松毛虫DNA的提取及ISSR反应体系的建立
高立杰 高宝嘉
河北农业大学 河北农业大学
摘要 为摸索适宜松毛虫的ISSR体系，以油松毛虫为实验材料，研究了ISSR技术中PCR反应体系的主要成分对ISSR扩增结果的影响。对ISSR反应体系中Mg2+的浓度、引物浓度、dNTP浓度、Tag DNA聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度进行了探索， 确立了适合松毛虫的ISSR反应体系为： 在25μL反应体系、Mg2+、引物和dNTP的最适浓度分别为2.5mmol.L-1、0.8μmolL-1、0.20mmol.L-1； 反应体系中Tag DNA聚合酶宜加入1.25Ｕ， 模板DNA应加入15～30ng；引物的最佳退火温度为45.9～52.4℃。并利用该反应体系对14个地区的5种松毛虫进行ISSR反应，用1.5％的琼脂糖凝胶电泳检测，谱带多态性丰富，清晰稳定，证实该体系稳定可靠。
Abstract ：In this study，ISSR conditions on pine caterpillars were optimizatied.The factors which affected the ISSR results of pine caterpillars were studied.The results showed that 2.5mmol.L-1 Mg2+，0.8μmolL-1 primer, 0.20mmol. L-1dNTP，1.25ＵTag polymerase，15～30 ng template DNA and the optimal annealing temperature of primers of 45.9～52.4℃ in 25μL ISSR reaction system were the best. Though above PCR system，ISSR fragments of 14 populations from different district of 4 species were obtained and detected.Polymorphism between different populations was abundantly detected by 1.5％ arognose which showed this system was suitable and stable.
收稿日期: 2006-12-25
通讯作者:
高立杰
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