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| 海洋枯草芽孢杆菌UMBR1027产抑金黄色葡萄球菌活性蛋白分离鉴定及发酵条件优化 |
| 石灵芳,姜明国,吴家法,杨立芳,刘洪存,耿丽媛,吴霜,张政 |
| 广西民族大学海洋与生物技术学院 |
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| Isolation, Identification of the Antimicrobial Protein on Staphyloccus aureus and Optimization of Fermentation Process from Marine Bacillus subtilis UBMR1027 |
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摘要 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种能引起严重传染性疾病的人兽共患病原菌，由于其严重的致病性及其易产生耐药性的特点，使得探索新的具有活性的药物的需求越发迫切。为了研究对S. aureus有抑制作用的活性蛋白，本实验采用硫酸铵沉淀法对海洋枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) UMBR1027产抑S. aureus活性蛋白进行提取，并利用葡聚糖凝胶SephadexLH-20柱层析、十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE)凝胶电泳进行分离、ABI 4800 plus MALDI-TOF进行鉴定；为了提高活性蛋白在B. subtilis UMBR1027发酵过程中的产量实验采用滤纸片扩散法，以抑菌圈直径为指标，分别从培养基pH、培养基的盐度以及培养温度这3个关键因素对B. subtilis UMBR1027产抑S. aureus活性蛋白的影响进行考察，并设计Box-Behnken实验以优化其发酵条件。结果显示活性蛋白主要含有碱性丝氨酸蛋白酶、α-淀粉酶、枯草杆菌蛋白酶和内切-β-1,3-1,4葡聚糖酶，优化实验得出B. subtilis UMBR1027产活性蛋白的最佳发酵条件组合为培养基pH为6.95、培养基盐度为10.38%、发酵培养温度为34.95 ℃；拟合实验中选取发酵培养基pH为6.95，发酵培养基盐度为10.38%，发酵温度为35 ℃进行验证，抑菌圈直径为20.4 mm，与理论值基本吻合。本研究对B. subtilis UMBR1027所产抗菌粗蛋白进行了分离，并成功对抗菌粗蛋白分离纯化后的各个部分进行了鉴定。响应曲面法有效提高了B. subtilis UMBR1027产抑制S. aureus的抗菌蛋白类物质，此研究为探索来自海洋的活性抗菌蛋白类天然药物分子奠定基础。
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