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海洋双RNA病毒(MABV) VP2和VP3基因在昆虫细胞中的高效表达 |
徐海君 杨章女 张传溪 |
浙江大学应用昆虫研究所分子生物学实验室,杭州 |
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摘要 海洋双RNA病毒(Marine birnavirus, MABV) 可引起多种海洋鱼贝的腹水病等病症。利用RT-PCR技术得到了MABV Y-6株系A片段的cDNA,进而克隆了病毒的外壳蛋白VP2e的抗原决定簇区642 bp片段(vp2e)和另一结构蛋白VP3编码区序列。通过转座作用构建了重组杆状病毒表达载体,在昆虫细胞中对VP2e 和VP3进行了表达。SDS-PAGE检测和薄层扫描表明,VP2e和VP3与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein, EGFP)融合蛋白表达量分别占整个昆虫细胞蛋白的15.8%和8.2%。用His Tag单抗和MABV病毒多抗对表达的VP2e融合蛋白进行Western blot检测,结果表明表达产物具有很好的抗原性。同样,用His Tag单抗和VP3多抗对表达的VP3融合蛋白进行的Western blot检测,证明融合蛋白表达正确,并且表达产物可溶,易于纯化。实验结果为该病毒结构蛋白和MABV疫苗研究提供了基础。 关键词: 海洋双RNA病毒; VP2e; VP3; 杆状病毒表达系统; 表达纯化
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收稿日期: 2005-06-20
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通讯作者:
张传溪
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[1] |
周琪, 冯燕茹, 李嵩, 刘子辉, 郑炜君, 柴守诚. 小麦TaXTH-7A基因的克隆及抗旱性鉴定[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1521-1532. |
[2] |
陈东滨, 王茜茜, 孙智仪, 杨小英, 傅经效, 郭新梅, 宋希云. 玉米ZmXTH23的克隆、表达及其对盐胁迫和干旱胁迫的响应[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1533-1541. |
[3] |
翁嘉慧, 楼亿圆, 徐京, 周骏, 蒋红叶, 赵振宁, 何军光, 刘永立. 转AM79-EPSPS基因抗草甘膦大豆遗传稳定性分析[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1550-1559. |
[4] |
韦小英, 何卓远, 雷豆, 苏周, 吴雨, 杨军, 邹建. 向日葵MADS-box家族基因HaTrans6的克隆及表达分析[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1560-1568. |
[5] |
靳伟, 代敏敏, 李德娟, 樊宝良. CRISPR/Cas9介导的外源基因在猪PSP位点的定点整合[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1569-1581. |
[6] |
李茜, 李妍, 石丽君, 高艳霞, 李秋凤, 孙东晓, 李建国. 中国荷斯坦牛FBP2基因对产奶性状的遗传效应分析[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1582-1595. |
[7] |
赵志东, 田宏山, 蒋艳艳, 石斌刚, 刘秀, 李旭鹏, 王登哲, 陈金林, 胡江. 牦牛ACSL1基因启动子多态性及其与乳品质性状的关联分析[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1596-1603. |
[8] |
秦文昌, 殷实, 熊显荣, 王斌, 黄向月, 周婧雯, 李键. 牦牛KDM1B基因CDS区克隆及其在不同组织和卵母细胞成熟过程中的表达[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1604-1613. |
[9] |
曹宇,张东,芦杨,张焱如,周欢敏. 基于转录组测序的蒙古羊和杜泊羊骨骼肌热响应相关基因的筛选[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1614-1628. |
[10] |
宋晓越, 史雷, 刘锦旺, 朱海鲸, 李陇平, 屈雷. 陕北白绒山羊MHC-DQB2基因外显子2多态性与球虫易感性的相关分析[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1629-1636. |
[11] |
陈兰, 张涛, 王金玉, 殷学梅, 陈福祥, 张跟喜, 韦习会, 冒静. 金茅黑鸡GAS6基因的组织分布及其在脂肪组织中的发育性表达[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1637-1643. |
[12] |
郭亚苹, 唐贺贺, 王香南, 付亚伟, 陈毅, 李转见, 李文婷, 田亚东, 康相涛, 韩瑞丽. 肢体内外翻畸形对不同时期肉鸡生长性能、血液生化指标和骨骼形态计量学指标的影响[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1644-1651. |
[13] |
靳雅琦, 郁二蒙, 张凯, 李志斐, 王广军, 谢骏, 余德光, 孙金辉, 魏东, 龚望宝, 田晶晶. 三种饵料对草鱼血清酶活性和肠道组织结构及细菌菌群的影响[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1652-1663. |
[14] |
翟大才, 房震, 吕彩云, 张明亮, 刘珊, 吴梦, 方茹月, 周讯, 方建新, 柏晓辉. 黄精内生菌枯草芽胞杆菌HJ-2的抑菌活性研究[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1664-1672. |
[15] |
包世俊, 丁小琴, 邢小勇, 薛慧文, 伏小平, 武小椿, 温峰琴. 滑液支原体WVU1853株pdhA、pdhB的原核共表达及表达产物酶活性分析[J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1673-1680. |
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