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2025年5月5日 星期一
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胚盘下腔注射法将外源质粒pEGFP-N1导入鸡胚的研究
孙研研1,蒋斌2,郑江霞1,徐桂云1,曲鲁江1,杨宁3
1. 中国农业大学
2.
3. 中国农大动物科技学院100094
Introduction of Foreign Plasmid pEGFP-N1 into the Chicken Embryo via Subgerminal Cavity Microinjection
全文: PDF (539 KB)   HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 摘 要 研究运用胚盘下腔注射法将外源质粒pEGFP-N1导入鸡胚,通过检测外源基因表达载体在鸡胚发育过程中的动态代谢、与宿主基因组整合情况,进而对该模式在制备转基因鸡和基因功能研究中的可能性进行探讨。取新鲜鸡胚为实验材料,胚盘下腔注射pEGFP-N1,石蜡膜封口后孵化,于不同时间段采集鸡胚及出雏鸡组织样,PCR方法检测pEGFP-N1的分布及其降解情况。同时,对酶切、回收后的阳性样本基因组用PCR检测了外源质粒与基因组DNA的整合情况。研究结果表明:实验组0.5、1、3、4、5和6日龄鸡胚以及初生雏鸡中均可检测到外源质粒pEGFP-N1上的EGFP基因,阳性率分别为100%、80.00%、66.57%、75.00%、64.29%和84.21%。随着鸡胚的发育,外源质粒会被逐渐代谢掉,出雏时实验组雏鸡的阳性率为75%。但是,阳性样本基因组经Hind Ⅲ 酶切后PCR检测结果表明,pEGFP-N1未与宿主染色体产生整合,而是以游离或者多聚状态存在于鸡胚组织中。
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孙研研
蒋斌
郑江霞
徐桂云
曲鲁江
杨宁
关键词 胚胎显微注射外源质粒    
Abstract:Abstract In order to identify the availability of subgerminal cavity microinjection of foreign DNA as an effective way in making transgenic chickens and gene function study, foreign plasmid pEGFP-N1 was injected into the subgerminal cavity of the fresh fertilized eggs before incubation, and the embryos of 0.5,1,3,4,5,6 day-old were collected to identify the metabolism and distribution of the exogenous DNA. The success rate of integration of the foreign DNA was then analyzed by restriction enzyme digestion. The results indicated that the microinjected plasmid could be found in the whole embryos after incubation for 0.5, 1, 3, 4, 5 and 6 days. The positive ratio was 100%, 80.00%, 66.57%, 75.00%, 64.29% and 84.21%, respectively. The foreign plasmid was declined along with the embryos development. 75 % of the hatched chicks showed positive results. However, the fragment of foreign DNA did not integrate into the host cell genome. They were in free or polymerization status.
Key wordschicken    embryo    microinjection    plasmid
收稿日期: 2009-03-13     
通讯作者: 孙研研   
引用本文:   
孙研研1,蒋斌2,郑江霞1,徐桂云1,曲鲁江1,杨宁3. 胚盘下腔注射法将外源质粒pEGFP-N1导入鸡胚的研究[J]. , 2010, 18(4): 760-765.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/     或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2010/V18/I4/760
 
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