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绿脓杆菌ATCC27853菌株外毒素A全长编码基因的克隆及其在 HEK 293T细胞中的表达
吴凌娟 仲 飞 解民 靳慧君 王 微 韩冬梅
河北农业大学 河北农业大学 河北农业大学 河北农业大学 河北农业大学 河北农业大学
Cloning of Exotoxin A Gene from Pseudomonas Aeruginosa ATCC27853 Strain and Its Expression in HEK 293T Cells
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输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 采用PCR方法从绿脓杆菌ATCC27853菌株基因组扩增其外毒素A(PEA)全长编码基因,并将PEA基因插入到pcDNA3.1A真核表达载体中,构建成pcDNA3.1/ PEA质粒表达载体。经磷酸钙介导将重组质粒转染 HEK293T 细胞进行表达。结果表明本文克隆的PEA基因与标准菌株PA103碱基序列基本相似,同源性达99%。表达产物经蛋白免疫印迹法(Western-blot)检测,表明本文构建的含有原基因信号肽的PEA基因能够在真核细胞进行分泌性表达,这为基于PEA的免疫毒素、疫苗佐剂和疫苗载体的研究奠定了基础。
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作者相关文章
吴凌娟仲飞解民靳慧君王微韩冬梅
关键词 绿脓杆菌PEA克隆真核表达    
Abstract:The full-length coding region of PEA gene was amplified by PCR method from genomic DNA of ATCC27853 Strain of Pseudomonas aeruginosa . The PEA gene was inserted into eucaryotic expression vector pcDNA3.1A to constructe plasmid expression vector pcDNA3.1/PEA . The recombinant plasmids were transfected into HEK 293T cells to be expressed by calcium phosphate mediation. The results showed that cloned PEA gene shared 99% alignment with standard strain PA103. The PEA gene product was detected in the medium with Western blot, which indicated that the PEA gene with original signal peptide could be expressed with secretary form in eucaryotic cells. These lay the foundation for the further research of PEA-based immunotoxin , vaccine adjuvant and vaccine vector.
Key wordsPseudomonas Aeruginosa    PEA    Cloning    eukaryotic expression
收稿日期: 2008-03-10     
通讯作者: 仲 飞   
引用本文:   
吴凌娟 仲 飞 解民 靳慧君 王 微 韩冬梅. 绿脓杆菌ATCC27853菌株外毒素A全长编码基因的克隆及其在 HEK 293T细胞中的表达[J]. , 2008, 16(6): 0-.
. Cloning of Exotoxin A Gene from Pseudomonas Aeruginosa ATCC27853 Strain and Its Expression in HEK 293T Cells. , 2008, 16(6): 0-.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/      或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2008/V16/I6/0
 
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