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2025年8月13日 星期三
  2015, Vol. 23 Issue (5): 690-700    
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中国樱桃实时定量PCR(qRT-PCR)内参基因的筛选与鉴定
朱友银1,王月2,张弘3,邵姁2,李永强2,郭卫东3
1. 金华职业技术学院
2.
3. 浙江师范大学
Selection and Characterization of Reliable Reference Genes in Chinese Cherry (Prunus pseudocerasus) Using Quantitative Real-time PCR (qRT-PCR)
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全文: PDF (2295 KB)   HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 中国樱桃(Prunus pseudocerasus)是一种重要的落叶果树,为了丰富稳定可靠的内参基因,提高实时定量PCR(quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)分析中国樱桃基因表达的准确性,本研究在分析中国樱桃花芽转录组数据的基础上,筛选了表达稳定的微管蛋白(tubulin, TUB)、β肌动蛋白(β-actin, ACTB)、甘油醛-3-磷酸-脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)、延伸因子1β(elongation factor 1β, EF1B)、泛素接合酶(ubiquitin-conjugating enzyme, UBCE)、18S rRNA和翻译起始因子5A(translation initiation factor 5A, TIF5A)7个看家基因,分别利用Genorm、Bestkeeper、NormFinder和Delta Ct等计算方法分析了上述基因在4 ℃、NaCl(300 mmol/L)和脱落酸(ABA)(100 mmol/L)处理下以及低温诱导花芽休眠解除过程中的表达稳定性。综合分析结果表明,GAPDH在4 ℃和NaCl处理下最稳定,而ACTB和UBCE分别在ABA处理和花芽休眠解除过程中最稳定,说明GAPDH可以作为中国樱桃低温响应和盐碱胁迫处理的内参基因,ACTB和UBCE可以作为ABA处理和花芽休眠解除过程中的内参基因。本研究结果为研究中国樱桃不同生理过程中目的基因表达提供了稳定可靠的内参基因,具有重要参考价值。
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作者相关文章
朱友银
王月
张弘
邵姁
李永强
郭卫东
关键词 中国樱桃转录组内参基因实时定量PCR(qRT-PCR)    
Abstract:Chinese cherry (Prunus pseudocerasus) is one of the most important deciduous fruit tree in China. In order to enrich stable and reliable reference genes and analyze the gene expression more accurately in Chinese cherry by quantitative Real-time PCR (qRT-PCR), the present research selected 7 housekeeping genes of tubulin (TUB), β-actin (ACTB), glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH), elongation factor 1β (EF1B), ubiquitin-conjugating enzyme (UBCE), 18S rRNA and translation initiation factor 5A (TIF5A) based on Chinese cherry flower bud transcriptome data. The expression stability of 7 candidate reference genes were analyzed by Genorm, Bestkeeper, NormFinder and Delta Ct, respectively, under 4 ℃, NaCl (300 mmol/L) and abscisic acid (ABA) (100 mmol/L) treamtent as well as during endodormancy release. This result indicated that the expression of the above 7 genes was not significantly different. GAPDH could expressed stablly under 4 ℃ and NaCl stress, and ACTB and UBCE should be selected as internal controls during ABA treatment and dormancy transition, respectively. Identifying stably expressed housekeeping genes for candidate reference genes from transcriptome database was found to be reliable and efficient. The reference genes selected in this study will be helpful to improve the quality of gene expression studies under various stresses in Chinese cherry.
Key wordsChinese cherry    Transcriptome    Reference gene    Quantitative Real-time PCR (qRT-PCR)
收稿日期: 2014-11-19      出版日期: 2015-03-17
基金资助:浙江省自然科学基金;浙江省新品种选育重大专项
通讯作者: 郭卫东     E-mail: gwd@zjnu.cn
引用本文:   
朱友银 王月 张弘 邵姁 李永强 郭卫东. 中国樱桃实时定量PCR(qRT-PCR)内参基因的筛选与鉴定[J]. , 2015, 23(5): 690-700.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/     或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2015/V23/I5/690
 
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