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2025年4月6日 星期日
  2017, Vol. 25 Issue (10): 1714-1720    
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猪骨骼肌单根肌纤维的分离与鉴定方法
候晔1,胡岸1,张巧霞2,杜小勇2,李长春2,赵书红1,王海燕3
1. 华中农业大学动物科技学院
2.
3. 华中农业大学信息学院
Isolation and Identification of Single Skeletal Muscle Fibers in Pigs (Sus scrofa)
1, 1, 1, 1, 1, 1
全文: PDF (5241 KB)   HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 肌纤维是构成肌肉组织的基本结构单位,肉质主要受到肌纤维类型及其组成的影响。为丰富骨骼肌生长发育的体外研究模型,本研究选取刚出生的大白猪(Sus scrofa)后肢肌肉,利用胶原酶消化法分离出单根肌纤维,并采用RT-PCR和免疫荧光染色鉴定不同肌纤维类型。对Ⅰ型胶原酶分离的单根肌纤维进行高倍镜镜检,肌纤维表面光滑并且有卵圆形凸起,其为前体骨骼肌卫星细胞,说明肌纤维具有良好活性并且其RNA未降解,可进行后续RNA微量提取实验。逆转录PCR(reverse transcription PCR, RT-PCR)结果表明,通过胶原酶消化法分离趾长伸肌的8根肌纤维为单根肌纤维,主要类型为快速酵解型(Ⅱb);并且通过慢速氧化型(Ⅰ)抗体对单根肌纤维进行免疫荧光染色验证RT-PCR结果的可靠性。本研究建立了一种简单、低成本的猪骨骼肌单根肌纤维的分离与鉴定方法,为进一步研究成熟骨骼肌细胞发育过程及其生物学功能提供了体外模型。
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作者相关文章
候晔
胡岸
张巧霞
杜小勇
李长春
赵书红
王海燕
关键词 猪,单根肌纤维, 胶原酶消化, RT-PCR, 免疫荧光染色    
Abstract:Meat quality is affected by the type and percent of muscle fiber which is the basic unit of muscle tissue. In order to enrich the in vitro research mode of skeletal muscle growth and development, this study selected the hind-limb extensor digitorum longus of a newborn Landrace piglet (Sus scrofa) as sample, and the single muscle fiber was isolated through collagenase digestion. The type of myofiber was then accurately detected by RT-PCR and immunofluoresence. The single muscle fiber were isolated by collagenase digestion and these muscle fibers had smooth surface and the cells adhered to the myofibers originally, which indicated RNA was qualified for subsequent analysis. The result of RT-PCR indicated that myosin heavy chain Ⅱb (MyHC Ⅱb) mainly expressed in 8 myofibers. Furthermore, the result was confirmed by immunofluorescence with the antibody of myosin heavy chain I (MyHCⅠ). In this study, one simple and cheap detection method for isolation and identification of single muscle fibers of porcine skeletal muscle was established, and the result provides a muscle fiber model, which will be useful for studying the various functions and cellular processes of mature muscles in vitro.
Key wordsPig, Single muscle fiber, Digestion of collagenase, RT-PCR, Immunofluorescence
收稿日期: 2017-03-20      出版日期: 2017-10-30
基金资助:国家自然科学基金青年基金项目;国家高技术研究发展计划(863);国家自然科学基金项目
通讯作者: 王海燕     E-mail: wanghaiyan@mail.hzau.edu.cn
引用本文:   
候晔 胡岸 张巧霞 杜小勇 李长春 赵书红 王海燕. 猪骨骼肌单根肌纤维的分离与鉴定方法[J]. , 2017, 25(10): 1714-1720.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/     或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2017/V25/I10/1714
 
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