L.reuteri亚油酸异构酶基因在大肠杆菌中的表达及活性检测
张艳禾;张兰威;胡 森;步志高
东北农业大学食品科学学院
Overexpression and Identification of Bioactivity of L.reurei linoleite isomerase in Escherichia coli
摘要 以大肠杆菌(Escherichia coli)BL21为表达宿主,重组表达亚油酸异构酶(gLI)。根据GenBank上发表的gLI基因序列,设计并合成一对引物,从L.reuteriPYR8基因组中,PCR扩增出去除5’端42bp信号肽的gLI基因片断,将其克隆入pMD-18-T载体中,序列测定后将gLI基因亚克隆到表达载体pET30a中(pET30a-gLI),将其转化大肠杆菌BL21(DE3), 在1mmol/L IPTG 30℃条件下诱导表达,大肠杆菌裂解物经SDS-PAGE分析,出现了一新分子量约67kD的蛋白带,与预期目的蛋白分子量相符。生物学活性鉴定表明:经稀释、透析复性,获得的重组gLI在反应缓冲液可以将亚油酸(LA)转化为共轭亚油酸(CLA),30℃ pH7.3的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液,酶活最高为1377U。为进一步体外研究gLI的生物学活性、酶作用机制奠定了基础。
Abstract :The recombinant expression of linoleite isomerase using Escherichia coli BL21as host cell was studied. A pair of primers were designed and synthesized according to the linoleic isomerase(gLI) gene sequence published by Genbank. Linoleic isomerase gene was amplified by PCR from genome of L.reuteriPYR8. Recombinant pET-gLI was constructed after the gLI gene was sequenced. BL21(DE3) was induced with 1.0mmol/L IPTG, SDS-PAGE showed recombinant protein was about 67 KD. After inducted and purified, the gLI can converts linolenic acid to CLA in phosphate buffer(pH7.3) 30℃ activity enzyme 1377U, which gave a foundation for biological activity and machnism。
收稿日期: 2006-04-10
通讯作者:
张兰威
[1]
周琪, 冯燕茹, 李嵩, 刘子辉, 郑炜君, 柴守诚. 小麦TaXTH -7A 基因的克隆及抗旱性鉴定 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1521-1532.
[2]
陈东滨, 王茜茜, 孙智仪, 杨小英, 傅经效, 郭新梅, 宋希云. 玉米ZmXTH23 的克隆、表达及其对盐胁迫和干旱胁迫的响应 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1533-1541.
[3]
翁嘉慧, 楼亿圆, 徐京, 周骏, 蒋红叶, 赵振宁, 何军光, 刘永立. 转AM79 -EPSPS 基因抗草甘膦大豆遗传稳定性分析 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1550-1559.
[4]
韦小英, 何卓远, 雷豆, 苏周, 吴雨, 杨军, 邹建. 向日葵MADS-box家族基因HaTrans6 的克隆及表达分析 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1560-1568.
[5]
靳伟, 代敏敏, 李德娟, 樊宝良. CRISPR/Cas9介导的外源基因在猪PSP 位点的定点整合 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1569-1581.
[6]
李茜, 李妍, 石丽君, 高艳霞, 李秋凤, 孙东晓, 李建国. 中国荷斯坦牛FBP2 基因对产奶性状的遗传效应分析 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1582-1595.
[7]
赵志东, 田宏山, 蒋艳艳, 石斌刚, 刘秀, 李旭鹏, 王登哲, 陈金林, 胡江. 牦牛ACSL1 基因启动子多态性及其与乳品质性状的关联分析 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1596-1603.
[8]
秦文昌, 殷实, 熊显荣, 王斌, 黄向月, 周婧雯, 李键. 牦牛KDM1B 基因CDS区克隆及其在不同组织和卵母细胞成熟过程中的表达 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1604-1613.
[9]
曹宇,张东,芦杨,张焱如,周欢敏. 基于转录组测序的蒙古羊和杜泊羊骨骼肌热响应相关基因的筛选 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1614-1628.
[10]
宋晓越, 史雷, 刘锦旺, 朱海鲸, 李陇平, 屈雷. 陕北白绒山羊MHC -DQB2 基因外显子2多态性与球虫易感性的相关分析 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1629-1636.
[11]
陈兰, 张涛, 王金玉, 殷学梅, 陈福祥, 张跟喜, 韦习会, 冒静. 金茅黑鸡GAS6 基因的组织分布及其在脂肪组织中的发育性表达 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1637-1643.
[12]
郭亚苹, 唐贺贺, 王香南, 付亚伟, 陈毅, 李转见, 李文婷, 田亚东, 康相涛, 韩瑞丽. 肢体内外翻畸形对不同时期肉鸡生长性能、血液生化指标和骨骼形态计量学指标的影响 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1644-1651.
[13]
靳雅琦, 郁二蒙, 张凯, 李志斐, 王广军, 谢骏, 余德光, 孙金辉, 魏东, 龚望宝, 田晶晶. 三种饵料对草鱼血清酶活性和肠道组织结构及细菌菌群的影响 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1652-1663.
[14]
翟大才, 房震, 吕彩云, 张明亮, 刘珊, 吴梦, 方茹月, 周讯, 方建新, 柏晓辉. 黄精内生菌枯草芽胞杆菌HJ-2的抑菌活性研究 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1664-1672.
[15]
包世俊, 丁小琴, 邢小勇, 薛慧文, 伏小平, 武小椿, 温峰琴. 滑液支原体WVU1853株pdhA 、pdhB 的原核共表达及表达产物酶活性分析 [J]. 农业生物技术学报, 2019, 27(9): 1673-1680.