植株的正反交试验证明外源基因在转基因后代中遵循母性遗传规律，不存在转基因的花粉漂移现象。通过叶绿体遗传转化, 实现中长链羟基脂肪酸聚酯合成关键酶基因phaC2在烟草叶绿体基因组中的稳定转化。

柑橘速衰病毒CP基因的序列变异性分析

Analysis of Sequence Variability in CP Gene of Citrus tristeza virus

张建坤洪霓王国平

2006, 14(2): 259-264 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

以提取的宽皮橘(Citrus reticulata Blanco)总RNA为模板，用RT-PCR扩增柑橘速衰病毒(Citrus tristeza virus, CTV)的外壳蛋白基因(CP )，扩增产物经克隆与测序证实，来自湖南道县和江西崇义的3份样品(HN、JX-1和JX-2)都感染了CTV。单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism, SSCP)分析表明，来源于3份样品的CTV的CP基因在遗传上存在变异，其中来自HN和JX-1的CTV的CP基因序列仅含有1种序列类型，而来自JX-2的CP基因序列群体则含有2种主序列。序列分析表明，克隆HN-K与葡萄牙分离物28C和以色列茎陷分离物VT的同源性均为98%；克隆JX-1-1与印度茎馅分离物Pune和Bangalore的同源性分别达98%和99%；克隆JX-2-7、JX-2-17与日本苗黄分离物NUagA和美国加利福尼亚严重茎陷分离物SY568相比，同源性为97%%~98%；4个克隆与佛罗里达速衰分离物T36、弱毒分离物T30和西班牙弱毒分离物T385的同源性仅有91%%~93%。系统发育分析显示，4个中国克隆分属3个不同的族，与地理起源不同的茎陷或苗黄分离物的亲源关系更近，而与速衰和弱毒分离物的亲源关系更远，暗示CTV的地理起源与其核苷酸距离之间没有相关性。

根癌农杆菌Ti和AT质粒基因组中的分泌型信号肽分析

Analysis of Sec-type Signal Peptides in the Ti and AT Plasmids of Agrobacterium tumefaciens C58 Cereon

罗灯涛;范继英;范成明;赵明富;何月秋

2006, 14(2): 265-268 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

利用Signal P3.0和PrediSi软件结合L值和TMHMM筛选，对根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens )C58 Cereon菌株的Ti和AT质粒所编码的745个ORF编码蛋白中的信号肽进行了预测，发现35条为分泌型蛋白，其中6条属于RR-motif型信号肽，2条蛋白的信号肽为细菌素-信息素型信号肽，新注释了24条分泌型信号肽，其中1条来自Ti质粒，23条来自AT质粒的蛋白。这些信号肽N结构域的长度变化为2~19 aa,平均为6.8 aa，H结构域的长度变化为8~34 aa，平均为17.1 aa。

α-半乳糖苷酶基因Mel1在毕赤酵母中的组成型表达

Constitutive Expression of α-galactosidase Mel1 Gene in Pichia pastoris

张学文1;唐香山;张金谌;章怀云

2006, 14(2): 269-272 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

用PCR方法从酵母(Saccharomyces cerevisiae ) AH109中扩增出α-半乳糖苷酶的Mel1基因，将其克隆至整合型载体pGAPZαA中构建成组成型分泌表达酶产物的重组质粒pGAPZα-Mel1。将线性化的重组质粒pGAPZα-Mel1电击转化至毕赤酵母(Pichia pastoris ) KM71，在含有100 mg/mL zeocin和预先涂布有X-α-gal的YPDS平板上选择蓝色阳性菌落。发酵培养酵母的上清经SDS-PAGE分析，在53 kD处有特异带；经非变性PAGE凝胶电泳，与显色底物的反应，检测到α-半乳糖苷酶活性带。重组菌pGAPZα-Mel1 /KM71摇瓶发酵6 d后，培养液α-半乳糖苷酶粗酶活性为12 U/mL。

烟草染色体倍性快速鉴定方法

Rapid Determination of Ploidy Level of Chromosome in Tobacco(Nicotiana tabacum)

朱惠琴, 张宪银, 薛庆中

2006, 14(2): 255-258 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

摘要: 对两个杂交组合(G28 × NC2326和K326 × Coker176) F1烟草 (Nicotiana tabacum) 花药培养诱导出763个不同倍性植株。基于植株的花和种子结实率常规鉴定倍性水平比较，用气孔保卫细胞叶绿体数目预测植株倍性准确率达93.52%。表明采用气孔保卫细胞叶绿体计数法可以在苗期快速、准确地确定植株染色体倍性。同时, 在移栽前间接地鉴定、筛选出叶绿体数<14的单倍体苗，作进一步秋水仙碱加倍处理，以减少对单倍体材料的浪费，加快DH群体构建速度。

藏系绵羊乳酸脱氢酶A的分离纯化和酶学性质

Purification and Properties of Tibetan Sheep Lactate Dehydrogenase-A

司晓辉;赵兴波;郑玉才;文勇立;许湲;金素钰;杨雪

2006, 14(2): 178-182 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

采用HiTrapTM Blue HP亲和层析和DEAE-Sephadex离子交换层析分离方法，对1只雄性高原藏系绵羊(Ovis aries) 大腿骨骼肌乳酸脱氢酶-A(LDH-A)进行了分离纯化，并对其酶学参数进行了测定。纯化的藏系绵羊乳酸脱氢酶-A比活力为100.94 U/mg蛋白，纯化倍数为 12.0。经PAGE和SDS-PAGE分析均显示1条带。酶动力学参数测定显示：Km(米氏常数)NADH(reduced nicotinamide adenine denucleotide)=0.022，Km丙酮酸钠=0.444，均比家兔的高；丙酮酸还原反应的最适pH约为5.8；草酸和二价汞能抑制LDH-A的活力；二价汞是LDH-A的可逆性抑制剂。

鸡胚原始生殖细胞的分离、培养及鉴定

Isolation, Culture and Characterization of Chicken Primordial Germ Cells

唐新燕;曾卫东;米玉玲;刘红云;张才乔

2006, 14(2): 174-177 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

采用Ficoll密度梯度离心法分离第19期(孵化68～72 h)艾维茵鸡(Gallus domesticus)生殖嵴原始生殖细胞(PGC)，通过体细胞-PGC共培养进行了原代和传代培养，对PGC进行了碱性磷酸酶(AKP)和过碘酸雪夫氏反应(PAS)鉴定，并用细胞增殖核抗原(PCNA)免疫细胞化学检测了传代于鸡胚饲养层上PGC的增殖活性。培养的PGC经AKP和PAS鉴定均为阳性，AKP阳性为红棕色，PAS阳性为深红色，PCNA染色显示PGC集落为红棕色，表明PGC处于增殖状态。同时比较了不同体外培养条件(5%~20%胎牛血清(FCS), ITS培养液(M199+ 10 μg/mL 胰岛素+5 μg/mL转铁蛋白+3×10-8 mol/L亚硒酸钠), 条件培养液, 15%FCS+ITS, 15%FCS+40% 条件培养液)下PGC增殖情况。发现未经密度梯度离心的PGC生长较离心的PGC好，且5%FCS在原代培养中起较好的促增殖作用；而传代培养时在不同培养条件下，5%FCS组或ITS组形成的PGC集落的直径较大，而仅用单纯的条件培养液效果并不明显。结果表明除鸡胚饲养层可作为PGC增殖的支持体系外，在体细胞-PGC共培养方式下5%FCS或单独的ITS也可作为PGC体外增殖的一种培养体系。

Semi-nested PCR检测饲料中牛羊源成分

Identification of Bovine and Sheep Derived Materials in Feedstuff by Semi-nested PCR

闻伟刚;崔俊霞;赵秀玲

2006, 14(2): 183-186 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

加强对进口饲料中牛羊源成分的检测是防止疯牛病和痒病传播的一个重要措施。根据已发表的牛和羊特异性基因及引物序列，分别设计了1条牛和羊特异性semi-nested PCR引物，并采用semi-nested PCR技术对饲料中的牛和羊成分进行了扩增检测。结果表明，semi-nested PCR能够扩增得到247 bp的牛特异性基因条带和214 bp的羊特异性基因条带，其对饲料中牛或羊源性成分的检测灵敏度可达到0.00001%～0.0001%，比普通PCR检测灵敏度要高出103倍；对牛或羊成分DNA的检测灵敏度可以达到10-6～10-5 ng，比普通PCR检测灵敏度要高出105倍以上。该技术具有快速、灵敏和结果稳定的特点，是检测饲料中痕量牛羊源成分的一种有效方法。

高粱基因组遗传图谱构建的研究进展

Advances in Genetic Mapping of Sorghum Genome

仪治本;梁小红;赵威军;孙毅;闫敏;崔丽霞

2006, 14(2): 279-285 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

高粱 (Sorghum bicolor L. Moench) 基因组分子遗传连锁图谱的构建始于20世纪90年代。覆盖高粱全基因组的高密度分子遗传连锁图谱已构建完成，正在进行高粱遗传图谱与物理图谱的整合，把遗传连锁群与相应的染色体对应起来, 并已初步确定了染色体着丝粒、长短臂、核仁组织者区域(NOR)等染色体重要结构在遗传连锁图上的位置。随着研究的深入，高粱全基因组完全测序和高粱功能基因组学的研究即将全面启动.

偏分离及对植物遗传作图的影响

Segregation Distortion and Its Effect on Genetic Mapping in Plants

宋宪亮;孙学振;张天真

2006, 14(2): 286-292 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

偏分离是遗传作图中的普遍现象，是一种强有力的进化动力。在植物方面，标记偏分离的比例、程度、来源、遗传效应等因物种、群体类型、杂交组合、标记类型等的不同而有很大变化。从偏分离的表现和共同特征、偏分离产生的原因、偏分离基因位点的标记定位、偏分离对遗传作图的影响及克服方法等方面，对植物(主要是作物)中的偏分离研究进展进行了综合分析。

基因融合技术及其应用

echnique and Applications of Fusion Gene

刘岩;于涟

2006, 14(2): 273-278 | doi: | Full text (HTML) (1 KB) |

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摘要

基因融合技术以其快捷、高效生产多功能蛋白的优势，近年来在生物学领域中得到了愈来愈广泛的应用，结合本实验室的相关研究，简要综述基因融合技术、影响基因融合的主要因素以及融合基因的主要应用。