猪胸膜肺炎放线杆菌环介导等温扩增检测方法的建立与应用
李佳禾1 ,李一婧1 ,付萍1 ,张跃伟1 ,黄书林1 ,郭盼盼1 ,吴文学2
1.
Detection of Actinobacillus pleuropneumoniae by newly developed loop-mediated isothermal amplification method
, , , , , ,
摘要 本文建立了敏感、特异的胸膜肺炎放线杆菌环介导等温扩增检测方法。以1型胸膜肺炎放线杆菌ApxIV基因片段为靶序列设计了一组引物，并建立了LAMP反应体系，在63℃等温条件下反应45min，最低能检测到102个拷贝的目的基因，敏感性是PCR方法的10倍。通过对1～10型胸膜肺炎放线杆菌、多杀巴氏杆菌、链球菌、支原体等18种病原微生物的检测，证明该法具有很强的种特异性。另外，通过对8头实验感染猪和127份临床发病猪的鼻拭子的检测发现，该法对鼻拭子中胸膜肺炎放线杆菌的检出率为100%，优于PCR方法。
关键词 ：
LAMP ,
胸膜肺炎放线杆菌 ,
PCR ,
检测
Abstract ：Here, we report a loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay with high sensitivity and specificity for the detection of Actinobacillus pleuropneumoniae. A set of six primers were designed, based on the ApxIV gene of A. pleuropneumoniae serotype 1. The detection limit of the LAMP assay completed within 45min at 63℃was 102 copies of the target sequence, which is 10 times more sensitive than the PCR assay. High species-specificity of the LAMP method were confirmed by the assay of 18 pathogens such as A. pleuropneumoniae serotypes 1~10, Pasteurella multocida, Streptococcus suis, Mycoplasma hyopneumoniae . In addition, All the nasal swab samples from 8 experimental infected pigs and 127 clinical cases were detected by LAMP assay, with a higher sensitivity than the PCR assay.
Key words ：
LAMP
Actinobacillus pleuropneumoniae
PCR
detection
收稿日期: 2009-04-10
通讯作者:
吴文学
引用本文:
李佳禾1 ,李一婧1 ,付萍1 ,张跃伟1 ,黄书林1 ,郭盼盼1 ,吴文学2 . 猪胸膜肺炎放线杆菌环介导等温扩增检测方法的建立与应用[J]. , 2009, 17(6): 948-953.
链接本文:
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/ 或 http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2009/V17/I6/948
[1]
倪鹤嘉, 程雪, 王静, 高泽平, 魏盼盼, 谭佳丽, 孙敬, 李海涛, 高继国. 辽宁省部分地区对鳞翅目害虫高毒力的苏云金芽胞杆菌菌株的分离与筛选
[2]
谢实龙, 汪小福, 丁晨露, 祝旋, 汤婷, 马同富, 蔡健, 徐俊锋. 转基因大豆MON89788实时荧光重组酶聚合酶扩增检测方法的建立
[3]
何海健, 吴瑗, 刘正奎, 王志鹏, 陈琳, 王磊, 宋厚辉, 王晓杜. 鉴别猪流行性腹泻病毒基因型的一步法双重qRT-PCR
[4]
陈昌龙, 赵雪, 孙旺旺, 李晓颖, 田宇, 李未然, 谢华. 大白菜软腐病抗性相关基因分子标记的开发
[5]
李华伟, 刘中华, 张鸿, 许泳清, 李国良, 林赵淼, 许国春, 邱永祥, 纪荣昌, 罗文彬, 汤浩, 邱思鑫. 甘薯卷叶病毒LAMP快速检测技术的建立及应用
[6]
钱正, 张四杰, 金有权, 张新凤. 柳叶蜡梅叶和花转录组测序及香气合成差异基因的筛选和表达
[7]
林裕胜, 李莎莎, 江锦秀, 张靖鹏, 游伟, 胡奇林. 绵羊肺炎支原体和丝状支原体山羊亚种双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立及应用
[8]
朱丰晓, 陈家璐, 张智俊. 竹花叶病毒SYBR GreenⅡ 反转录实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
[9]
刘东让, 侯喜林, 肖栋. 不结球白菜抗病相关基因BcSGT1 的克隆及表达分析
[10]
高鸿蒙, 张秀英, 张慧泽, 哈斯其木格, 周旭光, 魏健民, 于中正. 乌珠穆沁羊LPL 基因第3外显子多态性与肉质性状的关联分析
[11]
杨大鹏, 何玉琴, 葛闻博, 张全伟, 华道才让, 王霞, 周凯仁, 陈卫刚. 甘加藏羊发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴中MTR1a 基因的表达分析
[12]
沈肖玲, 易建平, 王荣洲, 钱俊婷, 李艳敏, 姚海峰, 楼兵干. 甘薯茎腐病菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用
[13]
陈翠腾, 陈珍, 朱春华, 蔡国漳, 刘斌琼, 黄瑜. 鸭腺病毒3型MGB TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立
[14]
刘燕, 袁律峰, 季权安, 韦强, 肖琛闻, 李科, 黄叶娥, 鲍国连. 冷应激对兔波氏杆菌感染传播的影响
[15]
张雪, 王荔, 瞿飞, 杨胜俊. 红梨实时荧光定量PCR内参基因的筛选
