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2025年8月13日 星期三
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真核双顺反子表达载体pcDNA3.1AB的构建与表达
邓飞 文心田 曹三杰 黄小波 杨恒
四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室 四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室 四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室 四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室 四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室
Construction and Expression of Eukaryotic Bicistronic Expression Vector pcDNA3.1AB
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摘要 为了构建由双CMV启动子调控的真核双顺反子表达载体pcDNA3.1AB,首先在pcDNA3.1(+)的基础上,构建出pcDNA3.1A和pcDNA3.1B,通过PCR扩增pcDNA3.1A上含-PCMV-MCS-BGHpolyA-表达单元的片段,定向克隆入pcDNA3.1B,即得载体pcDNA3.1AB。将DsRed与EGFP基因插入pcDNA3.1AB,分别构建pcDNA-DsRed、pcDNA-EGFP和pcDNA-DsRed-EGFP。质粒转染COS-7细胞瞬时表达,用荧光显微镜进行检测。结果双价质粒pcDNA-DsRed-EGFP能同时表达红色和绿色荧光蛋白基因,两基因表达强度无显著差异,且双价与单价质粒相比荧光蛋白表达强度相当。双顺反子表达载体pcDNA3.1AB的成功构建和表达,为进行基因表达及双价核酸疫苗的研究奠定了基础。
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邓飞文心田曹三杰黄小波杨恒
关键词 双顺反子载体构建红色荧光蛋白绿色荧光蛋白    
Abstract:To construct a bicistronic expression vector pcDNA3.1AB controlled by two CMV promoters,pcDNA3.1A and pcDNA3.1B were constructed first by reforming the MCS of pcDNA3.1(+).The PCR product of-PCMV-MCS-BGHpolyA-from pcDNA3.1A was inserted into pcDNA3.1B to form pcDNA3.1AB.DsRed gene and EGFP gene were inserted into pcDNA3.1AB to construct pcDNA-DsRed,pcDNA-EGFP and pcDNA-DsRed-EGFP.The recombinants were transfected and transiently expressed in COS-7 cells and detected by fluorescence microscope. DsRed and EGFP were coexpress in pcDNA-EGFP-DsRed, and the fluorescence intensity had no significant deviation.The fluorescence intensity was similar between monocistronic and bicistronic vectors.The successful construction and expression of pcDNA3.1AB lay foundation for the advance research of gene expression and bigem DNA vaccine.
Key wordsBicistronic    Vector construction    Red fluorescent protein    Green fluorescent protein
收稿日期: 2008-02-29     
通讯作者: 曹三杰   
引用本文:   
邓飞 文心田 曹三杰 黄小波 杨恒. 真核双顺反子表达载体pcDNA3.1AB的构建与表达[J]. , 2008, 16(6): 0-.
. Construction and Expression of Eukaryotic Bicistronic Expression Vector pcDNA3.1AB. , 2008, 16(6): 0-.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/      或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2008/V16/I6/0
 
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