链霉菌(Streptomyces TE66 ) MalQ基因克隆与原核融合表达
王水兴
南昌大学中德联合研究院
Cloning and Fusion Expression of the Gene MalQ from Streptomyces TE66
摘要 用PCR方法获得Streptomyces TE66 MalQ基因，将该基因插入原核表达载体pTrc-CKS中，对质粒所含外源片段双向测序，并经BLAST比较分析，发现其与GenBank中报道的Streptomyces coelicolor MalQ基因的同源性高达97％。重组质粒转化E.coli Top 10F’，经IPTG诱导后以融合蛋白形式表达，SDS-PAGE电泳显示MalQ基因与CKS表达的融合蛋白在目标位置约106kDa处有明显条带。经薄层层析分析粗酶液酶处理的麦芽三糖溶液，证实粗酶液具有麦芽糖转糖基活性。
关键词 ：
麦芽糖转糖基酶 ,
基因克隆 ,
融合表达 ,
大环糊精 ,
MalQ
Abstract ：The gene MalQ was amplified from Streptomyces coelicolor by PCR, then the gene MalQ was cloned into pTrc-CKS and sequenced. MalQ sequence was analyzed by BLAST and it displayed high similarity(97%) to gene MalQ of Streptomyces coelicolor reported in GenBank. The recombined plasmid pTrc-CKS-MalQ was transformated into E.coli Top 10F’and induced by IPTG.. Gene MalQ and CKS fusion protein(molecular weight：about 106kDa) could detected by SDS-PAGE gel electrophoresis. The crude enzyme was demonstrated having 4- -glucanotransferase activity with TLC.
Key words ：
amylomaltase
gene clone
fusion expression
cycloamylose
MalQ
收稿日期: 2007-06-18
通讯作者:
王水兴
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