通过在不同模板DNA浓度（0.2~16 ng/μL）、不同转基因含量（0.05%~50%W/W ）以及不同模板存放温度（22℃、4℃和－20℃）和存放时间（1、2、3周和1，3个月）条件下进行转基因水稻外源成分的定性PCR检测，发现当模板浓度在0.4 ng/μL以上时所有引物均能扩增出目标片段，对于转基因含量为1.0%和0.1%的混合样品，能稳定检测出转基因成分所需的DNA最低浓度分别为1和2~4 ng/μL。模板DNA的不同温度存放条件对检测没有明显影响，长时间存放后PCR扩增产物条带亮度有所减弱。

对南阳牛胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(IGF-IR)、钙激活中性蛋白Ⅱ(CAPN Ⅱ)和解偶联蛋白3(UCP 3)3个位点PCR-RFLP与生长性状进行相关分析。在所研究群体中，IGF-IR/TaqⅠ多态位点上BB型个体仅检测到2头，IGF-IR/TaqⅠ位点等位基因A和CAPN Ⅱ/HhaⅠ位点等位基因B为优势等位基因。南阳牛在IGF-IR/TaqⅠ和CAPNⅡ/HhaⅠ位点处于Hardy-Weinberg平衡状态，在UCP 3/BglⅠ位点偏离Hardy- Weinberg平衡状态。相关分析表明，IGF-IR/TaqⅠ位点不同基因型对南阳牛生长性状影响不显著。CAPN Ⅱ/HhaⅠ位点对6月龄的生长性状影响显著(P<0.05)；对不同生长阶段的体协长和胸围影响显著(P<0.05或P<0.01)。UCP 3/BglⅠ位点对6月龄的体重、体高和体协长，24月龄体高、体协长和胸围影响显著(P<0.05)。在CAPN Ⅱ/HhaⅠ和UCP 3/BglⅠ位点上，南阳牛AB型个体生长性状表现最好。CAPN Ⅱ/HhaⅠ和UCP 3/BglⅠ多态可以作为南阳牛早期选育的有效标记。

设计5对引物P1~P5，采用PCR-SSCP技术检测210头荷斯坦母牛DNA依赖性蛋白激酶(DNA-dependent protein kinase, PRKDC)基因部分序列的多态性。结果发现P2扩增的外显子区域存在G34126A 1个突变位点，导致丝氨酸变为天冬酰胺；P3的扩增产物存在C77353T、T77384G、C77406T和77 408 bp处C缺失4个突变位点。P2扩增产物经SSCP分析有AA、AB和BB 3种基因型，其频率分别为0.186、0.433和0.381；P3扩增片段经SSCP分析有CC、CD、DD、CE和DE 5种基因型，其频率分别为0.786、0.129、0.009、0.067和0.009。用最小二乘法分析PRKDC基因多态性与荷斯坦母牛体细胞评分(somatic cell score，SCS)的关系，结果表明：对于P2扩增产物多态位点，AA基因型SCS最小二乘均值显著低于AB和BB基因型所对应的值(均为P<0.05)，AB和BB基因型SCS最小二乘均值差异不显著(P>0.05)；对乳房炎抗性，AA是最有利基因型，BB是最不利基因型；对于P3扩增产物多态位点，CC、CD、DD、CE和DE基因型SCS最小二乘均值差异均不显著(P>0.05)。研究结果初步表明PRKDC基因G34126A多态位点的A等位基因是提高奶牛乳房炎抗性的一个潜在的DNA标记。

酰基辅酶A∶二脂酰甘油酰基转移酶（acyl-coA：diacylglycerol acyltransferase, DGAT）是催化甘油三酯合成最后一步反应的关键酶，包括DGAT1和DGAT2两种；阐明其在发育过程中的表达规律对于找到控制中外猪种脂肪沉积能力差异的基因十分必要。本研究分别用RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR的方法分别对莱芜猪和杜洛克3日龄仔猪和成年猪背膘组织中DGAT1和DGAT2 mRNA表达量进行了分析。结果表明，莱芜猪和杜洛克成年猪DGAT1 mRNA的表达量均高于3日龄仔猪，分别为5.0倍和2.7倍；成年猪DGAT2 mRNA表达量高于3日龄仔猪，分别为27.6倍（P<0.01）和4.8倍（P<0.05）。两品种成年猪和3日龄仔猪DGAT2基因表达量的变化均高于DGAT1。品种间同一发育时期比较，杜洛克3日龄仔猪背膘组织中DGAT2基因的表达量高于莱芜猪，但成年莱芜猪背膘组织中DGAT2基因的表达量高于杜洛克，差异均不显著（P>0.05）。提示DGAT2基因可能与中外猪品种脂肪沉积能力的差异有关。

本研究以β2-肾上腺素能受体（β2-adrenergic receptor，β2-AR）基因的保守序列设计了1对PCR引物，通过PCR技术首次获得了萨福克、小尾寒羊和中国美利奴（新疆型）3个绵羊（Ovis aries）品种的β2-AR基因（GenBank登录号分别为EU707939、EU707940和EU707941），该基因含一个1 257 bp的开放阅读框（ORF），编码418个氨基酸残基。核苷酸序列分析显示，绵羊β2-AR基因与牛、猪、大鼠和人的相似性分别为98.4%、88.5%、84.2%和80.5%。通过基因合成技术合成了双拷贝的绵羊β2-AR第二细胞外环编码区DNA，并将其与pET32C（+）重组。重组菌以1 mmol/L IPTG诱导，通过SDS-PAGE 和Western blot 分析，绵羊β2-AR第二细胞外环融合蛋白在大肠杆菌（Escherichia coli） BL21 (DE3)中成功表达，表达产物分子量约为26 kD，表达水平最高占菌体总蛋白的40.3%。

采用PCR-SSCP和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术检测类固醇21-羟化酶基因（steroid 21-hydroxylase，CYP21）10个外显子在山羊（Capra hircus）低繁殖力品种(安哥拉山羊和内蒙古绒山羊)、中等繁殖力品种(波尔山羊)和高繁殖力品种(济宁青山羊)中的碱基变异，同时研究该基因对济宁青山羊高繁殖力的影响。结果表明，10对引物中仅引物P10扩增片段存在多态性。对于P10扩增产物，在内蒙古绒山羊、波尔山羊和济宁青山羊中检测到AA、AB和BB基因型，在安哥拉山羊中检测到AA和AB基因型；测序分析发现，BB与AA基因型相比发生了A2789C、C2791A、G2818A、G2851C、G2852T和G2854A的突变，在第2 821与2 822位发生了两个碱基CG的缺失突变，导致426~448位共有19个氨基酸发生改变；济宁青山羊BB和AB基因型产羔数最小二乘均值分别比AA基因型的多0.81只（P<0.05）和0.47只（P<0.05），BB和AB基因型之间差异不显著（P>0.05）。研究结果初步表明CYP21基因的B等位基因是提高山羊产羔数的一个潜在有效的DNA标记。

为了研究藏绵羊(Ovis aries)DRB3基因的多态性，确定其等位基因数、等位基因间的核苷酸多态位点、变异类型，以及分析各等位基因间的遗传关系和进化意义，研究采用PCR-SSCP方法检测了500只藏绵羊DRB3基因第2外显子的多态性，并克隆、测序群体内变异产生的各等位基因。结果表明藏绵羊DRB3基因第2外显子表现了37个等位基因，37个单倍型序列分析发现82个核苷酸多态位点；37个单倍型序列与GenBank下载序列对比分析，结果表明35个DRB3的等位基因是本研究首次发现；37个DRB3基因外显子2的单倍型序列NJ系统发育树呈2支分化趋势。研究认为藏绵羊DRB3基因第2外显子具有丰富的遗传多态性；藏绵羊DRB3基因最初是由2个等位基因突变分化成两大类等位基因的。

本研究的目的是通过分子克隆、原核表达和蛋白纯化技术获得山羊 GST-Sox2 融合蛋白。用RT-PCR方法从山羊(Ｃａｐｒａ ｈｉｒｃｕｓ)肠组织克隆了c-Myc基因, 通过TA克隆，构建了pMD18-T-Myc 质粒。 DNA测序证明，山羊c-Myc全长cDNA约 1 320 bp，该序列包含一个完整的开放阅读框，编码 439 个氨基酸，经分析该序列与绵羊(Ovis aries)的c-Myc序列同源性为 99.2 %。将该 cDNA 片段亚克隆至pGEX-KG载体，构建了重组质粒pGEX-KG-Myc。 经酶切鉴定和测序，将重组质粒导入大肠杆菌(Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ)BL21，由IPTG诱导表达，以谷胱甘肽-Sepharose 4B 亲和纯化 GST-Myc 融合蛋白。SDS-PAGE 分析表明，纯化的 GST-Myc 融合蛋白 约 75 kD，与预期值相符，且呈现清晰的单一条带。Western blot 检测证实，该融合蛋白能够被GST抗体所识别。本实验克隆了山羊c-Myc基因，获得了高纯度的 GST-Myc 融合蛋白，为其多克隆或单克隆抗体的制备提供了基础资料，为山羊 iPS 细胞 (induced pluripotent stem cells)检测创造了条件。

胚盘下腔显微注射和卵黄囊血管显微注射是向鸡胚中导入基因等外源物质的常用方法。本研究从实验操作难度、外源基因导入效果、对鸡胚存活率的影响等方面比较了这两种方法的优缺点。实验结果表明，胚盘下腔显微注射操作较简单，在鸡胚发育的不同日龄直至出雏后都可以检测到非整合的外源基因的存在，经胚盘下腔显微注射的鸡胚的存活率为9.5%；卵黄囊血管显微注射操作难度大，在不同日龄及出雏鸡只中也可以检测到外源基因的存在，外源质粒仍以游离状态存在，并未与宿主基因组发生整合，经卵黄囊血管注射的鸡胚的存活率为 35.7%。两者各有利弊，研究中应根据实验目的、导入外源物质的作用时间、样本量的多少选择适当的注射方法。

利用21个微卫星标记对2个世代(0世代和1世代)的边鸡(Gallus gallus)群体的遗传结构进行检测，同时通过分析世代间遗传差异检测保种效果。结果表明，21个微卫星标记在2个世代的边鸡群体中共检测到122个等位基因，其中102个为两个世代所共有，19个为0世代所特有。0世代和1世代的边鸡群体的平均多态信息含量(PIC)分别为0.5473和0.5437；平均期望杂合度分别(He)为0.5967和0.6009；近交系数(Fis)分别为0.233和0.134。反映边鸡群体的遗传多样性较丰富，经过一个世代的选育，PIC和He两个指标维持在原有水平，而群体的近交系数有所下降，说明采用的保种方法很好地保存了边鸡的遗传多样性，同时避免了近交程度过高而导致群体出现近交衰退。

利用AG490特异性抑制剂阻断Janus蛋白酪氨酸激酶2（JAK2）/信号转导和转录激活子3（STAT3）信号通路，研究该通路对骨骼肌发育和能量代谢相关基因mRNA表达水平的影响。雄性健康昆明小白鼠（Mus musculus），用JAK2特异性抑制剂AG490 连续腹腔注射15 d，定期测体重和体温，小鼠处死后取腿肌提取总RNA，利用RT-PCR检测JAK2/STAT3信号通路关键因子JAK2和STAT3、骨骼肌发育相关基因成肌分化因子（MyoD）和生肌决定因子（Myf5）及能量代谢相关基因肝X受体（LXRα）和解偶联蛋白3（UCP3）mRNA表达。结果显示，与对照组相比，处理组小鼠体重下降，差异显著（P＜0.05）；小鼠体温维持在正常浮动范围内；JAK2和 STAT3 mRNA表达量下降，差异显著（P＜0.05）；骨骼肌发育相关基因MyoD 和Myf5 mRNA表达量下降，差异极显著（P＜0.01）；能量代谢相关基因LXRα和UCP3 mRNA表达量下降，差异极显著（P＜0.01）。 结果提示JAK2/STAT3信号通路可通过降低骨骼肌发育和能量代谢相关基因的mRNA表达而调节骨骼肌发育和能量代谢。

为了获得优良品种陕253有关ω-醇溶蛋白基因的相关信息，根据已报道的ω-醇溶蛋白基因序列设计特异引物，采用PCR方法对小麦(Triticum aestivum L.)品种陕253总DNA进行扩增，回收1 000 bp左右的片段，经纯化、克隆并测序，获得5个不同的ω-醇溶蛋白新基因，命名为Gli-S253-1、Gli-S253-2、Gli-S253-3、Gli-S253-4和Gli-S253-5，GenBank登录号分别为：GQ423428、GQ423429、GQ423430、GQ423431和GQ423432。序列分析表明：(1) ω-醇溶蛋白基因沉默主要有4种类型(Q→*、I→*、R→*和W→*)，并以第一种类型为主 (占66.6%)；(2) 从三联体密码角度看，谷氨酰胺(Q)的两种编码方式最容易发生沉默突变(CAA→TAA和CAG→TAG)；(3) 从突变位点来看，沉默主要发生于三联体密码的第一位碱基(占77.8%)，第二位碱基发生突变的频率占33.3%，但未见第三位沉默突变；GQ423428出现了罕见的ATA→TAA类沉默，同时涉及两个位点的变异；(4) 就基因沉默突变的数目而言，GQ423428和GQ423429各高达6次，其中4个位点(349、373、478和592)为上述5条记录所共有；(5) 从编码成熟蛋白的结构上看，沉默突变主要集中于ω-醇溶蛋白重复区，信号肽区及N-端区未发现此类变异；(6) 进化分析表明，小麦族的ω-gliadin/secalin分成3支，其中小麦来源的ω-gliadin聚成一支。上述结果表明，本研究从陕253成功分离到5条存在丰富多样性的ω-醇溶蛋白编码基因，为深入研究优质的来源及分子辅助育种提供参考。

为明确小麦（Triticum aestivum）-柔软滨麦草（Leymus mollis (Trin.) Hara）易位系M8657-1的抗条锈性，用中国小麦条锈菌（Puccinia striiform f.sp. stritici）流行小种条中30号、条中31号、水源11-4和水源11-11生理小种，对M8657-1和铭贤169的杂交后代进行苗期抗条锈性遗传分析。结果表明，易位系M8657-1对条中30号和水源11-11的抗条锈性均1对隐性核基因控制；对条中31号的抗条锈性由2对显性核基因（互补作用）控制；对水源11-4的抗条锈性由1对显性核基因控制。将控制水源11-4抗病性的基因暂时命名为YrElm1-4，以接种水源11-4的F2正交群体为研究对象，应用BSA法进行了SSR分析。从320对SSR引物组合中筛选到3个与主效抗病基因YrElm1-4连锁的多态性微卫星标记，它们分别是Xgwm636、Xwmc522和Xwmc453，根据3个微卫星标记位点的染色体位置，推出YrElm1-4位于小麦2AS染色体上，这3个标记可用于分子标记辅助育种。

对分离自西北部分地区鸡眼草(Kummerowia striata)的53株根瘤菌，进行唯一碳源和氮源利用、抗生素、染料和苯酚抗性、耐盐性等98项生理生化性状测定，并结合16S rDNA PCR-RFLP分析，对供试菌株进行了遗传多样性研究。结果表明，不同地理来源，甚至来源于同一地区的不同菌株在碳、氮源利用、耐盐性、对苯酚抗性程度等方面存在着一定差异，12.5%的菌株能耐受300 μg/mL氯霉素，58.9%的菌株能耐受2% NaCl，38%的菌株能耐受700 mg/L苯酚。通过16S rDNA PCR-RFLP分析，53株供试菌株分别属于慢生根瘤菌属(Bradyrhizobium)、中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium)、根瘤菌属(Rhizobium)、中华根瘤菌属(Sinorhizobium)和土壤杆菌属(Agrobacterium)，说明分离自鸡眼草的根瘤菌在种及属的水平上具有非常丰富的遗传多样性。

为研究纳米银对 PCR 体系中 DNA 合成的影响及其作用的分子机制，把不同粒径(38、61、83和130 nm)、不同浓度(5、10、25、50、100和250 μg/mL)的纳米银加入PCR体系中，观察纳米银粒子对DNA合成量的影响；并用紫外可见光谱方法分析其作用机制。结果显示，38和61 nm纳米银对PCR体系中的DNA合成的影响明显强于83 和130 nm纳米银组，抑制作用呈现较为明显的粒径-效应关系。在不同浓度纳米银对PCR体系中DNA合成量的影响中发现，纳米银浓度≥10 μg/mL时，纳米银可明显抑制PCR体系中的DNA合成，且其抑制作用呈现较为明显的剂量-效应关系。综合琼脂糖凝胶电泳和紫外可见光谱，认为纳米银抑制DNA合成的主要原因是对聚合酶、引物和模板的吸附作用。并认为纳米银粒子释放的少量的Ag+ 是纳米银影响 DNA 合成的又一关键性的因素。

采用荧光定量PCR技术分析阉割与非阉割金华猪甲状腺组织中甲状腺球蛋白（TG）和甲状腺过氧化酶（TPO）基因在60、90和120日龄时表达水平。结果表明：（1）组内日龄间比较，阉割组猪TG和TPO基因在90日龄时的表达量均显著高于60和120日龄（P<0.05）；非阉割组猪TG基因在120日龄时的表达量显著低于60和90日龄（P<0.05），TPO基因在不同日龄间的表达量差异不显著（P> 0.05）。（2）组间同日龄比较，发现阉割后TG和TPO基因在60，90和120日龄的表达量都显著高于或低于非阉割组（P<0.05）。研究结果提示， 阉割后，TG和TPO基因表达量的升高可能会加快猪的生长发育和提高猪肉的肌内脂肪含量。

采用Real-time PCR技术，对猪未成熟(GV期)、成熟(MⅡ期)卵母细胞和体外受精(IVF)及胞浆内单精注射(ICSI)2-、4-、8-、16-细胞胚胎和桑椹胚DNA甲基化相关基因(Dnmt1和Dnmt3a)的表达进行检测，并检测胚胎抗凋亡基因B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)表达水平。结果发现，Dnmt1在卵母细胞呈高水平表达；在胚胎发育早期，IVF胚胎和ICSI胚胎的Dnmt1的表达量均急剧降低，可能与胚胎早期的去甲基化有关；与IVF胚相比，ICSI胚胎具有相同的Dnmt1表达趋势，只有在4-细胞时高于IVF胚胎。Dnmt3a在卵母细胞成熟过程中就开始下降，经2-~8-细胞阶段的低水平表达后又开始上升。与IVF胚胎相比，ICSI胚胎8-细胞后Dnmt3a表达量小于IVF胚胎。随着胚胎的不断发育，IVF与ICSI胚胎的抗凋亡基因Bcl-2 mRNA表达量均逐渐下降，且ICSI胚胎的下降趋势更为明显，说明胚胎抑制凋亡的能力下降，有可能是影响胚胎发育的主要原因。

通过小鼠(Mus musculus)胚胎体外培养，研究了培养基与不同氧分压环境之间是否存在偏好性；同时利用人体呼出的生理混合气体（肺气）对小鼠胚胎体外培养的可行性进行了探索；还比较了微孔（well of the well，WOW）培养法和成组培养法对胚胎发育的影响。结果表明：①在4%CO2＋16%O2＋78%N2＋2%H2O（肺气）、5%CO2＋5%O2＋90%N2（5%O2，低氧）和5%CO2＋20%O2＋75%N2（20%O2，高氧）三种气相条件下，CZB和mKSOM两种培养基之间的胚胎卵裂率及囊胚率均差异不显著(P＞0.05)，但是，在肺气组中，CZB组的囊胚平均总细胞数明显高于mKSOM组(P＜0.05)；②低氧条件下，mKSOM组的囊胚率(22.6%)显著高于高氧和肺气条件下mKSOM组的囊胚率(P＜0.05)；③CZB培养基在低氧条件下获得的囊胚率与高氧或肺气条件下所获囊胚率差异不显著(P＞0.05)；④WOW培养法的囊胚发育率(74.6±5.1%)和囊胚平均总细胞数(76±2)显著高于成组培养法(分别为38.2±6.6%和58±4)(P＜0.05)。结果提示：培养基mKSOM和CZB在支持胚胎发育时对氧分压具有偏好性；肺气能有效支持胚胎的正常发育；WOW培养法有利于提高胚胎体外发育能力和囊胚质量。

利用137个SSR(simple sequence repeat) 及EST（expressed sequence tag）标记，对柏氏鲤（Cyprinus pellegrini）/荷包红鲤（Cyprinus carpio wuyuanensis）抗寒品系的BC1F1群体93个个体进行了基因型检测。利用Windows Map Manager 2.0的标记回归法进行了饲料转化率数量性状单标记回归分析。检测结果得到了8个微卫星标记(HLJ133、HLJ360、HLJ380、HLJ562、HLJ740、HLJ852、HLJ930和HLJ1420) 和2个EST标记 (HLJE318和HLJE417)与鲤鱼饲料转化率相关，对性状的表型贡献率为4%～11%。对同一标记的不同基因型间饲料转化率性状进行了显著性比较，通过ANOVA检验找到了相关基因型，标记HLJ360、HLJ380、HLJ562座位上，分别对应基因型212/212、236/224、220/220与饲料转化率性状正相关。本研究检测出的与鲤鱼饲料转化率性状相关的标记及基因型，为鲤鱼的QTL定位及分子标记辅助育种（MAS）提供了有效的依据。

转红色荧光蛋白(red fluorescent protein, RFP)基因唐鱼(Tanichthys albonubes)的遗传符合孟德尔分离定律，为进一步了解RFP基因在转基因唐鱼基因组上的整合特点，采用PCR和Southern印迹检测转植基因的拷贝数和连接方式。结果表明，转植基因是以单位点、多拷贝(2~3个拷贝)、头尾相接(head-to-tail)的串联体形式整合。应用基因组步移技术分别克隆出1.0和1.2 kb的转植基因整合位点5'和3'侧翼区序列。序列分析表明，5'侧翼区为宿主唐鱼基因组序列，在GenBank数据库中经BLAST分析后未发现有同源序列；3'侧翼序列与P1噬菌体部分基因组序列同源性达到99%，非转基因唐鱼基因组中未检测到该侧翼序列。研究结果为转红色荧光蛋白基因唐鱼的遗传稳定提供了评价依据。

参照水貂（Mustela vison）近缘物种线粒体基因组序列设计引物，通过克隆、测序、再拼接的方法获得6个水貂品种和左家型水貂线粒体Cytb基因全序列。用DNAstar v6.13和DnaSP4.0分析显示，水貂Cytb基因全长为1 140 bp，平均碱基含量为29.8％A、13.0％G、30.3％T及26.9％C，检测到12个多态位点，全为转换。用ClustalX1.8进行多序列比较分析表明，水貂个体间Cytb基因相似性非常高。结合GenBank检索到的14种鼬属动物同源序列，用MEGA4.0基于邻接法分别构建鼬属动物核苷酸序列和氨基酸序列系统进化树，两种进化树得出相似的拓扑结构。结果表明：我国水貂与美洲水貂亲缘较近，与欧洲水貂（M.lutreola）亲缘较远，推算美洲水貂与欧洲水貂分歧时间在中新世。

利用rDNA ITS-PCR-RFLP及序列分析等技术对来自国内浙江、山西、山东以及德国等地6个不同螺旋线虫地理群体进行了分类和鉴定。结合形态学特征分别鉴定为小头螺旋线虫（Helicotylenchus microcephalus）、双角螺旋线虫（H. digonicus）、双宫螺旋线虫（H. dihystera）和翅尾铗螺旋线虫（H. pteracerus）。其中3个不同地理群体的双角螺旋线虫PCR产物片段长度和限制性内切酶酶切图谱相同，其余3个种的PCR产物长度稍大，4个螺旋线虫种的酶切图谱各不相同。选用的6种限制性内切酶(AluⅠ、 AvaⅠ、HaeⅢ、 HinfⅠ、 MspⅠ和RsaⅠ)组合能有效地鉴别四种螺旋线虫。这是我国有关该属线虫分子特征的首次报道。

梨火疫菌（Erwinia amylovora）可引起梨、苹果等蔷薇科（Rosaceae）植物的火疫病。在菊欧文氏菌(Erwinia chrysanthemi)中，由crp基因编码的环腺苷酸受体蛋白（cyclic adenosine monphosphate (cAMP) receptor protein, CRP）对果胶酶基因的表达调控和菌株致病性起着重要的作用。本研究首次鉴定并克隆出梨火疫菌中的crp同源基因，命名为Eacrp，并通过同源重组的方法，构建了梨火疫菌的crp基因突变体EaΔcrp以及互补子，进行了致病性、过敏性反应、胞外多糖、鞭毛运动等一系列相关表型的鉴定。结果表明，crp基因影响着梨火疫菌的致病性、胞外多糖、游动性、生长情况等多种生物学特性，然而，EaΔcrp仍能引起烟草过敏性反应，并且在过氧化氢敏感度以及沉降性、生物膜和AI-2信号分子的生成方面与野生型菌株相比差异明显。本研究结果说明，梨火疫菌crp基因对病菌的胞外多糖分泌、生长、游动性以及致病性方面具有关键作用。

本研究采用联合国粮农组织(FAO)和国际动物遗传学会(ISAG)推荐的9对微卫星标记，结合荧光标记PCR技术，检测了我国39个地方山羊(Capra hircus)品种和1个引进山羊品种的遗传多样性，为中国山羊系统分类和遗传资源保护利用提供科学依据。各山羊群体期望杂合度在0.4346~0.6951之间，遗传分化处于中等水平，FST为0.115，GST为0.112。群体间和群体内的遗传变异率分别为13.3%和86.7%；UPGMA聚类结果、主成分分析结果和贝叶斯分组方法基本一致，40个山羊品种可分为5大支系，波尔山羊单独为一个支系，中国山羊分为4个支系：西南支系、华南支系、华中支系和北方支系。中国山羊遗传多样性丰富，遗传变异主要来源于群体内，育种潜力大。

探讨奶牛X性控冻精的卵胞质内单精子注射(ICSI)技术的可行性及显微操作条件对奶牛X性控冻精ICSI效果的影响。结果表明，注射运动性控冻精ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率均高于不运动组，但差异不显著(P>0.05)。分别用5%、8%和10%聚乙烯吡咯烷酮(PVP)的精子操作液处理性控冻精，进行ICSI操作，ICSI卵的卵裂率差异不显著；但PVP在5%和10%时，正常卵裂率分别是78.4%和69.1%(P<0.05)，囊胚率分别是29.7%和20.4%(P<0.05)。精子显微注射时，将卵母细胞的极体调整在相当于时钟6点与12点的位置时，所获ICSI卵的卵裂率差异不显著，但正常卵裂率(76.4%，66.7%)和囊胚率(28.6%，19.0%)明显提高(P<0.05)。结论认为，进行奶牛X性控冻精ICSI操作时，应选用运动精子，并用含5%PVP的精子操作液进行处理，而且注射在卵母细胞极体置于6点的位置，有利于ICSI卵体外发育。

合成19-去甲睾酮 (19-NT) 人工抗原，并进行免疫学特性鉴定。丁二酸酐法衍生化19-NT，制备17β-19-NT琥珀酸酯半抗原，其质谱和核磁共振NMR谱表明合成成功。分别用EDC法和混合酸酐法将半抗原与BSA (bovine serum albumin)和OVA (ovalbumin) 偶联，制备免疫和检测抗原，并进行紫外扫描和红外光谱鉴定，NT与BSA偶联比为18∶1。用NT-BSA免疫Balb/C 小鼠(Mus muscalus) 制备NT多克隆抗体，间接ELISA效价达到1∶25 600。间接竞争ELISA的IC50为27.3 ng/mL，线性检测范围为3.3~225.0 ng/mL, 最低检测限为1.6 ng/mL。 纯化后的抗体与17α-去甲睾酮的交叉反应率为69%，与其它激素的交叉反应率均＜0.05%。制备的抗体灵敏度高、特异性强，为试剂盒和试纸条的研制提供基础资料。

鸽子是一种单态鸟，并且是典型的“一夫一妻制”，给配对和人工繁殖带来了很大的困难。以雏鸽(Columbalivia Gmelin)的羽毛为材料，采用PCR方法扩增染色体螺旋蛋白基因。结果显示，雏鸽羽毛可以提取出高质量的DNA, 雄鸽仅有CHD-Z (450 bp) 1条带，而雌鸽有CHD-W(380 bp)和CHD-Z(450 bp) 2条带。这种性别鉴定技术准确，并且对动物无伤害性，在生产管理上有广阔的应用前景。

研究建立检测胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae，APP)的实时荧光定量PCR方法，并运用建立的检测方法对临床病料进行应用检测。根据GenBank报道的胸膜肺炎放线杆菌apxⅣA基因3'端391 bp核苷酸保守序列，设计1对特异引物扩增117 bp核苷酸片段，建立检测APP的实时荧光定量PCR方法和标准曲线，并利用该方法对收集肺脏组织和人工感染组织材料进行APP核酸定量检测。结果表明，构建的实时荧光定量PCR检测方法具有良好敏感性、特异性、重复性和临床应用性。该方法的建立为APP的临床高效诊断和APP感染的发生、发展和转归研究提供了一种有效手段。

利用纯化的牛病毒性腹泻1型病毒(BVDV1)和2型病毒(BVDV2)为抗原免疫BALB/c小鼠，取脾细胞与SP2/0细胞融合，同时以BVDV1和BVDV2病毒作为包被抗原进行间接BVDV1-ELISA和BVDV2-ELISA检测，获得了3株单克隆抗体，其中1株是针对BVDV1的特异性抗体命名为BV1，另外1株是针对BVDV2的特异性抗体命名为BV2，第3株与BVDV1和BVDV2病毒都反应命名为BV12。交叉实验表明，3株单抗中仅有BV12与猪瘟病毒(Hog chorera virus,HCV)反应。BV1、BV2、BV12单抗腹水效价分别为105、106、105，均具有中和活性，中和效价最高达1：741455，分别属于鼠IgG1、IgG2a、IgG2a亚类，轻链均为?链。3株杂交瘤细胞的染色体数目分别为102、99、100条。

依据中国野生葡萄（Vitis pseudoreticulata）抗黑痘病（Sphaceloma ampelinum）基因RAPD标记OPS03-1354的全长序列，设计合成了两个寡聚核苷酸R1（5'-CAGAGGTCCCTAGCTAAT-3'）和R2（5'-ACA ATCACCCAACTCCTC-3'）作为引物。首先对获得该RAPD标记的种间杂交组合白河-35-1（V. pseudoret- iculata clone Baihe-35-1）×佳利酿（V. vinifera cv. Carignane）亲本及其F2 51株进行PCR分析，其中寡聚核苷酸R2能在抗黑痘病植株中扩增出约1 100 bp的DNA片段。进一步用R2对另一种间杂交组合广西-1（V. pseudoreticulata clone Guangxi-1）×京可晶（V. vinifera cv. Jingkejing）F1 339株进行PCR检测，R2能在抗病植株中扩增出约1 100 bp的DNA片段。最后用R2对48份葡萄资源包括中国野生葡萄、美国野生葡萄和欧洲葡萄进行了PCR检测，在抗病株系和品种中也能扩增出这一片段。结果表明，获得的约1 100 bp特异片段为葡萄抗黑痘病基因的序列特异性扩增区（SCAR）标记，凡扩增出该SCAR标记的植株即是抗黑痘病基因的携带者和抗黑痘病性状的表达者。将该SCAR标记克隆与测序，其实际长度为1 110 bp，命名为SCS03-1110。获得该SCAR标记的18 bp寡聚核苷酸R2（5'-ACAATCACCCAACTCCTC-3'）具有检测葡萄抗黑痘病基因的DNA探针作用。

对1991~2008年间欧盟转基因植物田间试验的相关数据进行分析，揭示了欧盟转基因作物田间试验的特点和变化趋势。18年间，欧盟先后有22个成员国在83种植物上共批准了2 352次试验，其中玉米（Zea mays L.），油菜（Brassica napus L.），马铃薯（Solanum tuberosum L.）和甜菜（Beta vulgaris L.）是欧盟进行最多的4种作物，共占总田间试验次数的74%，批准得最多的4个成员国是法国，西班牙，意大利和英国。此外，还比较了欧盟与美国和加拿大及各成员间转基因作物田间试验趋势的异同，并分析了相关的影响因素，从而为我国转基因作物的发展提供参考。