|
|
|
| 鸡γ-干扰素基因的瞬时表达及其抗病毒活性检测 |
| 殷喆1,张文龙1,陈伟业2,刘胜旺2,步志高2,王君伟3,吴东来2 |
1. 东北农业大学动物医学学院、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
2. 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所
3. 东北农业大学
|
|
| 鸡γ-干扰素基因的瞬时表达及其抗病毒活性检测 |
|
|
|
摘要 采用PCR技术从质粒pET-ChIFN-γ中扩增得到IFN-γ基因，将其亚克隆到真核表达载体pCAGGS中。将鉴定正确的克隆命名为pCAGGS-ChIFN-γ，体外转染CEF细胞，24小时后经间接免疫荧光（IFA）和免疫印迹（Western-blot）检测，表达蛋白具有良好的免疫原性。然后利用表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组水疱口炎病毒（VSV*GFP）在CEF细胞上检测表达的ChIFN-γ抗病毒活性（AVA），经检测其抗病毒活性为2×103AU/mL，并且其活性可被抗鸡IFN-γ的多克隆抗体阻断。结果表明：ChIFN-γ在鸡胚成纤维(CEF)细胞中成功表达，并且表达的ChIFN-γ具有良好的抗病毒活性。
|
|
| 关键词 ：
鸡γ-干扰素基因,
瞬时表达,
抗病毒活性检测
|
| Abstract：采用PCR技术从质粒pET-ChIFN-γ中扩增得到IFN-γ基因，将其亚克隆到真核表达载体pCAGGS中。将鉴定正确的克隆命名为pCAGGS-ChIFN-γ，体外转染CEF细胞，24小时后经间接免疫荧光（IFA）和免疫印迹（Western-blot）检测，表达蛋白具有良好的免疫原性。然后利用表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组水疱口炎病毒（VSV*GFP）在CEF细胞上检测表达的ChIFN-γ抗病毒活性（AVA），经检测其抗病毒活性为2×103AU/mL，并且其活性可被抗鸡IFN-γ的多克隆抗体阻断。结果表明：ChIFN-γ在鸡胚成纤维(CEF)细胞中成功表达，并且表达的ChIFN-γ具有良好的抗病毒活性。 |
| Key words：
鸡γ-干扰素基因
瞬时表达
抗病毒活性检测
|
|
收稿日期: 2008-12-25
|
|
通讯作者:
殷喆
|
| [1] |
李丽莎 李兰会 李祥龙 彭永东. 水貂PMEL基因启动子活性及转录调控元件分析[J]. , 2017, 25(6): 911-920. |
| [2] |
曹海鹏 裴成成 张晓飞 杨文才. 番茄材料PI128216抗疮痂病T3小种基因Rx4启动子的克隆与分析[J]. , 2015, 23(7): 851-862. |
| [3] |
张琳1,邓荣2,马兰兰1,邓西平2,陈鹏2,杨淑慎3. 小麦3-磷酸-甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)上游序列的克隆及功能验证[J]. , 2014, 22(8): 973-982. |
| [4] |
金太成1,张奇2,赵卓1,杨丽萍1. 利用RNA沉默抑制子HC-Pro提高基因表达的策略[J]. , 2014, 22(7): 870-875. |
| [5] |
王磊1,陈雯2,刘娅2,杨若韵2,阴霞2,马男3,高俊平4. 月季花瓣中农杆菌介导的基因瞬时表达体系的优化及其在RNAi中的应用[J]. , 2014, 22(2): 133-140. |
| [6] |
周平1,何炜2,金光高玉娜4,叶冰莹5,6,陈由强5,6,陈如凯7. 甘蔗SPSⅢ基因组DNA及5'侧翼序列的克隆与分析[J]. , 2014, 22(1): 1-9. |
| [7] |
马亮1,梅晓宏1,许文涛2,罗云波1,周忻1,唐小革1,黄昆仑1. 玉米In5-2启动子功能区域在洋葱瞬时表达系统中的分析[J]. , 2010, 18(6): 1073-1078. |
| [8] |
陈竹1,王忆1,张新忠2,韩德果2,韩振海1. 小金海棠类黄色条纹蛋白基因(MxYSL5)启动子的克隆与表达[J]. , 2010, 18(6): 1084-1090. |
| [9] |
文 静;孔 瑾;王 忆;任 玲;许雪峰;韩振海. 小金海棠Fe3+-螯合还原酶MxFRO2基因启动子的克隆与表达分析[J]. , 2009, 17(1): 114-120. |
|
|
|
|
