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2025年4月3日 星期四
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松毛虫DNA的提取及ISSR反应体系的建立
高立杰 高宝嘉
河北农业大学 河北农业大学
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摘要 为摸索适宜松毛虫的ISSR体系,以油松毛虫为实验材料,研究了ISSR技术中PCR反应体系的主要成分对ISSR扩增结果的影响。对ISSR反应体系中Mg2+的浓度、引物浓度、dNTP浓度、Tag DNA聚合酶浓度、模板浓度以及退火温度进行了探索, 确立了适合松毛虫的ISSR反应体系为: 在25μL反应体系、Mg2+、引物和dNTP的最适浓度分别为2.5mmol.L-1、0.8μmolL-1、0.20mmol.L-1; 反应体系中Tag DNA聚合酶宜加入1.25U, 模板DNA应加入15~30ng;引物的最佳退火温度为45.9~52.4℃。并利用该反应体系对14个地区的5种松毛虫进行ISSR反应,用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测,谱带多态性丰富,清晰稳定,证实该体系稳定可靠。
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高立杰高宝嘉
Abstract:In this study,ISSR conditions on pine caterpillars were optimizatied.The factors which affected the ISSR results of pine caterpillars were studied.The results showed that 2.5mmol.L-1 Mg2+,0.8μmolL-1 primer, 0.20mmol. L-1dNTP,1.25UTag polymerase,15~30 ng template DNA and the optimal annealing temperature of primers of 45.9~52.4℃ in 25μL ISSR reaction system were the best. Though above PCR system,ISSR fragments of 14 populations from different district of 4 species were obtained and detected.Polymorphism between different populations was abundantly detected by 1.5% arognose which showed this system was suitable and stable.
收稿日期: 2006-12-25     
通讯作者: 高立杰   
引用本文:   
高立杰 高宝嘉. 松毛虫DNA的提取及ISSR反应体系的建立[J]. , 2007, 15(6): 0-.
. . , 2007, 15(6): 0-.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/      或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2007/V15/I6/0
 
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