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2025年7月31日 星期四
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Prokaryotic Expression of Mouse Sox2 Gene and Preparation of Its Polyclonal Antibody
雷蕾1,崔欣欣2,张淑金2,王华岩3
1. 陕西杨凌西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术研究中心
2.
3. 西北农林科技大学 动物医学院 干细胞中心
Prokaryotic Expression of Mouse Sox2 Gene and Preparation of Its Polyclonal Antibody
全文: PDF (787 KB)   HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 Sox2基因是近年来发现在胚胎干细胞(ES细胞)中特异性表达的基因,它在ES细胞维持自我更新能力中扮演重要角色。本研究以小鼠Sox2基因为目的基因,通过PCR 扩增基因,将其克隆到pGEM-T载体,然后再亚克隆到pET-41a载体上。利用pET-41a表达载体构建原核表达系统,将其转入BL21(DE3)工程菌株中表达Sox2融合蛋白。优化蛋白表达条件,提高蛋白表达效率。并利用western blotting对表达产物进行鉴定。经Western blotting检测证实该蛋白约60 kD,并具有GST 抗原活性,证实目的蛋白为Sox2蛋白。然后利用SDS-PAGE 回收蛋白用于制备Sox2蛋白多克隆抗体。为深入研究Sox2 的功能作用以及ES细胞自我更新功能的分子机制打下基础。
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作者相关文章
雷蕾
崔欣欣
张淑金
王华岩
关键词 Sox2基因原核表达抗体大肠杆菌    
Abstract:Sox2, one of genes which express in embryonic stem (ES) cells, plays an important role in self renewal of ES cells, and is used to make induced pluripotent stem (iPS) cells. In this study, we subcloned mouse (Mus muscules) full-length Sox2 cDNA and inserted Sox2 into pET-41a expression vector. Then the recombinant vector was transformed into Escherichia coli BL21 (DE3) cells to express Sox2 fusion protein. The expressed products were identified by Western blot using anti-GST antibody. The result indicated that the size of Sox2 fusion protein was in 61 kD. And the protein was recovered from the SDS-PAGE. And we used the sox2 fusion protein to prepare polyclonal antibody. The Dot blotting result showed that the anti-Sox2 antiserum had 1∶12,800 titers. The antibody will be useful for studying the function of Sox2 and its role in ES cell self-renewal.
Key wordsSox2    prokaryotic expression    antibody    E.coli
收稿日期: 2010-02-12     
通讯作者: 王华岩   
引用本文:   
雷蕾1,崔欣欣2,张淑金2,王华岩3. Prokaryotic Expression of Mouse Sox2 Gene and Preparation of Its Polyclonal Antibody[J]. , 2010, 18(6): 1163-1167.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/     或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2010/V18/I6/1163
 
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