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2025年4月5日 星期六
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一种高效制备慢病毒表达载体的方法
于福先1,陈晓宇2,朱治伟2,潘建治1
1. 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所
2.
A Method for Highly Efficient Preparation of Lentivirus Expression Vector
全文: PDF (1528 KB)   HTML (1 KB) 
输出: BibTeX | EndNote (RIS)      
摘要 慢病毒表达载体具有感染宿主广和基因组整合效率高的优点,因此在转基因动物的制备中得到广泛应用。本研究构建了含有红色荧光和绿色荧光的慢病毒表达载体,用磷酸钙转染法将三质粒慢病毒载体转染293T细胞,转染效率达72%,降低了慢病毒的生产成本。在进行慢病毒的浓缩与纯化时,通过超速度离心和超滤相结合的方法,在150 mL的慢病毒原液中经纯化后得到80 μL效价为2.38×109 TU/mL的慢病毒颗粒。获得的高效价双荧光慢病毒表达载体可为后续双基因转基因动物的制备提供可靠的制作途径与检测基础。
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作者相关文章
于福先
陈晓宇
朱治伟
潘建治
关键词 慢病毒载体,双荧光,病毒纯化,病毒效价    
Abstract:Due to the characterization of infect a broad range of cell strains and high efficiency of integrate into genome of the cells, lentivirus vector has been widely used in preparation of transgenic animals. This research aims to produce a high level titer lentivirus with relatively lower cost, we constructed the lentivurus vector which contained the green fluorescent protein and red fluorescent protein, after transfect the three lentivirus vectors into the 293T cells with calcium phosphate transfection mathod, the transfection efficiency up to 72%, this method reduced the cost to produce lentivirus vector. We used high speed centrifugation and ultracentrifuge method to purify the lentivirus vector, after the purification and concentration we got the 80 μL purified lentivirus vector with the titer up to 2.38×109 TU/mL from 150 mL packaged culture medium. This lentivirus vector can be used for producting double foreign genes transgenic animals and comparing the effect of the two different report genes in screening of the transgenic offspring.
Key wordslentivirus vector; double fluorescent; virus purification; virus titer
收稿日期: 2010-09-20     
通讯作者: 潘建治   
引用本文:   
于福先1,陈晓宇2,朱治伟2,潘建治1. 一种高效制备慢病毒表达载体的方法[J]. , 2011, 19(3): 583-588.
链接本文:  
http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/     或     http://journal05.magtech.org.cn/Jwk_ny/CN/Y2011/V19/I3/583
 
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