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2025年4月5日 星期六
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猪甲状腺激素应答基因SPOT14 (THRSP)的原核表达及其融合蛋白的亲和纯化
王丛梅1,郭豫杰2,李宏基2,韩立强3,李奎 4,杨国宇2
1. 河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放试验室
2. 河南农业大学农业部动物生化与营养重点实验室
3. 河南农业大学 农业部动物生化与营养重点开放实验室
4. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
Prokaryotic Expression of Porcine Thyroid Hormone Responsive SPOT14 Gene(THRSP) and Affinity Purification of Its Fused Protein
全文: PDF (683 KB)   HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 甲状腺激素应答基因(thyroid hormone responsive SPOT14, THRSP)是受甲状腺激素诱导表达的核内基因,参与脂肪合成代谢途径限速酶的转录调控,对动物脂肪生成具有重要的调控作用。为进一步研究猪SPOT14基因所编码蛋白质的生物学功能,本实验将猪SPOT14(GenBank登录号: JF_951726)的ORF片段与表达载体pET-28α(+)进行重组,获得的重组子pET-28α(+)-S14,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL2l(DE3)感受态细胞,重组菌经IPTG 诱导,通过SDS-PAGE分析显示,目的蛋白分子量约为20.91 kD,且主要以包涵体形式存在,最佳诱导条件是37℃ 1 mmol/L IPTG 诱导5 h。将获得的包涵体用6xHis Ni-NTA纯化柱纯化后,采用Western blot进一步检测到了21 kD目的蛋白的表达。重组质粒pET-28α(+)-S14在大肠杆菌BL21(DE3)中成功地得到了表达,不仅为 SPOT14 基因生物学功能的研究,而且为进一步研究S14蛋白功能, 了解脂肪代谢调控机制提供了基础资料
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作者相关文章
王丛梅
郭豫杰
李宏基
韩立强
李奎
杨国宇
关键词 SPOT14原核表达纯化    
Abstract:Thyroid hormone responsive SPOT14(THRSP), which is a nuclear gene induced by thyroid hormone, expressed predominately in adipose tissue and liver. It is involved in transcriptional regulation of rate-limiting enzymes in lipogenic pathway. It plays an important role on the regulation of animal lipogenesis. In order to further study the function of SPOT14 gene(GenBank accession No. JF951726), the full cDNA was inserted into the expression vector pET28α(+), and the recombinant expression plasmid pET-28α(+)-S14 was transformed into Escherichia coli BL21(DE3). SDS-PAGE analysis of the IPTG induced expression of the pET-28α(+)-S14 showed that the weight of the target protein was about 20.91 kD, the fusion protein was mainly expressed in the inclusion body, and the best induction condition was 1 mmol/L IPTG for 5 h on 37℃. The fused protein with His-tag was purified by 6xHis Ni-NTA affinity chromatography, and a 21 kD protein was detected by Western blot. This study showed that the recombinant vector pET-28α(+)-S14 can express fused protein in BL21, which paves a way for further study on the gene function and protein function of SPOT14 and the regulation of lipometabolism mechanism
Key wordsPig    SPOT14    Prokaryotic expression    Purification
收稿日期: 2012-03-27     
通讯作者: 杨国宇   
引用本文:   
王丛梅1,郭豫杰2,李宏基2,韩立强3,李奎 4,杨国宇2. 猪甲状腺激素应答基因SPOT14 (THRSP)的原核表达及其融合蛋白的亲和纯化[J]. , 2012, 20(8): 901-906.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/     或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2012/V20/I8/901
 
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