牛白细胞介素18的原核表达及其生物学活性研究
田兆菊 郑玉姝 刘翠燕 胡敬东
山东农业大学动物科技学院 河南科技学院动物科学学院 山东农业大学动物科技学院 山东农业大学动物科技学院
Expression and activity assay of recombinant bovine interleukin-18 in E.coli
摘要 将牛白细胞介素18(bovine interleukin-18,BoIL-18)的成熟蛋白基因亚克隆到原核表达载体pGEX6p-1中，并在宿主菌BL21（DE3）中进行表达；用BoIL-18在昆虫细胞中的表达产物制备的兔多克隆抗体作为一抗进行Western blot分析；采用亲和层析法，对表达产物进行纯化；利用MTT染色法研究重组BoIL-18（re BoIL-18）对牛外周血单核细胞(PBMC) 增殖的促进作用；采用双抗体夹心ELISA法研究reBoIL-18诱导脾淋巴细胞产生IFN-γ的情况；采用微量细胞病变抑制法检测reBoIL-18对VSV导致细胞病变的抑制作用。结果:得到了BoIL-18的高效表达产物，表达量为31.8％，Western blot 显示，在44KD处有一特异性条带；纯化后获得了纯度较高的reBoIL-18蛋白；纯化的BoIL-18对PBMC增殖具有明显的促进作用，并且能够促进IFN-γ的诱生和抑制VSV病毒的活性。
关键词 ：
牛白细胞介素18 ,
原核表达 ,
纯化 ,
生物学活性测定
Abstract ：To express the bovine interleukin-18(BoIL-18) protein, cDNA fragment encoding the mature BoIL-18 protein was subcloned into pGEX6p-1 and transformed into E.coli BL21(DE3) . The expressed BoIL-18 protein was purified by affinity Chromatography. MTT method ,ELISA method and VSV were used to assay the functional activity of BoIL-18 protein. Results: The recombinant BoIL-18 was highly expressed in E.coli and purified by affinity Chromatography method. The reBoIL-18 could enhance the proliferation of PBMC, induce IFN-γproducing in spleen lymphocyte. Conclusion: The purified reBoIL-18 has functional activity and can be applied for further studies.
Key words ：
Bovine Interleukin-18
prokaryotic Expression
Purification
Activity assay
收稿日期: 2006-10-24
通讯作者:
田兆菊
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