大白菜BrWRKY33基因上游调控序列的克隆及其功能研究
范荣伟1 ,2 ,谢华3 ,姚磊3 ,马荣才1
1. 北京农业生物技术研究中心
Cloning and Expression Analysis of the Up-stream Regulatory Sequence of Transcription Factor Gene BrWRKY33 from Chinese Cabbage
摘要 摘 要 根据大白菜EST和基因组序列，利用PCR技术从大白菜品种龙白二号(Brassica rapa subp. pekinensis cv. Longbai Ⅱ)基因组中克隆转录因子基因BrWRKY33起始密码子上游大小1 755 bp的调控序列。然后，构建5'端缺失突变体，与gus基因融合，构建植物表达载体。将载体转化拟南芥(Arabidopsis thaliana) 哥伦比亚生态型(Columbia ecotype)，进行植物组织GUS化学染色分析。结果表明，BrWRKY33密码子上游－1 755~－315区域存在的多个W-box元件可能与该基因表达的负调控相关，－315 bp区域含有BrWRKY33基因转录必需的基本元件。对接种软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora subsp. carotovora)后不同时期的植株进行染色，发现该病原菌侵染使转基因植株gus基因表达量增加，表明BrWRKY33基因在植物对软腐病抗性反应中具有一定的作用。
关键词 ：
大白菜 ,
BrWRKY33 ,
上游调控序列 ,
转录因子 ,
软腐病
Abstract ：Abstract An 1 755 bp up-stream regulatory sequence of the transcription factor gene BrWRKY33 was cloned from Chinese cabbage (Brassica rapa subp. pekinensis cv. LongbaiⅡ). Two 5' deletion mutants of the sequence were fused with the reporter gene gus, respectively, and transformed into Arabidopsis thaliana. The results indicated that the W-box sequences present in －1 755~－315 bp region of BrWRKY33 was related to the down regulation, and the 0~－315 bp region contained the essential sequence for gene transcription. Transgenic plants challenged with soft rot bacteria (Erwinia carotovora subsp. carotovora) showed an increase in gus activity, indicating that BrWRKY33 gene play a role in the resistance against soft rot disease.
Key words ：
Chinese cabbage
BrWRKY33
up-stream regulatory sequence
transcriptional factor
soft rot
收稿日期: 2009-04-07
通讯作者:
马荣才
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